导读:本文包含了破骨细胞形成抑制因子论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:因子,细胞,抑制,大肠杆菌,凋亡,活性,肿瘤。
破骨细胞形成抑制因子论文文献综述
肖海龙,任爱霞,张耀洲[1]（2005）在《破骨细胞形成抑制因子TNFR结构区在大肠杆菌中表达、抗体制备及活性测定》一文中研究指出破骨细胞形成抑制因子(OPG)对骨的重建与再吸收有重要调节作用,其TNFR结构区行使抑制破骨细胞形成与活性的功能。通过PCR将该区基因片段克隆出来,插入表达载体PET-28a质粒多克隆位点,重组质粒转入大肠杆菌BL21中进行表达,表达产物以包涵体形式存在,包涵体经变性复性后,亲合层析获得重组蛋白。纯化的产物作为抗原免疫兔,得到较高特异性的兔源多克隆抗体。利用小鼠降血钙实验检测变性复性后产物的活性,结果表明该重组蛋白有一定的生物活性。(本文来源于《遗传》期刊2005年05期）
张兴群,王梁华,焦炳华,袁勤生[2]（2005）在《人破骨细胞形成抑制因子活性域片段在大肠杆菌中的融合表达》一文中研究指出目的 在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (Osteoclastogenesisinhibitoryfactor,OCIF)活性域片段。方法 从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA ,利用RT PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA ,将其与pMD18 T连接 ,转化大肠杆菌K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18 OCIFAD ,经双酶切得到OCIF活性域编码片段 ,将其插入pMAL c2载体中 ,转化大肠杆菌TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。结果 所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS PAGE分析可见在相对分子质量 6 0 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Westernblot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应。结论 已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆 ,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2005年02期）
肖海龙[3]（2005）在《破骨细胞形成抑制因子（OPG）的表达纯化及功能研究》一文中研究指出破骨细胞形成抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF或称osteoprotrgerin,OPG)是最近发现的具有降血钙作用和防止骨流失的一种新的可以调节骨密度的分泌型糖蛋白。OPG作为一种新发现的蛋白质,具有很高的研究意义和开发价值。目前,OPG主要是通过CHO细胞表达体系来表达的,但这种方法表达量低,且成本高。所以我们的目标是利用基因工程技术,探索一种或几种理想的表达系统用以大量制备具有生物活性的重组蛋白。 破骨细胞形成抑制因子(OPG)对骨的重建与再吸收有重要调节作用,其TNF结构区行使抑制破骨细胞形成与活性的功能。通过PCR将该区基因片段扩增出来,命名为OPG-T。为了探讨利用大肠杆菌大规模生产重组OPG蛋白的可能性,将OPG、OPG-T及突变体基因OPG-372插入表达载体PET-28a质粒多克隆位点,重组质粒转入大肠杆菌BL21中分别进行表达研究。结果表明OPG和OPG-372存大肠杆菌中表达量较低。而OPG-T能得到高效表达。表达产物以包涵体形式存在,包涵体经变性复性后,亲合层析获得重组蛋白。纯化的产物作为抗原免疫兔,得到较高特异性的兔源多克隆抗体。利用小鼠降血钙实验检测所表达的重组蛋白OPG-T的活性,结果表明该蛋白有一定的生物活性。 由于大肠杆菌体系表达OPG不是太理想,我们将破骨细胞形成抑制因子OPG及变体OPG-372基因克隆于昆虫病毒转移载体pBacPAK8中,获得重组转移载体pBacPAK8-OPG、pBacPAK8-OPG-372,将它们与线性化的Bm-BacPAK6病毒DNA共转染家蚕细胞,经体内重组,挑斑筛选,获得Bm-OPG和Bm-OPG-372重组病毒。经Southern Blot分析,表明两种重组病毒基因组中分别含OPG和OPG-372基因。将Bm-OPG和Bm-OPG-372重组病毒分别在家蚕细胞和幼虫表达,SDS-PAGE和Western blot分析结果表明OPG、OPG-372基因被表达,并发现家蚕细胞表达的rh-OPG、rh-OPG-372分子量分别约为43kD和42kD,而在家蚕幼虫的表达产物分别约为55kD和46kD,rh-OPG在家蚕幼虫的表达产物还有二聚体的形式。 为了对OPG在家蚕表达体系中的表达情况进行进一步的研究,我们利用(本文来源于《浙江大学》期刊2005-02-01）
