导读:本文包含了融合表达载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,基因,蛋白,病毒,催乳素,建兰,拮抗剂。
融合表达载体论文文献综述
朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯[1]（2019）在《鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建》一文中研究指出为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年10期）
徐荣,吴清莲,孟玉,陈疏影,王先宏[2]（2019）在《2A肽介导的割手密ScNAC1、ScDREB融合基因表达载体构建》一文中研究指出【目的】本研究旨在构建适合甘蔗遗传转化的双基因表达载体,用于提高甘蔗栽培品种的抗旱能力,并探讨基因表达规律及互作效应。【方法】本研究以前期课题组在割手密中克隆到的具有抗旱功能ScNAC1和ScDREB为目的基因,以对单子叶植物高效、专一的Ubiquitin为启动子,以适于单子叶植物遗传转化的表达载体pCAMBIA1300-nu为基础载体,利用改造后的FMDV2A多肽进行连接,采用重迭延伸PCR(简称SOE PCR)将ScNAC1和ScDREB基因相融合,利用同源重组的方法连接表达载体。【结果】经PCR验证获得约2000 bp的目的条带,利用BamH I与Sac I双酶切,切出了载体的1条大片段和连接目的基因的3条小片段,测序结果验证扩增产物的正确性,融合基因在扩增过程中无突变发生。【结论】本研究成功构建了符合需要的融合基因表达载体,为后期甘蔗的遗传转化研究奠定了基础。(本文来源于《西南农业学报》期刊2019年07期）
左登攀,陈相儒,赵添羽,张永亮,王颖[3]（2019）在《N端融合检测标签的pMDC32植物表达载体系列的构建》一文中研究指出Gateway植物表达载体pMDC32主要组成元件包括启动子、Gateway盒(attR1-ccdB-attR2)、终止子和用于选择转基因植物的筛选标记基因。所用的启动子是组成型启动子为烟草花叶病毒(CaMV)双增强启动子(2×CaMV 35S)。本实验室已在表达载体pMDC32attR2区C端插入3*Flag序列的pMDC32-MCS-3*flag载体,为了便于实验中目的基因N端融合检测标签,本文在以pMDC32为骨架基础上进一步构建了可在目的蛋白N端带有3*Flag、3*HA和3*Flag-3*HA检测标签的系列表达载体,分别命名为pMDC32-3*Flag-MCS、pMDC32-3*HA-MCS和pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS,3种载体构建策略分别如下。首先合成了3*Flag-3*HA基因并连在pUC57-simple-225载体上,通过KpnⅠ/Sa/Ⅰ双酶切获得3*Flag-3*HA (KpnⅠ/SalⅠ)片段,插入已用KpnⅠ/SalⅠ双酶切获得pMDC32 (KpnⅠ/SalⅠ)线性化载体中,获得重组载体pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端可使用HindIII/SalⅠ酶切位点,3′端可使用PacⅠ/SpeⅠ/SacI)。pMDC32-3*Flag-MCS构建首先基于携带3*Flag-3×HA基因的pUC57-simple-225载体PCR扩增3*Flag(KpnⅠ/SpeI)片段,再将3*Flag(KpnⅠ/SpeⅠ)片段插入已用KpnⅠ/SpeⅠ双酶切获得的pMDC32 (KpnⅠ/SpeⅠ)线性化载体中,获得pMDC32-3*Flag-MCS重组载体,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端使用SPeI酶切位点,3′端使用SacⅠ)。pMDC32-3*HA-MCS构建以pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS载体以BamHI/BglⅡ进行双酶切后回收pMDC32-3*HA的载体,自连接获得pMDC32-3*HA-MCS重组载体,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端可使用HindⅢ/SalⅠ酶切位点,3'端可使用PacⅠ/SpeⅠ/SacⅠ)。本实验对Gateway表达载体pMDC32改造后获得N端带有检测标签的载体,均能够在植物中进行瞬时表达目的基因及进行转基因遗传转化,并获得很好的表达效果,为重要基因功能研究及植物遗传转化获得转基因遗传材料提供了便利。(本文来源于《中国植物病理学会2019年学术年会论文集》期刊2019-07-20）
