导读:本文包含了底物特异性论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:特异性,蛋白酶,脂肪,脂肪酸,赤霉病,基因,芳香族。
底物特异性论文文献综述
熊科,柳佳芸,邓蕾,裴鹏钢[1]（2019）在《源于Aspergillus niger M00988的肽酶对芳香族氨基酸底物特异性研究》一文中研究指出高F值低聚肽具有多种生理功效,但其制备过程中原料进行定向酶解技术是一个难点。为提高酶法产率,简化工艺,降低成本,亟需探索肽酶特异性识别催化芳香族氨基酸基团定向酶解生成高F值低聚肽的机制。研究选择对黑曲霉M00988来源的肽酶分子N-末端空腔上的结合位点进行突变,构建了Y124S、Y124R、S135G、S135W、Y160S、Y160G、Y206S和Y206G突变体。分析系列突变酶对于二肽cbz-G-F、叁肽G-F-F和五肽FGLGF底物的活性。结果表明:突变体Y124S与S135G对低聚肽底物的活性显着优于Y124R与S135W;突变体Y160S与Y206S对低聚肽底物的活性也显着优于Y160G与Y206G。这表明肽酶对芳香族氨基酸底物特异性识别与其底物结合位点的侧链基团大小和极性密切相关。侧链较小时,空间位阻小,有利于酶与芳香族氨基酸底物结合。同时,底物结合位点氨基酸的极性也影响酶对芳香族氨基酸识别的特异性。研究探究了肽酶特异性识别催化芳香族氨基酸底物生成高F值低聚肽的分子机制,为有效利用原料,简化工艺,降低成本,实现工业化制备高F值低聚肽奠定基础。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2019-11-13）
熊科,邓蕾,柳佳芸,裴鹏钢[2]（2019）在《蛋白酶水解底物特异性机制研究进展》一文中研究指出蛋白酶酶解底物位点的专一性,对酶解产物的组成与比例都有较大影响,直接影响最终产物的价值。酶法水解蛋白质存在水解效率低、特异性成分产率低以及后期纯化成本高等问题,使得特异性的酶解方式难以实现大规模工业化应用。解决这一问题则亟需探究蛋白酶特异性水解机理,得到酶解产物的分子机制。基于此,文章围绕蛋白酶的水解特异性,综述了目前与特异性相关的底物基团性质、结合部位氨基酸性质与空间位置,以及酶分子表面电荷等方面的相关机制,以期为今后蛋白酶的特异性酶解体系研究与应用提供参考。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2019年19期）
栾巧巧,宋真真,江聪,许金荣,刘慧泉[3]（2019）在《禾谷镰刀菌Cdc2A有性生殖阶段特异性磷酸化底物的鉴定与功能验证》一文中研究指出由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)引起的小麦赤霉病是一种影响小麦产量和品质的穗部真菌病害。禾谷镰刀菌通过有性生殖产生的子囊孢子是病害发生的初侵染源。有性发育过程受细胞周期调控,细胞周期蛋白依赖性激酶Cdc2是细胞周期调控中最重要的因子。大多数真菌只编码一个CDC2基因,实验室前期研究发现禾谷镰刀菌编码两个CDC2基因(CDC2A和CDC2B),只有CDC2A特异性调控有性生殖。为了明确CDC2A特异性调控有性生殖的机制,本研究通过磷酸化蛋白质组学分析筛选到40个在cdc2A突变体有性生殖阶段相比cdc2B突变体磷酸化水平下降的蛋白,包括前期研究发现的子囊和子囊孢子发育的重要基因PUK1和AMD1。通过基因敲除对部分基因进行了功能验证,研究发现FgATG20缺失后突变体有性生殖产生的子囊壳数量减少,部分子囊中子囊孢子数目不足8个,且子囊孢子发育后期隔膜处会出现缢裂现象。目前正在通过磷酸化抗体杂交实验验证Amd1、FgAtg20和Puk1是否为Cdc2A磷酸化底物,并对鉴定到的磷酸化位点进行突变以验证其功能。(本文来源于《中国植物病理学会2019年学术年会论文集》期刊2019-07-20）
