具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间接ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗DEV MAb的杂交瘤细胞株2E3。鉴定结果显示,该MAb为Ig M亚类,ELISA效价可达到1∶105以上;间接免疫荧光试验(IFA)中MAb可与细胞中增殖的DEV结合,Western-blot试验中MAb不与变性病毒蛋白作用,表明该MAb可能是构象表位的单抗;病毒中和试验表明,该MAb具有较强的病毒中和活性。上述结果表明,本试验获得的一株具有DEV中和活性的MAb杂交瘤细胞株为建立DEV的检测方法和DEV的相关研究提供了材料支持。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 病毒、细胞与实验动物等
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 病毒的增殖及纯化
  •   1.4 动物免疫
  •   1.5 筛选杂交瘤细胞的间接ELISA方法的建立
  •   1.6 细胞融合与阳性杂交瘤细胞株的筛选
  •   1.7 制备小鼠腹水MAb和MAb的纯化
  •   1.8 MAb的鉴定
  •     1.8.1 MAb亚类的鉴定
  •     1.8.2 MAb的ELISA效价测定
  •     1.8.3 MAb的间接免疫荧光(IFA)鉴定
  •     1.8.4 MAb的Western-blot鉴定
  •     1.8.5 MAb的特异性鉴定
  •     1.8.6 MAb的中和活性鉴定
  • 2 结果
  •   2.1 染毒细胞的观察情况
  •   2.2 纯化病毒的电镜观察情况
  •   2.3 间接ELISA方法的建立
  •   2.4 杂交瘤细胞的筛选
  •   2.5 MAb的亚类鉴定
  •   2.6 ELISA测定MAb效价
  •   2.7 IFA鉴定
  •   2.8 Western-blot鉴定
  •   2.9 MAb的特异性鉴定
  •   2.1 0 MAb的中和活性鉴定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王怡平,张忠伟,蒲路莎,赵丽丽,陈洪岩

    关键词: 鸭肠炎病毒,单克隆抗体,中和活性

    来源: 中国兽医科学 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室,吉林省松原市宁江区畜牧业管理局

    基金: 黑龙江省青年科学基金项目(QC2018033),黑龙江省自然科学基金重点项目(ZD2016006),中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302018013,1610302019013)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0130

    页码: 977-982

    总页数: 6

    文件大小: 1670K

    下载量: 138

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