导读:本文包含了荧光素酶报告基因检测论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:萤火虫荧光素酶,凋亡,Caspase-3
荧光素酶报告基因检测论文文献综述
车路平,栗永华,杨斌,徐智凯,廖瑛[1]（2019）在《基于萤火虫荧光素酶报告基因检测凋亡的系统构建及鉴定》一文中研究指出为构建一个能够快速检测凋亡的含荧光素酶报告基因(Fluc)的真核表达质粒,采用PCR的方法将Caspase-3的识别基序Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)四个氨基酸引入至Fluc基因的C端和N端之间;同时选取Asp-Glu-Val-Gly (DEVG)四个氨基酸作为阴性对照。随后重组片段分别克隆至分离型内含肽的N端和C端之间,并命名为pFluc-DEVD和pFluc-DEVG。将该表达质粒与海肾荧光素酶报告质粒(RLUC)同时转染至HeLa细胞,通过双荧光素酶报告基因和Western blotting实验检测细胞凋亡水平。双荧光素酶报告基因系统实验结果显示,当发生凋亡时,pFluc-DEVD质粒组表达的萤火虫荧光素酶的含量高出pFluc-DEVG质粒组约3倍。Western blotting检测结果显示,转染pFluc-DEVD质粒的细胞在凋亡药物刺激后,Fluc活化的蛋白显着增多,且Caspase-3的活化程度与Fluc的表达呈正相关,并有显着的统计学差异。以上结果表明,pFluc-DEVD真核表达质粒表达的萤火虫荧光素酶蛋白能被细胞内的Caspase-3酶裂解,且该质粒能够精确地反映出细胞的凋亡水平,为后续进行凋亡定量检测提供了一个可借鉴的方法。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年08期）
王自强,王灿,董闪闪,邵泓,陈钢[2]（2018）在《利用SIE转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6受体拮抗剂的生物活性》一文中研究指出目的:利用sis诱导元素(sis-inducible element,SIE)转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6(IL-6)受体拮抗剂的生物活性。方法:采用脂质体转染法将含有SIE转录因子组件及荧光素酶报告基因的质粒pGL 4.47转入293T细胞,并通过潮霉素压力筛选获得稳定转染细胞株。加入IL-6激活稳转细胞株中的荧光素酶报告基因,构建SIE转录活性荧光素酶报告基因系统,并进一步建立基于此系统的IL-6受体拮抗剂药物的生物学活性定量检测方法。结果:IL-6可激活293T-SIE稳定转染细胞中的荧光素酶报告基因,且具有量效关系。对此系统检测IL-6受体拮抗剂药物的生物学活性进行方法学验证,显示本检测方法准确性及重复性均较好。结论:建立了一种基于荧光素酶报告基因系统的IL-6受体拮抗剂药物生物学活性检测方法,与现有方法相比,具有耗时少、准确性高、重复性好的优势。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2018年10期）
马慧,宋博宇,张嵩岩,谢群慧,徐丽[3]（2018）在《基于荧光素酶报告基因的二英类生物检测法的发展与应用》一文中研究指出二英类生物检测法在大规模二英类筛查中具有重要的应用价值.其中,基于荧光素酶报告基因的二英类生物检测技术,是依据二英类化合物通过结合芳香烃受体从而引发一系列毒理效应的生物过程而设计的,具有灵敏度高、应用范围广、与毒理效应相关性强的特点.最新研究进展表明,该类技术可检测到的2,3,7,8-TCDD标准物质的最低浓度达到了0.1 pM,可应用于农业、食品、环境等领域的多种样品中痕量二英类化合物的筛查,在政府管理部门、第叁方检测咨询机构及相关企业等方面具有广阔的应用和推广前景,同时,该方法在环境健康风险评估和相关基础研究中有更广阔的发展空间.本文着重介绍了基于荧光素酶报告基因的二英类生物检测法——CALUX生物检测法的原理、发展进程、应用现状和标准化的方法体系并对CALUX法的优缺点进行总结及之后的发展进行展望.(本文来源于《中国科学:化学》期刊2018年10期）
