导读:本文包含了肝脏发育论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鸭,肝脏,心脏,GATA4,5,6
肝脏发育论文文献综述
欧阳清渊,王郁石,胡深强,李亮,刘贺贺[1]（2019）在《GATA4/5/6基因克隆及其在出生后鸭心脏和肝脏中的发育性表达模式》一文中研究指出旨在克隆和分析鸭内脏器官发育调控关键基因GATA4/5/6编码区,并初步揭示其mRNA表达量与出生后鸭心脏和肝脏发育的关系。本研究对鸭GATA4/5/6基因进行PCR扩增和克隆,对得到的编码区进行序列分析,采用qRT-PCR检测它们在0、2、4、6、8周龄鸭心脏和肝脏中的表达量,并对表达量与心脏和肝脏重量及器官指数进行相关分析。结果,获得鸭GATA4/5/6基因完整编码区序列,长度依次为1 242、1 182、1 173 bp。鸭GATA4/5/6均存在位于N端和C端的2个锌指结构域以及1个GATA-N转录激活结构域,3个基因间GATA-N转录激活域的氨基酸一致率低,而2个锌指结构在GATA4/5/6中共有区域的保守性很高,但GATA5的C端锌指结构和GATA6的N端锌指结构分别缺失了11和15个氨基酸。qRT-PCR结果显示,GATA4/5/6均在0～8周龄鸭心脏和肝脏中一直维持较高表达水平,但不同基因间的发育性表达模式明显不同,提示可能存在功能差异。进一步的相关性分析表明,鸭心脏和肝脏的重量与GATA4表达量极显着相关(P<0.01)。综上,本试验初步揭示GATA4/5/6在出生后鸭心脏和肝脏中持续性表达并具有各自特异的表达模式,并且可能由于GATA4具有更完整的锌指结构域使得其与心脏和肝脏发育关系尤为密切。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年09期）
仲召鑫,董丽,毛俊舟,张永胜,喻礼怀[2]（2019）在《初生重对新生梅山仔猪肝脏发育和脂代谢的影响》一文中研究指出本试验旨在研究初生重对新生梅山仔猪肝脏发育和脂代谢的影响。选取正常初生重(NBW)和低初生重(LBW)新生梅山仔猪各6头,不喂食母乳,出生6 h内颈动脉放血致死。取仔猪血液测定血浆脂代谢指标,屠宰取样测定肝脏器官指数、肝脏脂代谢指标及相关基因的表达。结果表明:与NBW组相比,LBW组新生梅山仔猪的肝脏细胞粒径和面积极显着降低(P<0.01);血浆总胆固醇(TC)含量极显着升高(P <0.01),血浆低密度脂蛋白(LDL)含量显着升高(P<0.05),血浆甘油叁酯(TG)含量极显着降低(P<0.01);肝脏TC含量显着降低(P<0.05),肝脏TG含量和脂蛋白脂酶(LPL)活性极显着降低(P<0.01),肝脏肝脂酶(HL)活性呈下降趋势(P=0.086);肝脏脂肪酸合成酶(FAS)和LPL的基因表达量极显着降低(P<0.01),肝脏激素敏感脂肪酶(HSL)的基因表达量显着降低(P<0.05)。上述结果显示,LBW会抑制新生梅山仔猪的肝脏发育,降低脂代谢功能。(本文来源于《动物营养学报》期刊2019年07期）