姜恬,冯旭东,李岩,李春[4]（2019）在《底物特异性的生物催化与酶设计改造》一文中研究指出随着生物产业的发展,生物酶催化发挥着越来越重要的作用。然而,部分酶在应用过程中仍然存在诸多问题,影响了生物催化的进一步发展。本文以酶的底物特异性为切入点,回顾了酶的专一性、高效性和环保性;介绍了酶在药物合成和天然产物改性领域的应用以及所遇到的问题;综述了酶的底物特异性改造过程中各种方法的应用,包括化学修饰、非理性和理性设计。化学修饰作为一种直观的修饰方法,通过化学反应对酶分子进行改造;非理性设计是利用易错PCR和DNA Shuffling等手段获得底物特异性提高的突变体;理性设计是基于序列和结构信息对酶分子进行改造。本文从重塑活性口袋提高酶的底物特异性和重塑活性口袋改变酶促反应类型两个方面出发,详述了理性设计改变酶的底物特异性的方法,为酶的特异性改造提供借鉴。(本文来源于《化工进展》期刊2019年01期）
麻梅梅,张涛,刘睿杰,常明,金青哲[5]（2018）在《裂殖壶菌脂肪酶基因克隆及底物特异性研究》一文中研究指出裂殖壶菌甘油叁酯合成和水解的过程中,脂肪酶起着重要的作用。根据同源性分析结果,筛选得到裂殖壶菌脂肪酶基因STGL2。以cDNA为模板获得STGL2脂肪酶基因,将其连接到pPIC9K载体上,得到重组质粒pPIC9K-STGL2,并在毕赤酵母中表达;系统分析了重组脂肪酶(Stgl2p)的底物特异性。结果表明:STGL2脂肪酶基因在毕赤酵母中成功表达;裂殖壶菌脂肪酶Stgl2p的最适底物为对硝基苯酚月桂酸酯(p-NPL),其最适p H为7.5,最适反应温度为35℃。综上所述,脂肪酶Stgl2p在裂殖壶菌细胞内对甘油叁酯中长碳链脂肪酸的水解起着重要的作用。(本文来源于《中国油脂》期刊2018年10期）
江传欢,徐岩,喻晓蔚[6]（2018）在《理性设计提高华根霉脂肪酶对不饱和长链脂肪酸的底物特异性及其在大豆油水解中的应用》一文中研究指出为了提高华根霉脂肪酶在大豆油水解制备脂肪酸中的应用效果,通过理性设计的方法改造脂肪酶的脂肪酸特异性。对突变酶的酶学性质进行了研究,并通过单因素实验优化脂肪酶催化水解大豆油的反应条件。结果表明:利用定点突变技术获得了一系列脂肪酸特异性改变的脂肪酶,其中突变酶HQL增强了对不饱和长链脂肪酸的特异性,并且对p-NPP(C16)的水解活力相比野生型提高了2.72倍;所有突变酶的最适温度和最适p H均为40℃和8.0,与野生型脂肪酶一致;得到脂肪酶催化水解大豆油的最适反应条件为反应时间24 h、水油质量比1∶1、加酶量500 U/g(以油质量计)、p H 8.0、温度40℃,在最适反应条件下,野生型酶催化大豆油水解率仅为80%,而突变酶HQL由于增强了对长链不饱和脂肪酸的底物特异性,对大豆油水解率提高到98%。(本文来源于《中国油脂》期刊2018年10期）
淮东欣,张园园,张椿雨,Edgar,B.CAHOON,周永明[7]（2018）在《甘蓝型油菜脂肪酸碳链延长酶BnaA.FAE1与BnaC.FAE1的底物特异性分析》一文中研究指出研究脂肪酸碳链延长酶(FAE1)的底物特异性,旨在为改良油料种子脂肪酸提供信息,将甘蓝型油菜A、C基因组的BnaA. FAE1和BnaC. FAE1分别在亚麻荠种子中表达。其转基因种子中,山嵛酸与芥酸含量的比值(C22∶0/C22∶1)分别为0. 18和0. 88,表明BnaA. FAE1对单不饱和脂肪酸亲和力较高,而BnaC. FAE1则对饱和脂肪酸亲和力较高,这种差异在各转基因世代表现稳定。通过分析T3转基因家系种子中酰基辅酶A(Acyl-Co As)的组成,进一步证明了上述结论。但是在拟南芥中分别异源表达上述基因,并没有观察到类似的底物特异性差异。在甘蓝型油菜祖先种,白菜型油菜和甘蓝种子中调查其C22∶0/C22∶1比值,同样未发现其FAE1底物特异性存在差异。综上认为BnaA. FAE1和BnaC. FAE1在亚麻荠中存在底物特异性。(本文来源于《中国油料作物学报》期刊2018年05期）