张凤兰,李江[4]（2018）在《牙槽骨再生关键基因—FGFR1启动子荧光素酶报告基因的重组与功能检测》一文中研究指出目的:本实验选择调控牙槽骨再生的关键基因--碱性成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)作为靶向,构建FGFR1启动子的分子细胞模型,研究雌二醇及其促进剂对FGFR1启动子的调节作用,从而为临床应用雌二醇及促进剂治疗牙槽骨再生提供理论支持。(本文来源于《第十二次全国口腔修复学学术会议论文汇编》期刊2018-07-22）
张文影,李巍,吴赵斌,苏中静[5]（2018）在《双荧光素酶报告基因检测斑马鱼c-Myb与lect2l的靶标关系》一文中研究指出目的:构建斑马鱼lect2l基因启动子双荧光报告基因系统,研究lect2l是否是受c-Myb蛋白特异性调控的靶基因。方法:采用PCR方法克隆斑马鱼lect2l基因启动子序列,构建重组荧光素酶报告基因载体pGL4.20-lect2lp,并采用阳离子脂质体法将其与c-myb表达载体及pRL-CMV内参质粒共转染293T细胞,使用化学发光仪检测荧光强度并计算比值。结果:电泳显示酶切条带符合斑马鱼lect2l基因启动子序列长度,构建的重组荧光素酶报告基因质粒pGL4.20-lect2lp荧光素酶活性的表达是对照组的30.34倍。结论:斑马鱼lect2l基因启动子驱动的荧光素酶表达载体pGL4.20-lect2lp构建成功,双荧光素酶报告基因系统提示斑马鱼c-Myb蛋白对lect2l基因有转录激活作用。(本文来源于《汕头大学医学院学报》期刊2018年02期）
高全新,刘云霞,程玉强,严亚贤,孙建和[6]（2018）在《鸭IFN-β启动子双荧光素酶报告基因系统的构建及活性检测》一文中研究指出通过PCR方法扩增获得6个不同长度的鸭IFN-β启动子DNA片段,并连接至萤火虫荧光素酶报告质粒p GL3.0,构建包含6个鸭IFN-β启动子的报告质粒。分别将构建的报告质粒与内参报告质粒p RL-TK转染至DEF细胞,检测报告质粒在不同刺激下的荧光素酶活性。结果表明:包含鸭IFN-β启动子全长的报告质粒p GL-IFN-β-1593能够有效地被相应刺激物激活;截短研究表明,包含390 bp鸭IFN-β启动子的报告质粒p GL-IFN-β-453的荧光素酶活性与全长基本一致,且一定程度上可降低冗余碱基的不良影响,因此选取该质粒用于鸭IFN-β启动子活性检测。本研究建立的基于荧光素酶双报告基因系统的鸭IFN-β启动子活性检测方法,为后续鸭IFN-β通路研究提供了检测工具。(本文来源于《上海农业学报》期刊2018年03期）
黄滔,曹玉祥,张志坚,周兴路,魏慧君[7]（2018）在《人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测》一文中研究指出目的:利用PCR扩增人源DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因启动子,构建其荧光素酶报告基因载体并对其活性进行检测。方法:运用PCR技术以人非小细胞肺癌细胞A549基因组DNA为模版扩增出目的片段,将PCR产物用KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic上,然后进行转化、菌落PCR及测序验证等。将构建成功的pGL3-proDNMT1-luc重组质粒和内参质粒pRL-CMV-luc共转入H1299细胞中检测DNMT1启动子活性。结果:成功扩增出长度为1634 bp的目的片段,并成功构建出DNMT1启动子荧光素酶报告基因载体,启动子具有活性。结论:DNMT1启动子的成功克隆为进一步研究其分子调控机制和生物学意义奠定了基础。(本文来源于《皖南医学院学报》期刊2018年01期）