韩新卢[3]（2019）在《Gspt1l在斑马鱼肝脏发育中的功能研究》一文中研究指出肝脏是脊椎动物特有的器官,在糖代谢、脂代谢、蛋白质代谢、毒物代谢中发挥着重要作用。肝脏的发育在时空上受到严格的调控,近年来肝脏发育的研究使人们对于肝细胞命运决定和肝细胞分化的分子机制有了更深入的了解,为肝病的治疗提供了重要的理论依据。斑马鱼具有体外发育、胚胎透明、胚胎量大以及发育时间短的优势,已经成为研究胚胎早期发育的理想模式动物,而且调控肝脏发育的分子机制在人类和斑马鱼之间是保守的。斑马鱼肝脏的发育可以大致分为特化(Specification)、出芽(Budding)、生长(Outgrowth)等时期,虽然很多研究揭示了调控肝脏特化以及出芽的分子机制,但肝脏生长和分化过程中分子机制的研究是不完善的。斑马鱼gspt1l(G1 to S Phase Transition 1,like)是人类GSPT1/eRF3α(真核肽链释放因子GTP结合亚基3α,Eukaryotic Peptide Chain Release Factor GTP-binding subunit 3α)的同源基因,属于小GTPase家族。GSPT1通过结合GTP激活真核翻译终止因子1(Eukaryotic Translation Termination Factor 1,eRF1)促进肽链翻译的终止。有研究表明GSPT1还通过参与14-3-3蛋白和凋亡信号调节激酶1(Apoptosis Signal Regulating Kinase 1,ASK1)复合体的解聚诱发细胞凋亡。GSPT1缺失导致细胞周期G1期(Gap 1 phase)停滞,细胞质中未结合mRNA的核糖体亚基增多。在斑马鱼中gspt1l突变会导致胚胎致死,并在发育过程中出现血管增生。正向遗传学筛选是一种发现新颖基因的重要手段,在之前的研究中我们利用ENU(N-ethyl-N-nitrosourea)随机诱变后筛选得到了一系列的肝脏发育缺陷型家系。其中v28突变体中肝脏以及外分泌胰腺、肠道祖细胞特化和出芽正常但生长被抑制,而且v28突变体中肝脏分化基因lfabp、gc的表达延迟,表明肝细胞分化被抑制。通过图位克隆我们发现在v28突变体中gspt1l基因发生了无义突变。并且注射gspt1l野生型的mRNA可以部分挽救v28突变体的肝脏表型,说明gspt1l是v28的突变基因。gspt1l在肝脏、外分泌胰腺、肠道中有表达,这也和v28突变体中消化器官缺陷的表型是相吻合的。为了研究gspt1l在消化器官发育中的作用首先我们通过细胞增殖和凋亡实验证明了gspt11~(v28)突变通过降低细胞增殖速度影响了肝脏的生长。有文献报道斑马鱼gspt1l突变可以激活内质网未折迭蛋白应答(Unfolded Protein Response,UPR)进而使脑血管发育畸形。UPR主要通过ATF6(Activating Transcription Factor 6)、PERK(Double-Stranded RNA-activated Protein Kinase(PKR)–like ER Kinase)、IRE1(Inositol Requiring Enzyme 1)叁条通路调控内质网压力(ER stress)条件下细胞的应激反应,在ER stress前期阶段UPR主要促进细胞生存,当ER stress持续损害细胞时UPR转而促进细胞凋亡。在体外研究中人们发现具有促进细胞生存的ATF6、IRE1通路活性在ER stress第二阶段会逐渐衰减,而我们发现在gspt11~(v28)突变体中IRE1通路活性不会发生衰减。而且ER stress的抑制剂TUDCA(Sodium Tauroursodeoxycholate)可以降低gspt11~(v28)突变体中IRE1通路的活性并部分挽救肝细胞分化延迟的表型,但对肝脏及其他消化器官的增殖缺陷没有作用。为了进一步证明是否IRE1通路的活性是影响肝细胞分化的原因,我们进一步使用Ire1α的特异性抑制剂STF-083010,但我们发现STF-083010不能挽救肝细胞分化延迟的表型。以上结果表明gspt1l对于斑马鱼肝脏及其他消化器官的发育是必须的,gspt11~(v28)突变通过UPR抑制肝脏的分化,而且可能是不依赖Ire1αRNase活性的。(本文来源于《西南大学》期刊2019-05-26）
