酿酒酵母ICT1基因敲除对其耐盐性的影响

酿酒酵母ICT1基因敲除对其耐盐性的影响

论文摘要

该研究以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BY4741为出发菌,采用同源重组技术构建一株ICT1基因缺失菌株,分析ICT1基因敲除对酿酒酵母耐盐性的影响。分别采用梯度点滴实验、碘化丙啶(PI)荧光染色法、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-QPCR)等技术分析ICT1基因在酿酒酵母耐盐机制中的作用。结果表明,成功获得ICT1基因缺失菌株BY4741-ΔICT1。与出发菌BY4741相比,菌株BY4741-ΔICT1的盐耐受性减弱。经1.0 mol/L Na Cl处理后,麦角固醇含量减少66.9%,细胞膜受损,细胞膜上的转运蛋白基因NHA1和ENA1的转录水平分别下降65.6%和90.5%。说明ICT1基因的敲除使菌株BY4741-ΔICT1的盐耐受性下降可能与胞内麦角固醇合成减少、膜受损、离子转运蛋白基因的转录水平下降有关。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •     1.1.1 菌种与质粒
  •     1.1.2 引物
  •     1.1.3 培养基
  •     1.1.4 试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 试验方法
  •     1.3.1 ICT1基因敲除组件的构建
  •     1.3.2 ICT1基因敲除重组菌的筛选与验证
  •     1.3.3 盐耐受性试验
  •     1.3.4 麦角固醇含量的测定[22]
  •     1.3.5 细胞膜完整性的测定[23]
  •     1.3.6 实时荧光定量PCR
  • 2 结果与分析
  •   2.1 ICT1基因敲除组件的构建
  •   2.2 ICT1基因敲除重组菌株的构建
  •   2.3 ICT1基因敲除重组菌的验证
  •   2.4 菌株BY4741和BY4741-ΔICT1的盐耐受性测定
  •   2.5 菌株BY4741和BY4741-ΔICT1在不同盐浓度下麦角固醇含量的测定
  •   2.6 菌株BY4741和BY4741-ΔICT1细胞膜完整性的测定
  •   2.7 菌株BY4741和BY4741-ΔICT1细胞膜上转运蛋白基因的转录水平
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王金鹏,韦元琪,朱红,钱伟祎,马翔宇,崔崟,周华,蔡恒

    关键词: 酿酒酵母,基因敲除,基因,耐盐机理

    来源: 中国酿造 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学,轻工业手工业

    单位: 南京工业大学生物与制药工程学院

    基金: 国家重点基础研究发展计划(973计划)(2013CB733904),江苏省自然科学基金项目(BK20130932),江苏省研究生科研与实践创新计划项目(KYCX18_1116),江苏高校品牌专业建设工程资助项目(PPZY2015B155),南京工业大学大学生创新创业与实践开放基金项目(2018DC621)

    分类号: TS261.11;Q78

    页码: 21-26

    总页数: 6

    文件大小: 954K

    下载量: 208

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