张兴群,王梁华,袁勤生2,缪辉南,焦炳华[4]（2004）在《人破骨细胞形成抑制因子成熟肽基因在大肠杆菌中的融合表达》一文中研究指出目的 :在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)成熟肽基因。方法 :利用 PCR从人肝细胞文库中扩增得到 OCIF成熟肽编码基因序列 ,将其与 p MD18- T连接 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体 p MD18- OCIFm,双酶切重组克隆质粒 p MD18- OCIFm得到 OCIF成熟肽基因 ,将其定向插入p MAL- c2载体中 ,转化大肠杆菌 TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。 结果 :所获得的 OCIF成熟肽基因编码序列经测序与 Gen Bank报道的完全一致。所表达的产物经 SDS- PAGE分析可见在相对分子质量 80 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Western印迹证实了表达产物的正确。表达产物在高剂量 (>12 0 ng/L)时可诱导体外培养小鼠成熟破骨细胞的凋亡。 结论 :成功获得了人 OCIF成熟肽基因的克隆并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2004年10期）
张弛[5]（2004）在《人破骨细胞形成抑制因子/骨保护素基因克隆、重组表达和初步的生物学活性研究》一文中研究指出从培养的人肝细胞抽提总RNA，用RT-PCR方法扩增得到人破骨细胞形成抑制因子(Osteoclastogenesis Inhibitory factor，OCIF)，或称骨保护素(osteoprotegerin，OPG)成熟肽编码基因序列。RT-PCR所得产物与pMD18-T连接，转化大肠杆菌K802，筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-OCIFm，对所获得的含OCIF／OPG活性结构域编码的重组质粒进行DNA序列分析，结果与GenBank报道序列完全一致。双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm，得到OCIF／OPG成熟肽基因，将其定向插入同样双酶切的pProEX-HTa载体中，转化大肠杆菌BL21(DE3)。筛选得到阳性重组表达子后，用IPTG诱导表达。所表达的产物经SDS-PAGE分析可见在相对分子量80kD处出现一条新条带，与预期OCIF／OPG融合蛋白的分子量一致。用OCIF／OPG特异性—抗行Western Blot，证实重组表达产物能与其特异性结合。以Ni~(2+)亲和层析柱初步纯化的表达产物，能诱导体外培养的小鼠破骨细胞凋亡，并呈剂量依赖性。 应用Stratagene BacterioMatch two hybrid system，以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达表达质粒；以pBT构建编码DR4，DR5，OCIF／OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒。重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF，报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标。所构建的pTRG-TRAIL与pBT-DR4，pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500 μg／ml)筛选下宿主菌呈转录激活状态，pTRG-TRAIL与pBT-OPG组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250 μg／ml)筛选下宿主菌呈转录激活状态，用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆。对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2，pBT-DR4与pTRG-Gal11，pBT-DR5与pTRG-Gal11或pBT-OPG与pTRG-Gal11四组共转化后呈阴性。由此直接证实了OCIF／OPG与TRAIL能直接结合，但亲和力较TRAIL与DR4、DR5要小。另外，由于所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域，而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证，所以证实了细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究。OCIF／OPG与张弛:OCIF/OPG基因的克隆、表达和活性TRAIL的相互作用，在用OCIF/OPG重组表达产物中和TRAIL诱导人胰腺癌SW199O细胞凋亡的活性中也被证实。 本课题成功获得了人OCIF/o PG成熟肤基因，并实现了在大肠杆菌中的重组融合表达;OC正/o PG可与TRAIL直接相互作用，但亲和力较TRAIL与DR4、DRS要低;重组表达的OCIF/OPG可诱导成骨细胞凋亡，并能抑制TRAIL对肿瘤细胞的细胞毒效应，由此建立了初步的OCIF/OPG蛋白的生物学活性测定方法，为进一步的研究奠定了基础。(本文来源于《第二军医大学》期刊2004-04-01）