方可可[4]（2019）在《小鼠肝脏γδT细胞肝内发育过程的初步探究》一文中研究指出目的肝脏是一个天然免疫占优势的免疫器官,其中包括NKT细胞、NK细胞、表达γδTCR 链的γδT 细胞和粘膜相关invariant T(mucosal-associated invariant T,MAIT)细胞。肝脏γδT细胞比例明显高于脾脏、淋巴结和外周血。许多研究表明,γδT细胞存在胸腺外发育途径,小肠是其发育场所之一,我们实验室的前期研究也初步证实肝脏有可能是γδT细胞胸腺外发育的场所,那么γδT细胞在肝脏内是如何发育分化的,与其在胸腺中的发育分化有何不同,尚不清楚。在小鼠个体发育过程中,胚胎肝脏是造血干细胞(HSCs)增殖和分化的主要场所,其含有大量的造血干细胞和造血前体细胞。出生后,造血位点转移至骨髓,但是有多个研究显示,小鼠成年后肝脏中依然残留有少量造血干细胞并且具有自我更新和长期造血造血重建功能。近年来有研究发现成年肝脏中存在一群特有的造血干细胞Lineage-Mac-1+Sca-1+(LMS)细胞。通过移植转输实验发现,其来源于胚胎肝脏造血并且能在肝内发育形成肝脏驻留NK细胞(LrNKs)。那肝脏特有LMS细胞能否在肝脏中发育分化成γδT细胞?肝脏γδT细胞是否存在独特的肝内发育过程?这些问题尚无确切研究。为了探讨上述问题,本课题从以下几个方面对肝脏γδT细胞肝内发育过程进行了初步探究。首先,我们通过检测肝脏、脾脏、胸腺以及小肠上皮内淋巴细胞(IELs)中γδT前体细胞的比例和表型发现肝脏γδT前体细胞比例相对较高,且具有独特的表型特征。其次,通过体内过继转输实验和体外共培养实验从体内体外验证了肝脏γδT细胞前体细胞具有发育分化为成熟γδT细胞的能力。最后,我们通过过继转输胚胎期、新生期和成年期等不同时期肝脏特有造血干细胞LMS细胞,发现其均可以在肝脏中重建出γδT细胞,重建的γδT细胞具有独特的转录因子表达和Vγ亚型,分泌的细胞因子以IFN-γ为主。初步揭示了肝脏γδT细胞独特的肝内发育过程。方法1.分离成年小鼠肝脏、胸腺、脾脏和小肠单个核细胞,流式细胞术检测其中γδT细胞和CD24+CD73+γδT细胞前体细胞的比例及其表型。2.分选成年小鼠肝脏和胸腺γδT前体细胞与OP9-DL1共培养,体外观察肝脏或胸腺来源的γδT前体细胞向成熟γδT细胞发育分化的能力。3.分选CD45.1来源的成年小鼠肝脏和胸腺γδT前体细胞过继转输至半致死量照射(5Gy)的TCRδ-δ+鼠中,体内观察肝脏或胸腺来源的γδT前体细胞向成熟γδT细胞发育分化的能力。4.流式细胞术检测E16.5天小鼠、新生小鼠以及成年小鼠肝脏和胸腺组织中Lin-Mac-1+Sca-1+的表达情况。5.分选CD45.1背景的E16.5天、新生时期以及成年时期等不同时期肝脏和胸腺Lineage-(Lin-)细胞或LMS细胞过继转输至半致死量照射(5Gy)的TCRδ-δ-鼠中,体内观察其向γδT细胞发育的情况、细胞因子分泌的情况以及转录因子表达和Vγ亚型的情况。结果1.成年小鼠肝脏γδT细胞和CD24+CD73+γδT细胞前体细胞比例显著高于胸腺和脾脏。并且肝脏γδT细胞前体细胞表型特点是高表达CD44、低表达CD27;而脾脏和胸腺的CD24+CD73+yδT细胞前体细胞高表达CD27,CD44的表达为中低水平。2.