王文旭,郁飞[4]（2019）在《红色荧光蛋白融合表达载体的构建和蛋白质细胞内定位研究》一文中研究指出为进一步研究目的蛋白质在细胞内的定位,构建融合了红色荧光蛋白mCherry或mScarlet的表达载体。选取VTI12、RabD2a、ARA7以及SYP61等4个定位基因来构建红色荧光蛋白融合表达载体。根据TAIR数据库中相关蛋白质的基因序列设计引物,通过PCR技术扩增序列并将其分别连接到已制备好的红色荧光蛋白融合表达载体上,制备得到质粒后转化入原生质体进行瞬时表达。结果表明,成功构建了pUC18HE-NmCherry-VTI12、pUC18HE-NmCherry-RabD2a、pUC18-mScarlet NT-ARA7以及pUC18-mScarlet NT-SYP61等4个红色荧光蛋白融合表达载体,并且成功在拟南芥叶肉细胞原生质体中瞬时表达。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年08期）
顾丽,王成华,苏凯丽,王学鑫,苏燕[5]（2019）在《双靶点抗乳腺癌融合蛋白Del1-9-G129R-endostatin真核表达载体的设计构建》一文中研究指出目的:构建双靶点抗乳腺癌融合蛋白Del1-9-G129R-endostatin的真核表达载体。方法:以质粒pET22b(+)Del1-9-G129R-hPRL为模板,PCR扩增首尾端带有HindⅢ和BamHI识别序列的目的基因Del1-9-G129R-hPRL,用于融合基因合成,同时扩增首尾端带有HindⅢ和KpnI的单基因作为对照。提取人肝脏总RNA,利用RT-PCR技术扩增两端带有BamHI、KpnI以及HindⅢ、KpnI识别序列的目的DNA片段Endostatin,分别用于融合基因合成和单基因对照。采用重迭延伸PCR技术,将以上二单基因作为模板,扩增首尾端带有HindⅢ和KpnI识别序列的融合蛋白Del1-9-G129R-endostatin基因片段。目的基因插入T载体测序正确后,克隆入pEGFP-N1真核表达载体。结果:DNA测序结果显示融合蛋白cDNA序列与GenBank中完全一致。结论:成功构建融合蛋白真核表达载体pEGFP-N1-Del1-9-G129R-endostatin,为下一步在体外细胞水平研究融合蛋白生物学活性做好准备。(本文来源于《包头医学院学报》期刊2019年04期）
李倩,李向茸,马瑞仙,李生军,王兴陇[6]（2019）在《脑心肌炎病毒衣壳蛋白VP3真核表达载体pCMV-HA-VP3的构建及融合表达》一文中研究指出为构建脑心肌炎病毒(EMCV)衣壳蛋白VP3的真核表达载体pCMV-HA-VP3,以期实现其在HEK293、BHK21及HeLa这叁种不同细胞中的表达。提取脑心肌炎病毒RNA,通过RT-PCR、酶切与连接等方法构建重组质粒pCMV-HA-VP3,将表达载体转染进HEK293、BHK21及HeLa这叁种不同细胞中,利用RT-PCR进行基因表达情况检测,采用Western-blotting和IFA对融合蛋白在这叁种不同细胞中的表达及定位情况进行分析。结果显示,成功构建了衣壳蛋白VP3的真核表达载体pCMV-HA-VP3,并且实现了VP3和HA标签在叁种细胞中的融合表达,其在HEK293细胞中表达量最高,其次为BHK21细胞,表达量最低的是HeLa细胞。结果表明,表达的VP3蛋白具有抗原性,且在细胞膜、细胞浆和细胞核中均有分布,为深入研究衣壳蛋白VP3的功能及在EMCV感染过程中筛选与宿主细胞互作的蛋白夯实了基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年02期）
郑亮,邹德华,程丽鑫,李兴志,张雅婷[7]（2018）在《猪流行性腹泻病毒E基因真核表达载体的构建及融合蛋白的表达》一文中研究指出E蛋白是猪流行性腹泻病毒的小膜蛋白,为了研究E蛋白在病毒侵染宿主细胞过程中的作用,构建了PEDV E基因的真核表达载体。通过RT-PCR技术扩增E基因片段,经双酶切连接至pEGFP-N1载体,酶切鉴定及测序结果证实PEDV E基因成功克隆到pEGFP-N1中,并将重组质粒命名为pEGFP-N1-E。将pEGFP-N1-E转染He La,利用Western Blot和免疫荧光技术检测pEGFP-N1-E的表达以及定位情况,结果显示pEGFP-N1-E在He La细胞中成功表达,并且在胞质胞核均匀分布。结果表明:pEGFP-N1-E已被成功构建,并且在He La细胞中正确表达。为后续研究关于E基因的功能及其在抗病毒中所发挥的作用等方面奠定了研究基础。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学学报》期刊2018年04期）