王博,张英,王林玉,江山娇,蔡永松[8]（2017）在《STAT3荧光素酶报告基因检测系统的构建及其检测STAT3活化能力的研究》一文中研究指出目的构建STAT3荧光素酶报告基因检测系统并检测STAT3活化能力,为筛选STAT3活性调控相关药物提供实验基础。方法基因合成STAT3反应元件序列,退火形成含酶切位点的双链DNA,内切酶XhoⅠ和HindⅢ双酶切报告基因载体p GL6-TA,T4 DNA连接酶将STAT3反应元件插入p GL6-TA载体多克隆位点,将该载体转染He La细胞,G418筛选STAT3荧光素酶报告基因稳定表达的单克隆He La细胞株。5,10,20 ng/ml不同浓度激动剂IL-6和20,40,80μmol/L抑制剂S3I-201刺激单克隆He La-STAT3-Luc细胞,检测荧光素酶对应的发光值验证STAT3荧光素酶报告基因检测系统的检测能力。结果测序和比对结果显示,STAT3荧光素酶报告基因系统p GL6-STAT3-Luc中STAT3反应元件序列正确;G418成功筛选出稳定表达STAT3荧光素酶报告基因的单克隆He La细胞株;5,10和20 ng/ml浓度IL-6可刺激He La-STAT3-Luc细胞中荧光素酶的活性显着升高(P<0.001),且分别升高5.4,10.3和20.0倍;不同时间点检测1 ng/ml和5 ng/ml浓度IL-6刺激He La-STAT3-Luc细胞,其荧光素酶的活性呈现线性增长趋势;40μmol/L和80μmol/L浓度的抑制剂S3I-201与10 ng/ml浓度IL-6共刺激He La-STAT3-Luc细胞,其荧光素酶的活性显着降低(P<0.001),STAT3活化的抑制率分别为18.9%和43.7%。结论成功构建STAT3荧光素酶报告基因检测系统,该系统具有有效检测STAT3活化水平的能力。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2017年11期）
程佳,庞田田,缑晶[9]（2017）在《利用荧光素酶报告基因检测维生素D生物活性》一文中研究指出目的:为维生素D生物活性或类维生素D活性的药物筛选建立体外检测模型。方法:利用分子生物学技术构建了含有荧光素酶报告基因的载体。PCR扩增CYP24A1启动子上下游区域,并插入到含有红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和荧光素酶报告基因(luciferase reporter gene)的p RP-RFP-luciferase载体中。经PCR、双酶切和测序鉴定后,转染至Hela细胞,以RFP的表达反映转染效率,荧光素酶的活性水平反映维生素D药物活性的强弱。结果:经鉴定,构建的荧光素酶报告基因载体转染Hela细胞后有红色荧光表达,荧光素酶报告基因检测可有效反映1,25(OH)_2D_3生物活性。结论:在体外细胞水平上,利用荧光素酶报告基因检测维生素D生物活性的方法简单可行,为后续筛选和研发具有维生素D活性的药物奠定基础。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2017年07期）
郝明华[10]（2017）在《双荧光素酶报告基因检测miR-147a与PDPK1靶标关系》一文中研究指出背景:随着经济技术水平的不断提高,电离辐射已经完全充满了人们的日常生活。微小RNA(micro RNA,mi RNA)已经被发现在不同类型的辐射损伤中呈差异表达状态。有研究发现mi R-147a是放射损伤后的一个重要差异表达基因,它可以促使正常细胞发生凋亡导致辐射损伤的敏感性。PDPK1介导AKT的磷酸化,PI3K/PDPK1/AKT信号通路在辐射损伤的防护中起着重要作用,辐射后mi R-147a与PDPK1有相反关系。目的:研究mi R-147a与PDPK1之间的靶标关系,为下一步探讨mi R-147a和PDPK1基因在辐射致癌发展过程提供实验基础。方法:利用生物信息学软件Target Scan,mi Randa数据库,预测mi R-147a调控PDPK1基因结合序列。设计合成PDPK1 3'-UTR目的基因片段,将目的基因片段克隆到GV272荧光素酶报告基因载体,通过T4连接酶反应构建PDPK1 3'-UTR双荧光素酶报告基因野生型载体(GV272-PDPK1 3'-UTR)以及突变型载体(GV272-PDPK13'-UTR-mut);另外将mi R-147a PCR扩增片段和GV268荧光素酶报告基因载体相连,通过交换被交换反应构建GV268-mi R-147a重组载体。基因测序鉴定重组载体,验证重组载体构建成功。