成年小鼠肝脏CD24+CD73-γδT细胞前祖细胞和CD24+CD73++γδT细胞前体细胞通过与OP9-DL1细胞共培养可以分化为成熟的γδT细胞且具有分泌细胞因子的能力。肝脏成熟γδT细胞分泌IL-17水平高于IFN-y,胸腺成熟γδT细胞分泌的细胞因子以IFN-γ为主。3.成年小鼠肝脏CD24+CD73+γδT细胞前体细胞过继转输至TCRδ-/-鼠中,可以发育分化为成熟的yδT细胞。4.胚胎肝脏来源的单个核细胞能在各个组织中重建出γδT细胞,并且重建的γδT细胞优势分泌细胞因子IFN-γ;胸腺来源的单个核细胞重建的yδT细胞优势分泌细胞因子IL-17A。5.体内转输实验结果表明,新生期和成年期小鼠肝脏来源的Lineage-细胞均可以在肝脏中重建出γδT细胞,并且在各组织中重建的γδT细胞几乎全部为分泌IFN-y的γδT1细胞。6.胚胎期、新生期和成年期小鼠肝脏中均有LMS细胞,并且随年龄的增长比例逐渐降低,而胸腺在发育的各个阶段均不存在LMS细胞。7.体内转输实验结果表明,胚胎期、新生期和成年期小鼠肝脏来源的LMS细胞均可以在肝脏中重建出γδT细胞,并且在各组织中重建的γδT细胞几乎全部为分泌IFN-γ的γδT1细胞,表达转录因子T-bet且主要是Vγ1+γδT细胞。结论1.相比于胸腺、脾脏和小肠,肝脏含有较高比例的γδT细胞前体细胞,且这些前体细胞具有独特的表型和功能特点。2.体外和体内实验验证了成年小鼠肝脏CD24+CD73-δT细胞前祖细胞和CD24+CD73+γδT细胞前体细胞均可以发育分化为成熟的γδT细胞。3.不同时期肝脏特有LMS细胞均可以在肝脏中重建出γδT细胞。重建的γδT细胞主要是Vγ1+γδT细胞,分泌的细胞因子主要是IFN-y,并且T-bet的表达高于RORγt。肝脏γ5T细胞存在独特的肝内发育过程。(本文来源于《山东大学》期刊2019-04-20）
冯程程,白凯文,王安谙,葛晓可,张莉莉[5]（2019）在《日粮添加二甲基甘氨酸钠对宫内发育迟缓断奶仔猪肝脏抗氧化能力及免疫指标的影响》一文中研究指出[目的]本文旨在研究日粮添加二甲基甘氨酸钠(DMG-Na)对宫内发育迟缓(IUGR)断奶仔猪器官指数、肝脏抗氧化能力和血清免疫指标的调节作用。[方法]分别选择正常初生体质量(NBW)仔猪和IUGR仔猪各16头,21日龄断奶,饲喂基础日粮或补充1 g·kg~(-1)DMG-Na的试验日粮至49日龄。共分成4个处理组,即NC(NBW+基础日粮)组、ND(NBW+DMGNa日粮)组、IC(IUGR+基础日粮)组、ID(IUGR+DMG-Na日粮)组,每组8头猪。[结果]与NBW仔猪相比,IUGR仔猪肾脏指数显着降低(P<0.05),肝脏谷胱甘肽(GSH)含量减少(P<0.05),抑制羟自由基能力显着降低(P<0.05),血清补体3(C3)水平下降(P<0.05),血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量显着升高(P<0.05)。此外,IUGR仔猪肝脏GST和TNF-αm RNA表达量也显着升高(P<0.05)。日粮添加1 g·kg~(-1)DMG-Na后,49日龄仔猪脾脏指数显着增加(P<0.05),肝中GST活力显着增强(P<0.05),血清C3水平和白细胞介素10(IL-10)含量显着提高(P<0.05),并且仔猪肝脏CAT、GST、GCLC、GCLM和IL-10 m RNA表达量均显着增加(P<0.05)。[结论]IUGR断奶仔猪肝脏的抗氧化能力下降,免疫功能受损。日粮补充1 g·kg~(-1)DMG-Na有增强IUGR断奶仔猪肝脏的抗氧化功能和修复仔猪免疫损伤的潜力。(本文来源于《南京农业大学学报》期刊2019年02期）
