鸭腺病毒3型MGB TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

鸭腺病毒3型MGB TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

鸭(Anas platyrhynchos domestica)腺病毒3型(Duck adenovirus type 3, DAdV-3)是近年来我国新发现的鸭源腺病毒。本研究根据NCBI数据库中DAdV-3代表株(CH-GD-12-2014株, GenBank No. KR135164)的22K基因特征,设计特异性引物和探针,建立检测DAdV-3的MGB TaqMan探针qRT-PCR方法。结果表明,建立的qRT-PCR方法具有如下特性:灵敏度高,最低检测限为55拷贝/μL;特异性强,和鸭群常见传染病病原均无交叉反应;重复性好,组内和组间重复实验变异系数分别为0.44%~2.10%和0.64%~2.37%。利用建立的qRT-PCR方法对临床送检的61份鸭源病料进行检测,检出DAdV-3阳性15份,阳性率为24.6%。本研究为后续开展DAdV-3感染的实验室快速诊断和流行病学调查奠定了初步基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 毒株及临床样品
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 引物和探针的设计与合成
  •   1.4 核酸提取及RNA反转录
  •   1.5 qRT-PCR标准品的制备
  •   1.6 实时荧光定量PCR反应条件的优化
  •   1.7 实时荧光定量PCR标准曲线的建立
  •   1.8 实时荧光定量PCR敏感性实验
  •   1.9 实时荧光定量PCR特异性实验
  •   1.1 0 实时荧光定量PCR重复性实验
  •   1.1 1 临床样品检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 优化后的实时荧光定量PCR反应条件
  •   2.2 实时荧光定量PCR标准曲线的建立
  •   2.3 实时荧光定量PCR的敏感性实验
  •   2.4 实时荧光定量PCR的特异性分析
  •   2.5 实时荧光定量PCR的重复性
  •   2.6 临床样品的检测
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陈翠腾,陈珍,朱春华,蔡国漳,刘斌琼,黄瑜

    关键词: 鸭腺病毒型,基因,探针,实时荧光定量

    来源: 农业生物技术学报 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 福建省农业科学院畜牧兽医研究所

    基金: 现代农业产业体系建设专项资金(CARS-42),福建省属公益类科研院所基本科研专项(No.2017R1023-6和No.2016R1022-9),福建省财政专项(No.FJFS-2017)

    分类号: S852.65

    页码: 564-570

    总页数: 7

    文件大小: 971K

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