梁芳,邓祖丽颖,许申平,张燕,崔波[8]（2018）在《蝴蝶兰2种病毒的同步检测及其CP融合反义表达载体构建》一文中研究指出【目的】建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)是侵染蝴蝶兰最主要的2种病毒,给蝴蝶兰产业造成巨大经济损失。本文建立了快速检测这2种病毒的方法,并为培育同时抗CyMV和ORSV的蝴蝶兰新品种奠定基础。【方法】根据2种病毒CP基因序列设计了2对特异性引物,运用RT-PCR方法同时检测这2种病毒,利用反义RNA技术构建2种病毒CP基因的融合表达载体。【结果】利用设计的特异性引物检测12株蝴蝶兰样品,有25%同时检测出2种病毒,在同一PCR反应体系中,扩增出2个目的条带清晰无杂带。从感病蝴蝶兰叶片总RNA中克隆出CyMV CP基因的125 bp片段和ORSV CP基因的164 bp片段。将CyMV的CP基因片段以3’→5’方向与表达载体p CAMBIA1300连接,命名为p CAMBIA1300-CyMV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得125 bp的小片段;再将ORSV的CP基因片段以3’→5’方向与p CAMBIA1300-CyMV连接,命名p CAMBIA1300-CyMV-ORSV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得289 bp的片段。【结论】所设计的2对特异性引物能够在同一PCR体系中快速高效地检测出CyMV和ORSV,含2种病毒CP基因的反义融合表达载体构建成功。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年08期）
肖旭倩,胡正龙,沈文涛,言普,王冬梅[9]（2018）在《A/O型FMDV多抗原表位融合基因植物表达载体构建及转化柱花草的研究》一文中研究指出【目的】获得含有A/O型FMDV多抗原表位融合基因4种不同组合的转基因柱花草植株。【方法】用限制性内切酶Xba I和Sac I双酶切4个中间载体和质粒pBI121,回收连接后获得4个重组植物表达载体(pBI-xsB/xs T/xsBT/xsBTT)及相应农杆菌工程菌株,利用农杆菌介导法转化热研2号柱花草(Stylosanthes guianensis cv.ReyanⅡ)子叶叶盘。采用卡那霉素筛选,特异引物和转基因检测引物进行PCR及RT-PCR检测不同组合多抗原表位融合基因的转录情况。【结果】获得36株抗性转化株,经PCR检测有16株为阳性,RT-PCR检测后有11株为阳性,表明4种组合多抗原表位融合基因在转基因植株中获得转录。【结论】此研究为进一步揭示同型与异型FMDV之间多抗原表位基因不同融合方式的免疫原性和免疫效果奠定了研究基础。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年08期）
贡鑫[10]（2018）在《鸡IL-2与IL-4融合基因表达载体的构建、表达及体外生物学活性研究》一文中研究指出为了提高鸡球虫病活疫苗免疫效果,增强免疫保护力,降低活疫苗副作用,缩短免疫产生期,通过以鸡白介素4(chIL-4)和鸡白介素2(chIL-2)为研究对象,构建新型细胞因子免疫佐剂chIL-4和chIL-2融合基因表达载体,研究该融合基因的佐剂作用。试验结果表明:(1)采用基因合成与双酶切连接技术,经测序鉴定成功构建携带鸡白介素4、鸡白介素2以及二者融合基因的重组真核表达载体pCI-chIL-4-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP和pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP。(2)采用HilyMax脂质体介导方法转染小鼠成肌细胞C2C12,对转染条件进行优化,在荧光显微镜下观察,通过IPP软件分析其累计光密度值。结果表明,重组载体pCI-chIL-2-EGFP能在小鼠成肌细胞内正确表达,DNA与Hilymax脂质体比例为1:3时细胞转染率最高(29.65%±2.58%),转染72h后蛋白表达量达到最高。(3)将构建的 pCI-chIL-4-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP 和 pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP 叁种重组质粒转染鸡胚盲肠上皮细胞、鸡胚成纤维细胞,24h-96hmRNA表达量均先升高后降低,48h极显着(P<0.01)高于其他时间段,达到峰值;累积光密度值先升高后降低,72h显着(P<0.05)或极显着(P<0.01)高于24h和48h,达到峰值,到96h已检测不到;细胞上清液荧光强度先升高后降低,72h极显着(P<0.01)高于其余叁个时间段,达到峰值。