钟亚东[6]（2019）在《基于Cre/loxP改进增强子捕获研究肝脏和胰腺β细胞的发育和再生》一文中研究指出肝脏和胰腺是来源于胚胎内胚层的两个重要的消化器官。肝脏在新陈代谢过程中发挥着广泛的作用,包括糖类代谢,脂类的体内平衡和酮体的产生,氨基酸的新陈代谢,对摄入各类化合物的解毒以及维持血液中代谢物和蛋白质的生理浓度。肝实质细胞(占肝脏细胞类型70-75%)负责执行绝大多数这些肝功能,并且和胆管上皮细胞(占肝脏细胞类型10-15%)一起组成肝实质。胰腺分别由执行内分泌功能和外分泌功能的两类腺体构成。外分泌腺细胞产生并且分泌消化酶,占整个胰腺细胞质量的95%。四种胰腺内分泌细胞负责产生不同的胰腺激素,α细胞产生胰高血糖素,β细胞产生胰岛素,δ细胞产生抑生长素,PP细胞产生胰腺多肽。斑马鱼和哺乳动物的肝脏和胰腺在发育的分子调控方面显示出惊人的相似性,它们拥有相同的细胞和亚细胞结构,并且共同拥有保守的生理学功能。所有这些标准都使得斑马鱼能作为一种研究肝脏和胰腺β细胞发育和再生的可靠动物模型。成体中的肝胰器官都具有维持组织更新和损伤后再生的能力,既可以是通过剩余细胞复制而来,也可以通过多潜能的前体细胞分化而来,或则由其他类型的细胞转分化而来。哺乳动物的研究提供了以上所有机制都存在的证据,具体由哪种机制参与肝胰器官的稳态维持和损伤后的再生应答取决于具体的实验操作和分析方法。但是,具体有哪些前体细胞或分化的细胞能贡献给肝胰组织的稳态平衡或者损伤后的再生,以及控制这个过程的分子途径仍然充满了未知。因此去寻找参与肝脏和胰腺β细胞维持稳态或者参与损伤后再生的前体细胞,以及控制这一过程的关键调控基因将是非常引人入胜的研究。目前还未见到肝脏和胰腺β细胞在正常发育和损伤后再生过程中,能直观地在活体中反映特异基因表达的方法手段。在本研究中,我们以组织特异性标记肝脏和胰腺β细胞的转基因斑马鱼为动物模型,结合增强子捕获,大规模地筛选参与肝胰发育,维持生理功能和损伤后再生的相关基因。我们分别构建了标记肝实质和胰腺β细胞的转基因斑马鱼,Tg(fabp10:loxPCFPNTR-loxP-DsRed)和Tg(ins:loxP-CFPNTR-loxP-DsRed),然后再与Tg(10×UAS:Cre,cryaa:Venus)杂交,分别得到以Cre/loxp系统为基础的标记肝脏和胰腺的双转基因鱼Tg(fabp10:loxP-CFPNTR-loxP-DsRed;10×UAS:Cre,cryaa:Venus)和Tg(ins:loxP-CFPNTR-loxP-DsRed;10×UAS:Cre,cryaa:Venus)。与CFP荧光蛋白所融合的硝基还原酶NTR能把无害的剧毒前体MtZ还原为剧毒,从而导致所含NTR的细胞的死亡。我们发现在10毫摩尔浓度MtZ处理24小时后,肝实质细胞和胰腺β细胞都能被完全地诱导凋亡,并且在撤除药物后的24小时和48小时出现明显的再生。通过大量注射含有转座子原件Tol2的GAL4到1细胞期胚胎,我们构建了1000条增强子捕获的F0.在肝脏和胰腺的转基因鱼Tg(fabp10:loxPCFPNTR-loxP-DsRed;10×UAS:Cre,cryaa:Venus)和Tg(ins:loxP-CFPNTR-loxPDsRed;10×UAS:Cre,cryaa:Venus)中,含有在上游激活元件UAS控制下表达的同源重组酶CRE,只有当UAS元件被GAL4转录因子结合的情况下,Cre才能在细胞质表达。