刘珍[6]（2003）在《破骨细胞形成抑制因子OPG、蝎毒素BmK ITa1的基因克隆、表达及其功能研究》一文中研究指出本论文利用RT-PCR和RACE技术克隆了OPG和BmK ITa1两个基因, 并分别对其进行了表达及功能研究。第一部分，OPG及其突变体OPG-280、OPG-Fc的构建、表达及功能研究。 破骨细胞形成抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor, OCIF 或称 osteoprotegerin, OPG) 是1997年发现的具有降血钙作用和防止骨质流失的一种新的可以调节骨密度的糖蛋白质。OPG作为一种新发现的蛋白质，具有很高的研究意义和开发价值。目前用于结构与功能研究的OPG主要通过CHO细胞表达重组蛋白, 但其较低的表达量限制了研究进程。所以我们的目标就是利用基因工程手段构建一系列OPG突变体，同时完成将它们在不同的表达系统中进行重组表达的研究以建立一种或几种理想的表达系统用以大量制备具有生物活性的重组蛋白。成熟的OPG共有380个氨基酸，存在着单体和二聚体两种形式，其中Cys379对OPG形成同源二聚体是必需的。之前，我们利用RT-PCR技术首次从中国人正常肝细胞株L02中克隆到一种新的破骨细胞形成抑制因子变体基因(OPG-372) (GenBank登录号AF134187), 序列分析结果表明，与国外文献报道相比较，中国人肝细胞株和胎盘中该cDNA 3'端存在一个赭石型终止码突变，从而使这一个蛋白比报道的在C端少8个氨基酸残基。 OPG-372基因已在昆虫杆状病毒表达系统表达并证明OPG-372没有形成二聚体。为了构建OPG一系列突变体，进一步比较重组OPG单体与同源二聚体的体内代谢及其生物效应稳定性, 我们接着从中国人外周血淋巴细胞(PBL)中克隆了OPG基因3’端基因组序列210bp，与国外文献报道的OPG cDNA3'序列相一致，将此210bp与OPG-372重组拼接得到全长无缺失的OPG。 同时，考虑到人免疫球蛋白IgG Fc片段的多个二硫键可能有助于OPG形成同源二聚体， 我们在OPG-372 C端融合Fc得到加长突变体OPG-Fc。 另外，为了调查重组OPG最小的功能片段，结合其结构特点，我们去除OPG-372 C端的100个氨基酸，得到缩短突变体OPG-280。<WP=3>之后，本论文首次成功地将OPG及其变体OPG-280和OPG-Fc基因克隆于表达载体pET-28a中，在大肠杆菌中进行融合表达。研究结果表明经1mmol/L IPTG诱导5h后，OPG-280得到高效表达，产物主要为不溶性包涵体，OPG, OPG-Fc 仅有少量表达。将OPG-280 经Ni2+-IDA柱纯化，变复性，OPG-280的6×His 融合蛋白在3h后可以降低小鼠血钙浓度1.5 mg/100ml， 即下降15%左右。然而，OPG和OPG-Fc在大肠杆菌中的重组表达量太低， Ni2+-IDA柱亲和层析纯化后表达产物很少，而且需要对表达产物进行变复性，不足进行动物实验。所以我们在其他表达系统如昆虫表达体系进行OPG进一步研究。进而，将OPG、OPG-280和OPG-Fc基因分别插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBac1和pFastBacHTb中, 成功地将OPG、OPG-280、OPG-Fc叁种基因在粉纹夜蛾Tn-5B1-4细胞中得到高效表达，而且OPG-Fc在Tn细胞中形成同源二聚体。经小鼠降血钙实验发现，六种表达产物OPG 、OPG-280、OPG-Fc 、His-OPG 、His-OPG-280、 His-OPG-Fc均有生物活性，它们3h后可以降低小鼠血钙浓度分别为10%，11%，15%，8%，10%，14%。同时，我们首次将OPG、OPG-280和OPG-Fc基因克隆于昆虫病毒转移载体pBacPAK8 中，并将它们在家蚕核型多角体病毒(BmNPV)-家蚕( Bombyx mori)表达系统中进行了高效表达，通过非还原SDS-PAGE 发现OPG和OPG-Fc均能形成同源二聚体，而且表达的OPG蛋白出现糖基化。通过小鼠降血钙的实验，证明了叁种重组表达产物OPG、OPG-280、OPG-Fc均有良好的生物活性，它们3h后可以降低小鼠血钙浓度分别为19%，14%，17%。在以上叁个表达系统中，C端缺失100个氨基酸的OPG-280仅以单体方式存在， OPG仅在昆虫虫体中可以形成二聚体，C端融合人免疫球蛋白Fc片段的OPG-Fc在大肠杆菌中没有形成同源二聚体，而在Tn细胞和家蚕虫体内均存在单体和同源二聚体两种形式，推测Fc自身的多个二硫键有助于OPG同源二聚体的形成。从小鼠降血钙实验分析，在昆虫细胞产物中，OPG-Fc活性最高，在昆虫虫体中，OPG和OPG-Fc活性相当，说明在虫体中都能很好形成稳定双体，活力略高于单体，而C端缺失100个氨基酸对其生物学活性没有明显影响。