转染小鼠成肌细胞24h-96h,mRNA和蛋白表达量均先升高后降低,mRNA 48h和蛋白72h极显着高于其他时间段,达到峰值;细胞上清液荧光强度先升高后降低,72h极显着(P<0.01)高于其余叁个时间段,达到峰值,表明叁种重组质粒均能在叁种细胞中进行表达,并能持续72h以上,叁种重组蛋白均能分泌到细胞外,并在72h达峰值。(4)pCI-chIL-4-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP 和 pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP 叁种重组质粒转染鸡胚盲肠上皮细胞、鸡胚成纤维细胞和小鼠成肌细胞叁种细胞24h-96h的上清液均能极显着(P<0.01)促进鸡脾淋巴细胞的增殖,刺激指数均先升高后降低,72h达峰值,表明叁种重组蛋白都具有生物学活性;而pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP重组质粒转染细胞的上清液对鸡脾淋巴细胞的增殖极显着(P<0.01)高于另外两种重组质粒,表明chIL-4-chIL-2融合蛋白的生物学活性显着高于chIL-4重组蛋白或chIL-2重组蛋白。(本文来源于《山西农业大学》期刊2018-06-01）
融合表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】本研究旨在构建适合甘蔗遗传转化的双基因表达载体,用于提高甘蔗栽培品种的抗旱能力,并探讨基因表达规律及互作效应。【方法】本研究以前期课题组在割手密中克隆到的具有抗旱功能ScNAC1和ScDREB为目的基因,以对单子叶植物高效、专一的Ubiquitin为启动子,以适于单子叶植物遗传转化的表达载体pCAMBIA1300-nu为基础载体,利用改造后的FMDV2A多肽进行连接,采用重迭延伸PCR(简称SOE PCR)将ScNAC1和ScDREB基因相融合,利用同源重组的方法连接表达载体。【结果】经PCR验证获得约2000 bp的目的条带,利用BamH I与Sac I双酶切,切出了载体的1条大片段和连接目的基因的3条小片段,测序结果验证扩增产物的正确性,融合基因在扩增过程中无突变发生。【结论】本研究成功构建了符合需要的融合基因表达载体,为后期甘蔗的遗传转化研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
融合表达载体论文参考文献
[1].朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯.鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建[J].中国畜牧兽医.2019
[2].徐荣,吴清莲,孟玉,陈疏影,王先宏.2A肽介导的割手密ScNAC1、ScDREB融合基因表达载体构建[J].西南农业学报.2019
[3].左登攀,陈相儒,赵添羽,张永亮,王颖.N端融合检测标签的pMDC32植物表达载体系列的构建[C].中国植物病理学会2019年学术年会论文集.2019
[4].王文旭,郁飞.红色荧光蛋白融合表达载体的构建和蛋白质细胞内定位研究[J].江苏农业科学.2019
[5].顾丽,王成华,苏凯丽,王学鑫,苏燕.双靶点抗乳腺癌融合蛋白Del1-9-G129R-endostatin真核表达载体的设计构建[J].包头医学院学报.2019
[6].李倩,李向茸,马瑞仙,李生军,王兴陇.脑心肌炎病毒衣壳蛋白VP3真核表达载体pCMV-HA-VP3的构建及融合表达[J].中国兽医科学.2019
[7].郑亮,邹德华,程丽鑫,李兴志,张雅婷.猪流行性腹泻病毒E基因真核表达载体的构建及融合蛋白的表达[J].黑龙江八一农垦大学学报.2018
[8].梁芳,邓祖丽颖,许申平,张燕,崔波.蝴蝶兰2种病毒的同步检测及其CP融合反义表达载体构建[J].西南农业学报.2018
[9].肖旭倩,胡正龙,沈文涛,言普,王冬梅.A/O型FMDV多抗原表位融合基因植物表达载体构建及转化柱花草的研究[J].西南农业学报.2018
[10].贡鑫.鸡IL-2与IL-4融合基因表达载体的构建、表达及体外生物学活性研究[D].山西农业大学.2018
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