杨宏林[1]2003年在《裸鼠脊髓转移灶人粘液表皮样癌细胞系Ms的建立及其生物学特性》文中研究表明本研究用裸鼠尾静脉注射法、组织块培养法获得粘液表皮样癌裸鼠脊髓转移细胞系，应用光镜及电镜下形态学观察、染色体分析、细胞计数法、流式细胞术、软琼脂克隆形成试验、裸鼠皮下成瘤实验和人工肺转移模型等方法，探讨了粘液表皮样癌脊髓转移细胞系的生物学特征，并比较了其与Mc3细胞的差别。 一、粘液表皮样癌脊髓转移细胞系Ms的建立 1．将对数生长期的Mc3细胞单细胞悬液，每只裸鼠尾静脉注射含5×10~6个细胞，共注射50只， 2．注射56日后观察到有一只裸鼠出现了双侧后肢截瘫。 3．脱颈法处死截瘫小鼠，经解剖未发现肉眼可见的肺、肝、脑、脊髓异常。 4．分别取其脊髓、肺、肝、脑组织用含10％(v／v)的胎牛血清的RPMl1640培养液，行组织块法原代培养。 5．于3日后仅脊髓组织块周围长出了扁平多角形上皮细胞样细胞，呈“铺路石”样外观 6．该细胞在体外的生长稳定，已传代50次以上，体外培养已维持2年，命名为粘液表皮样癌脊髓转移细胞系简称Ms(其M代表 muoCpldermoid，s代表 Spnlnl cod）。 二、地细胞的生物学特性 1、形态学观察结果：MS细胞核浆比增大，核仁增大增多，可见巨 核、多核细胞，核分裂像多见。透射电镜观察Ms细胞多呈圆形，核浆 比例大，细胞核巨大不规则，可见切迹，以常染色质为主，核仁较大， 可见大量细胞器，其中线粒体和内质网丰富、大量粘液颗粒样颗粒， 微绒毛丰富。与Ms细胞相比，Me3细胞形态多样、细胞间大小差异 较大。 2、染色体分析结果：Ms和Me3细胞染色体都保持了人类染色体 （ 的形态特征，前者染色体数目37～119，众数60。后者细胞染色体数目 25～113，众数 61。 3、细胞增值速度的测定结果：MS细胞对数生长期群体倍增时间 为43h，M。3为38h。 4、细胞周期测定结果：流式细胞仪测得MS细胞对数生长期的细 胞周期分布为：GI期61．8％，GZ期9．3％，S期22．7％，MC3细胞则分 别为＊期 62．3％，GZ期 11．5％S期 26．l％。 5、克隆形成率 MS细胞克隆形成率为41％；MC3为38％。两种细胞 形成克隆形态均为球状和单层细胞片状，形态相似。 6、MS肿瘤细胞裸鼠皮下致瘤性4／4，瘤体倍增时间41h MC3细胞致瘤性4／4，瘤体倍增时间44h。皮下肿瘤组织学特征相似。 7、MS细胞裸鼠人工肺转移率为3／3，肺转移结节数68土48；MC3转移率为 3／3，肺转移结节数 42士23；两者肺转移灶组织病理特点相同。
杨宏林, 吴军正, 刘斌, 朱晓英[2]2003年在《裸鼠脊髓转移灶粘液表皮样癌细胞系Ms的建立及生物学特性》文中指出目的 :建立Mc3细胞的脏器转移细胞系。方法 :采用瘤细胞尾静脉注射法、组织块细胞培养法 ,从裸鼠体内获得Mc3细胞系脊髓转移细胞亚系。用染色体显示、细胞形态及细胞致瘤性观察证明其性质 ;用细胞生长曲线、流式细胞仪测定增值速度。结果 :从 5 0只受试裸鼠中获得一只截瘫的裸鼠 ,取其脊髓组织行原代及传代培养获得细胞并建立细胞系 ,传代 5 0次以上 ,生长稳定 ,倍增时间为 43h ,S期细胞占2 2 .7% ,染色体众数为 61,保持人类染色体形态 ,细胞形态与其母细胞相似 ,相差显微镜观察活细胞呈”铺路石”样外观。裸鼠肺内转移肿瘤组织切片显示为粘液表皮样癌 ,将该细胞命名为Ms。结论 :Ms细胞系是Mc3细胞系在裸鼠体内的脊髓转移细胞亚系 ,其生物学性质与Mc3细胞不同
王静[3]2006年在《转化生长因子-β1基因沉默对人涎腺粘液表皮样癌Ms细胞生物学行为的影响》文中研究指明人涎腺粘液表皮样癌(Mucoepidermoid Caecinoma，MEC)来源于涎腺导管上皮，是口腔颌面部较为常见的恶性肿瘤，低分化的涎腺粘液表皮样癌侵袭和转移能力强，而肿瘤转移往往是肿瘤患者死亡的主要原因。涎腺粘液表皮样癌的治疗目前仍主要以传统的手术、放疗和化疗为主，但疗效欠佳，尤其是低分化型粘液表皮样癌患者，5年生存率低。因此探索新的疗法，尤其是如何抑制肿瘤的转移尤为重要，以期提高对涎腺粘液表皮样癌的疗效。 RNA干扰(RNA interference，RNAi)是特异基因表达沉默的强有力手段之一，广泛存在于从真菌到植物，从无脊椎动物到哺乳动物的多种生物体中。自1998年Fire命名RNA干扰以来，RNAi研究进展很快，成为分子生物学领域最热门的研究课题之一。