这为开发重组表达OPG的家蚕口服药物在临床上治疗高血钙症以及骨质疏松症等疾病创造了条件。第二部分，蝎毒素基因BmK ITa1的克隆、表达及其重组蛋白酰胺化后加工<WP=4>的研究。 根据东亚钳蝎中的抑制型昆虫毒素的N端序列，戚正武先生实验室利用cDNA末端序列快速扩增技术 (RACE) 从蝎尾腺总RNA中克隆到多个昆虫毒素cDNA，我们从中得到一个BmK ITa1 cDNA，经测序证明它是抑制型昆虫型毒素。它的结构与已知的抑制型昆虫型毒素很相似：cDNA 编码一段21个残基的信号肽，一段61个残基的成熟肽和C末端叁个额外的残基，而且序列也很同源。在BmK ITa1 cDNA 的成熟肽编码区后有GKK 叁个残基，这说明BmK ITa1 的基因产物C末端是酰胺化的。(GenBank登录号AY090782)接着，我们将BmK ITa1基因克隆至装有融合蛋白DsbC的表达载体pET-40b中，得到融合基因DsbC-BmK ITa1在大肠杆菌中重组表达。经1mM的IPTG诱导表达3小时，超声破菌后表达产物约占细菌蛋白质总量(本文来源于《中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）》期刊2003-06-01）
何志勇,李明峰,张惟杰,吴祥甫[7]（2000）在《破骨细胞形成抑制因子研究进展》一文中研究指出破骨细胞形成抑制因子 (OPG/OCIF)是最近发现的一种参与调节骨密度的糖蛋白 ,是一个肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的新成员 ,其氨基酸序列中具有TNF受体结构类似区 .成熟的OPG/OCIF具有 7个结构域 ,可分为叁个功能区 ,即 :TNF受体结构区、致死结构区和肝素结合区 .OPG/OCIF基因定位在 8q2 3～ 2 4上 ,由5个外显子和 4个内含子组成 ,其表达受到与骨的形成和破坏有关因子的调控 :如TGF β1、 1,2 5 (OH) 2 VD3、TNF α等等 .OPG/OCIF抑制骨的破坏和吸收机制主要是抑制破骨细胞的存活 ,引起破骨细胞凋亡和抑制破骨细胞形成(本文来源于《生物化学与生物物理进展》期刊2000年05期）
破骨细胞形成抑制因子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的 在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (Osteoclastogenesisinhibitoryfactor,OCIF)活性域片段。方法 从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA ,利用RT PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA ,将其与pMD18 T连接 ,转化大肠杆菌K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18 OCIFAD ,经双酶切得到OCIF活性域编码片段 ,将其插入pMAL c2载体中 ,转化大肠杆菌TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。结果 所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS PAGE分析可见在相对分子质量 6 0 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Westernblot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应。结论 已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆 ,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
破骨细胞形成抑制因子论文参考文献
[1].肖海龙,任爱霞,张耀洲.破骨细胞形成抑制因子TNFR结构区在大肠杆菌中表达、抗体制备及活性测定[J].遗传.2005
[2].张兴群,王梁华,焦炳华,袁勤生.人破骨细胞形成抑制因子活性域片段在大肠杆菌中的融合表达[J].中国生物制品学杂志.2005
[3].肖海龙.破骨细胞形成抑制因子（OPG）的表达纯化及功能研究[D].浙江大学.2005
[4].张兴群,王梁华,袁勤生2,缪辉南,焦炳华.人破骨细胞形成抑制因子成熟肽基因在大肠杆菌中的融合表达[J].第二军医大学学报.2004
[5].张弛.人破骨细胞形成抑制因子/骨保护素基因克隆、重组表达和初步的生物学活性研究[D].第二军医大学.2004
[6].刘珍.破骨细胞形成抑制因子OPG、蝎毒素BmKITa1的基因克隆、表达及其功能研究[D].中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）.2003
[7].何志勇,李明峰,张惟杰,吴祥甫.破骨细胞形成抑制因子研究进展[J].生物化学与生物物理进展.2000
论文知识图