使用转染试剂Lipofectamine TM 2000 Reagent将这两种重组载体质粒共转染到293T细胞中,然后利用双荧光素酶基因检测系统检测其活性,以及利用western blot和荧光定量PCR验证二者相互关系,进而确定mi R-147a与PDPK1是否具有直接调控作用。结果:PCR基因测序结果表明,PCR扩增后含有PDPK1 3'-UTR和PDPK1 3'-UTR序列的片段的大小和序列与Gene Bank的报道序列一致。成功构建了两个含有mi R-147a结合位点的重组质粒及其突变重组质粒。双荧光素酶报告基因测定结果表明,与用PDPK1 3'-UTR突变载体质粒转染的mi R-147a组相比,荧光素酶活性与阴性对照组相比没有显着差异。通过转染PDPK1 3'-UTR载体,mi R-147a组荧光素酶的活性被明显抑制。荧光素酶活性与阴性对照组相比有显着性差异(P<0.05)。在western、PCR、荧光显微镜验证PDPK1与mi R-147a的表达的实验中,mi R-147a组与阴性对照组相比表达量减少,具有显着性差异(P<0.05);而加过抑制剂后,mi R-147a组表达量增多,具有显着性差异(P<0.05)。结论:成功构建两组重组载体;PDPK1基因是mi R-147a的靶基因,mi R-147a结合到PDPK1基因的3'-UTR区域,mi R-147a和PDPK1具有负性调控表达,mi R-147a对转录后水平的PDPK1基因具有直接抑制作用。(本文来源于《新乡医学院》期刊2017-03-01）
荧光素酶报告基因检测论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:利用sis诱导元素(sis-inducible element,SIE)转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6(IL-6)受体拮抗剂的生物活性。方法:采用脂质体转染法将含有SIE转录因子组件及荧光素酶报告基因的质粒pGL 4.47转入293T细胞,并通过潮霉素压力筛选获得稳定转染细胞株。加入IL-6激活稳转细胞株中的荧光素酶报告基因,构建SIE转录活性荧光素酶报告基因系统,并进一步建立基于此系统的IL-6受体拮抗剂药物的生物学活性定量检测方法。结果:IL-6可激活293T-SIE稳定转染细胞中的荧光素酶报告基因,且具有量效关系。对此系统检测IL-6受体拮抗剂药物的生物学活性进行方法学验证,显示本检测方法准确性及重复性均较好。结论:建立了一种基于荧光素酶报告基因系统的IL-6受体拮抗剂药物生物学活性检测方法,与现有方法相比,具有耗时少、准确性高、重复性好的优势。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
荧光素酶报告基因检测论文参考文献
[1].车路平,栗永华,杨斌,徐智凯,廖瑛.基于萤火虫荧光素酶报告基因检测凋亡的系统构建及鉴定[J].生物工程学报.2019
[2].王自强,王灿,董闪闪,邵泓,陈钢.利用SIE转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6受体拮抗剂的生物活性[J].药物分析杂志.2018
[3].马慧,宋博宇,张嵩岩,谢群慧,徐丽.基于荧光素酶报告基因的二英类生物检测法的发展与应用[J].中国科学:化学.2018
[4].张凤兰,李江.牙槽骨再生关键基因—FGFR1启动子荧光素酶报告基因的重组与功能检测[C].第十二次全国口腔修复学学术会议论文汇编.2018
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[7].黄滔,曹玉祥,张志坚,周兴路,魏慧君.人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测[J].皖南医学院学报.2018
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[9].程佳,庞田田,缑晶.利用荧光素酶报告基因检测维生素D生物活性[J].药物分析杂志.2017
[10].郝明华.双荧光素酶报告基因检测miR-147a与PDPK1靶标关系[D].新乡医学院.2017