近年来研究表明，RNAi技术在肿瘤、病毒感染性疾病和某些功能获得性遗传疾病的治疗中具有巨大的应用潜力；RNAi用于肿瘤治疗较之先前的肿瘤基因治疗方法具有高度的特异性，高效率，存在放大效应，作用广泛并可遗传的特点。因此针对癌基因在肿瘤细胞中引发RNAi效应，将有可能开辟肿瘤基因治疗的新途径。 本研究以人涎腺粘液表皮样癌高转移Ms细胞为研究对象，首次探讨利用RNAi技术沉默转化生长因子-β1(Transforming growth factor beta，TGF-β1)基因后对Ms细胞生物学行为的影响。首先采用基因芯片技术筛选涎腺粘液表皮样癌高低转移细胞的差异表达基因，发现TGF-β1在Ms细胞中高表达。TGF-β1是TGF-β家族最重要的成员之一，可刺激肿瘤组
冯元勇[4]2005年在《SD大鼠颊粘膜鳞癌细胞系的建立及其生物学特性的研究》文中研究说明目的:建立SD大鼠口腔颊粘膜鳞状细胞癌细胞系,对其生物学特性进行观察和鉴定,为口腔癌的致病机制、诊断和治疗研究提供一个有用的细胞模型。 材料与方法:①采用4—硝基喹啉—1—氧化物(4-nitroquinoline-1-oxide,4NQO)加入饮水喂养SD大鼠,诱发其颊粘膜鳞状细胞癌;切取颊癌组织行病理诊断,同时做组织块原代培养;利用胰酶消化法和细胞克隆培养法筛选细胞。②相差显微镜、微分干涉显微镜观察活细胞形态;HE染色、透射电镜、扫描电镜等方法,观察固定细胞的形态,并鉴定细胞的组织来源;免疫组化染色检测广谱角蛋白(cytokeratin clone AE1/AE3,CK)和波形蛋白(vimentin,Vim)的表达。按3000个细胞/孔接种于96孔板,采用MTT法检测第21代和第65代细胞的群体倍增时间;平板克隆形成法检测单细胞的增殖能力(每25cm~2培养瓶接种300个细胞,2周后固定、染色)。采用流式细胞仪检测细胞周期;分别计数100个第21和65代细胞的染色体条数,分析研究细胞的染色体倍性。采用TRAP-ELISA法检测肿瘤细胞和正常粘膜细胞端粒酶活性。③16只裸鼠双侧腋背部皮下均接种3×10~6个细胞(200μl),观察20天,计算裸鼠皮下接种成瘤率;10只裸鼠每只尾静脉注射3×10~6个细胞(200μl),24天后处死动物,计算裸鼠实验性肺转移率,并行组织病理学诊断,以观察细胞的体内成瘤和转移特性。④取裸鼠皮下移植瘤的组织块接种于其它裸鼠皮下,在裸鼠间连续传5代,观察皮下接种的各代组织块成瘤速度;裸鼠实验性肺转移组织块原代培养,培养细胞再行裸鼠尾静脉注射,连续裸鼠体内传5代筛选亚细胞系,并与母本细胞比较生物学特性,称量并计算各代裸鼠肺重/体重比值。⑤将SD大鼠按周龄分四组,各组分别为4只(32周龄)、4只(4周龄)、4只(4周龄)、6只(4周龄),均分别在口底或颊部原位和皮下接种SDSCC-B细胞及其裸鼠移植瘤组织块。口底、颊部原位接种5×10~6个细胞(100μl),皮下接种1×10~7个细胞(200μl),分别饲养6、4、4、3个月,观察其同种异体接种成瘤情况。⑥采用SAS6.12统计软件包进行统计学分析。 结果:①4NQO诱发36周后,SD大鼠颊粘膜形成肿瘤,病理诊断为颊粘膜鳞状上皮细胞癌;组织块原代培养的细胞为混合生长的细胞,主要包括两大类——上皮样细胞和成纤维样细胞;经筛选培养后获得单一纯化的上皮细胞,至2005年3月20日,已体外连续传105代,维持培养时间为11个月零22天,细胞生长稳定。将该细胞系命名SD大鼠颊粘膜鳞状细胞癌细胞系(Sprague-Dawley rat buccal mucosa squamous cell carcinoma cell line,SDSCC-B)。②形态学观察体外培养的细胞,符合鳞癌细胞的形态学特征;免疫组化染色结果为CK和Vim阳性。细胞群体
参考文献：
[1]. 裸鼠脊髓转移灶人粘液表皮样癌细胞系Ms的建立及其生物学特性[D]. 杨宏林. 中国人民解放军第四军医大学. 2003
[2]. 裸鼠脊髓转移灶粘液表皮样癌细胞系Ms的建立及生物学特性[J]. 杨宏林, 吴军正, 刘斌, 朱晓英. 实用口腔医学杂志. 2003
[3]. 转化生长因子-β1基因沉默对人涎腺粘液表皮样癌Ms细胞生物学行为的影响[D]. 王静. 第四军医大学. 2006
[4]. SD大鼠颊粘膜鳞癌细胞系的建立及其生物学特性的研究[D]. 冯元勇. 青岛大学. 2005