江传欢[8]（2018）在《脂肪酶底物特异性改造及其在油脂水解中的应用》一文中研究指出脂肪酸广泛应用于工业领域,尤其是不饱和长链脂肪酸对人体健康具有重要的作用。天然油脂含有大量的长链脂肪酸,酶水解法由于环境友好、设备简单和特异性等优势成为脂肪酸制备的主要方法。然而,对中链脂肪酸水解特异性较强的华根霉脂肪酶(Rhizopus chinensis lipase,RCL),水解不饱和长链脂肪酸含量较高的天然油脂能力较弱,难以达到脂肪酸工业生产的水平。目前,关于酶的不饱和脂肪酸特异性改造研究较少,本文通过理性设计华根霉脂肪酶获得了对不饱和长链脂肪酸特异性增强的突变酶,该突变酶催化大豆油水解的能力相应地提高。最后采用介孔氧化硅固定化脂肪酶,初步研究了固定化脂肪酶在大豆油水解中的重复使用稳定性。具体内容包括:(1)针对华根霉脂肪酶的底物结合口袋理性设计了6个突变位点,利用全质粒PCR技术获得了突变酶L285Q、T286Q、HQL、A116W、I281F和A116W/I281F,并成功地在毕赤酵母中获得了表达。重组毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K-RCLHQL的生长趋势与原始菌株相似。(2)考察了突变酶的底物特异性和酶学性质,突变酶HQL增强了对不饱和长链脂肪酸的特异性,对pNPC16的水解活力相比野生型提高了2.72倍,其K_m值不变,k_(cat)及k_(cat)/K_m值均为RCL的1.60倍,说明在序列H284和L285中间插入一个亲水氨基酸谷氨酰胺Q可以增大催化效率,促进酶活性中心与底物的相互作用。与野生型脂肪酶相比,其他突变酶的催化活力降低。以对硝基苯酚棕榈酸酯为底物,所有突变酶的最适反应温度和最适反应pH均为40℃和8.0,与野生型脂肪酶一致。(3)优化了脂肪酶催化大豆油水解的反应条件:反应时间为24 h,水油质量比为1:1,加酶量为500 U·g~(-1)(油重),pH为8.0,温度为40℃。在最适催化反应条件下,突变酶HQL由于增强了对不饱和长链脂肪酸的底物特异性,其催化大豆油反应的水解率高达98%,而野生型酶催化大豆油水解率仅为80%,说明酶的底物特异性可以影响油脂的水解。(4)制备了介孔氧化硅固定化脂肪酶,RCL-HMMS和HQL-HMMS最适反应温度分别为40℃和50℃。确定了介孔氧化硅固定化脂肪酶水解大豆油的最适反应条件:水油质量比为1:1,加酶量为500 U·g~(-1)(油重)。在两种固定化脂肪酶的最适反应条件下,RCL-HMMS和HQL-HMMS催化大豆油反应的水解率分别达到70%和95%,并且对固定化脂肪酶在大豆油水解中的重复使用稳定性进行了初步研究。(本文来源于《江南大学》期刊2018-06-01）
齐恩凤[9]（2018）在《基于底物序列的蛋白酶的特异性研究》一文中研究指出随着高通量技术在蛋白质组学中的应用,越来越多的蛋白质在被蛋白酶断裂之后,通过质谱鉴定出来。在这个过程中,需要预先对蛋白质组中的所有蛋白进行模拟酶切,如何选择合适的蛋白酶来对蛋白质进行裂解是非常重要的。用来酶切的蛋白酶要具有很强的特异性,这种特异性通常是在活性位点中通过酶与底物的相互作用来表现的。蛋白酶对裂解底物的特异性是研究蛋白酶的生化性质中很重要的一步,对于理解蛋白酶在新陈代谢以及疾病中所发挥的作用是非常重要的。而随着蛋白酶的底物信息量的增加,如何更全面地获取数据中有用的信息来分析蛋白酶的底物特异性,是生物信息学面临的一大挑战。目前,在蛋白酶的特异性研究中,无论是实验方法还是量化分析,通常都是基于这样的假设,即蛋白酶的活性中心区与底物序列上每个氨基酸残基的结合均是一个完全独立的过程。事实上,蛋白酶活性中心某个位点上结合的底物氨基酸残基经常会对别的位点上氨基酸残基的结合起到积极地促进或者消极地抑制作用。现有的量化方法,通常是针对于底物序列中单个位点上的氨基酸信息进行计算,无法反映出位点之间的相互影响。而目前在探讨位点之间关系的文献中,也仅仅是通过实验方法研究了个别蛋白酶在部分位点之间的作用,并没有给出量化的方法来衡量这种合作关系。了解位点之间的合作关系是全面理解蛋白酶的活性位点的作用以及怎样确定蛋白酶的活性的基础,同时也有助于开展相关的研究,如鉴定新的底物序列以及设计新的肽段来抑制蛋白酶的活性等。为此,我们首先从MEROPS数据库获取了底物序列信息,为避免假阳性,利用了贪婪算法除去冗余的底物序列,再对有效底物序列信息展开分析,建立了位点之间的组合模型,并给出了分析蛋白酶特异性的算法。另外,在基于底物序列信息的基础上,还提出了量化蛋白酶相似性的一个新方法。我们首先针对在底物序列断裂键附近连续位点的氨基酸,提出了一个基于块的量化的方法。结果发现,该数据集中大部分的蛋白酶在其底物断裂键附近常存在有显着性的氨基酸组合。这些组合表明了蛋白酶底物在距离断裂中心比较近的位点比距离断裂中心比较远的位点上具有更强的合作关系。在底物序列中的众多位点组合中,以底物的断裂键为中心,我们又提出了一种新的量化方法。我们给出叁种类型的位点组合模型,分别是二元组、叁元组和四元组。结果发现,在各类型的位点组合中均可以识别出偏好的氨基酸组合。结合了单位点特异性的叁种类型的位点组合模型,能够更好的反应蛋白酶的位点组合特性。而且,我们的方法也可以推广到叁种类型以外的其他位点组合。块的模型和多元位点组合模型主要分析了蛋白酶在底物中偏好的氨基酸组合。我们在分析了蛋白酶底物序列信息的基础上,提出了一个量化方法,首次对各位点之间可能不合作的氨基酸组合进行分析。与其它方法相比,该方法可以明确地找到每个位点上的每个氨基酸对其他位点上氨基酸的不合作性,为蛋白酶的特异性研究提供了一种新的思路。利用底物序列数据信息,我们还给出了一个新的衡量蛋白酶的相似性的量化方法。基于每个蛋白酶结合位点上的底物信息,构造出一个L × 20维的向量,其中L是位点长度。为了使这个向量尽可能地反映出蛋白酶之间的关系,我们将向量中的元素进行排序,得到一个秩向量。根据秩向量计算得到蛋白酶之间的相似性,用可视化方法将蛋白酶之间的差异性用进化树表现出来。与其它方法相比,在我们构建的进化树中,几乎所有同源的蛋白酶都聚在小分支中,而且属于同一种催化类型的蛋白酶也较为集中的聚在一起,可以更好地反映蛋白酶家族成员之间的亲缘关系。综上,在基于底物序列信息的基础上,本文在位点组合模型以及蛋白酶相似性的量化分析中都得到了很好的结果,而且这些方法都具有可推广性,为蛋白酶特异性的研究做出了一定的贡献。同时,这些量化方法将为预测蛋白酶的断裂底物及蛋白酶相关的靶向药物的设计和研发提供理论基础。文中的算法是通过C++语言实现的,所有的软件、测试集以及使用说明都可以免费下载使用,地址为:(1)PBlock:https://sourceforge.net/projects/PBlock/files/?source=navbar(2)Combination:https://sourceforge.net/projects/combinations/files/?source=navbar(3)Uncooperative:https://sourceforge.net/projects/uncooperative/files/?source=navbar(本文来源于《山东大学》期刊2018-05-20）
董玲丽[10]（2018）在《羊栖菜聚酮合酶的基因克隆、异源表达和底物特异性研究》一文中研究指出褐藻多酚是羊栖菜中含量较高的一类具有生物活性的天然产物,从结构角度分析,尽管结构种类多样,但其仅由间苯叁酚单体聚合而成。对长囊水云的研究表明,聚酮合酶基因是该单体生物合成途径中的关键基因。同源搜索结果发现,羊栖菜中存在一个聚酮合酶基因,与前者具有极高同源性;除此之外,羊栖菜中还存在着另外两个聚酮合酶基因,但目前对它们的功能还不甚了解。本文从羊栖菜聚酮合酶的基因克隆、异源表达和酶学性质分析叁方面进行探究:羊栖菜中存在3个聚酮合酶基因,分别是SfPKS1、SfPKS2和SfPKS3,克隆这叁个基因后在大肠杆菌中进行了异源表达,并对纯化后的重组蛋白进行了酶学性质的研究。同源性分析羊栖菜的叁个PKS基因表明:SfPKS2和SfPKS3具有较高的相似度,且与宾得马尾藻SbPKS和水云EsiPKS1具有较高同源性;同时,SfPKS1、2和3的底物识别位点和催化活性位点的氨基酸序列高度保守。SfPKS的催化底物测试了两种类型的CoA—直链烷基CoA和芳香类CoA,结果显示SfPKS能以芳香类CoA作为反应底物合成相应的产物。对羊栖菜PKS的研究有助于进一步挖掘羊栖菜中其他聚酮类化合物,为羊栖菜相关天然产物的深入研究和开发利用奠定基础。(本文来源于《温州大学》期刊2018-05-01）
底物特异性论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
蛋白酶酶解底物位点的专一性,对酶解产物的组成与比例都有较大影响,直接影响最终产物的价值。酶法水解蛋白质存在水解效率低、特异性成分产率低以及后期纯化成本高等问题,使得特异性的酶解方式难以实现大规模工业化应用。解决这一问题则亟需探究蛋白酶特异性水解机理,得到酶解产物的分子机制。基于此,文章围绕蛋白酶的水解特异性,综述了目前与特异性相关的底物基团性质、结合部位氨基酸性质与空间位置,以及酶分子表面电荷等方面的相关机制,以期为今后蛋白酶的特异性酶解体系研究与应用提供参考。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
底物特异性论文参考文献
[1].熊科,柳佳芸,邓蕾,裴鹏钢.源于AspergillusnigerM00988的肽酶对芳香族氨基酸底物特异性研究[C].中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集.2019
[2].熊科,邓蕾,柳佳芸,裴鹏钢.蛋白酶水解底物特异性机制研究进展[J].食品与发酵工业.2019
[3].栾巧巧,宋真真,江聪,许金荣,刘慧泉.禾谷镰刀菌Cdc2A有性生殖阶段特异性磷酸化底物的鉴定与功能验证[C].中国植物病理学会2019年学术年会论文集.2019
[4].姜恬,冯旭东,李岩,李春.底物特异性的生物催化与酶设计改造[J].化工进展.2019
[5].麻梅梅,张涛,刘睿杰,常明,金青哲.裂殖壶菌脂肪酶基因克隆及底物特异性研究[J].中国油脂.2018
[6].江传欢,徐岩,喻晓蔚.理性设计提高华根霉脂肪酶对不饱和长链脂肪酸的底物特异性及其在大豆油水解中的应用[J].中国油脂.2018
[7].淮东欣,张园园,张椿雨,Edgar,B.CAHOON,周永明.甘蓝型油菜脂肪酸碳链延长酶BnaA.FAE1与BnaC.FAE1的底物特异性分析[J].中国油料作物学报.2018
[8].江传欢.脂肪酶底物特异性改造及其在油脂水解中的应用[D].江南大学.2018
[9].齐恩凤.基于底物序列的蛋白酶的特异性研究[D].山东大学.2018
[10].董玲丽.羊栖菜聚酮合酶的基因克隆、异源表达和底物特异性研究[D].温州大学.2018
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