让这些增强子捕获F0分别与标记肝脏和胰腺的Tg(fabp10:loxPCFPNTR-loxP-DsRed;10×UAS:Cre,cryaa:Venus)和Tg(ins:loxP-CFPNTR-loxPDsRed;10×UAS:Cre,cryaa:Venus)杂交,然后观察肝脏和胰腺β细胞的荧光标记的颜色变化,从而筛选潜在的肝胰特异性插入。通过1000次杂交筛选,我们得到了一些能使肝脏和胰腺β细胞从蓝色标记变成红色标记的增强子插入,然后定位插入的基因组位置。所有靠近插入位置的候选基因都用原为杂交鉴定能否在肝胰特异性表达的基因。同时运用转基因品系的优势,用能在硝基还原酶Nitroreductase作用下变成细胞毒素的甲硝唑Mtz,特异性的损伤了肝脏实质细胞和胰腺β细胞,并且对这两类细胞的再生过程进行了筛选。我们运用此种方法在肝脏和胰腺β细胞发育和再生过程中,都鉴定出了组织特异性表达的基因,并且对此永久谱系标记方法与传统增强子捕获的效果进行了比较,我们发现基于Cre/LoxP的增强子捕获能筛选到发育再生过程中瞬间表达和相对较弱表达的基因。值得注意的是,在肝脏发育过程中表达的基因rnd2,在β细胞发育过程中表达的基因rab3da和在肝脏再生过程中表达的基因ensab在此改进的筛选中表现出比传统增强子捕获更高的效率。因此,运用永久标记的增强子捕获为筛选器官发育和再生过程中较弱表达,瞬时表达又潜在重要的基因提供了有运用前景的方法。(本文来源于《西南大学》期刊2019-03-25）
郭景龙[7]（2018）在《肝-免疫人源化小鼠中人肝脏细胞对人免疫系统发育影响的研究》一文中研究指出背景人源化小鼠是指具有人组织、细胞,或者表达人基因的小鼠模型,是研究人类疾病和生物学的重要工具。在免疫学领域,人源化小鼠模型主要指在免疫缺陷小鼠中重建功能性人免疫系统的小鼠模型。经过近叁十年的发展,人源化小鼠的构建方法不断改进,人免疫系统的组成和功能日臻完善,已经被广泛应用到生物医学的研究中,如感染、自身免疫性疾病、移植免疫和肿瘤等。其中,通过联合移植人胚胎胸腺组织和胚胎肝脏来源的CD34~+造血干/祖细胞所建立的免疫系统人源化小鼠,在领域内具有重要的影响力。它不仅具有多谱系、高水平的人适应性和天然免疫系统重建,如T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞等,而且人T细胞是在所移植的人胚胎胸腺组织中发育的,具有HLA限制性。此外,它的外周免疫器官如脾脏和淋巴结中具有人免疫细胞组成的结构,如脾脏中的白髓。然而,该人源化小鼠模型肝脏中人免疫系统发育水平仍然相对较低。肝脏细胞占肝脏所有细胞的70-80%。肝脏作为人体的重要器官,它具有代谢、解毒、分泌胆汁、蛋白质合成、储存糖原等功能,这些功能主要是通过肝脏细胞实现的。肝脏也是一个具有免疫耐受特性和防御性免疫反应平衡的免疫器官,它具有丰富的免疫系统组成,包括枯否(Kupffer)细胞、NK细胞、NK-like T(NKT)细胞和树突状细胞(Dendritic cells,DCs)等。据报道,肝脏细胞在肝脏免疫耐受的诱导和维持中具有重要作用,例如,肝脏细胞移植能够诱导同种异基因移植的免疫耐受;肝脏细胞也能通过上调表达Jagged1,与T细胞表面Nocth受体结合,诱导耐受性T细胞的产生。然而,肝脏细胞是否在肝脏特异的免疫系统发育和形成中发挥作用,目前并没有明确的证据。肝-免疫人源化小鼠是指同时具有人肝脏细胞嵌合和人免疫系统重建的小鼠模型。它在研究肝炎病毒HBV和HCV的免疫反应和肝脏免疫病理变化中具有重要应用。然而,在该小鼠中,人肝脏细胞对人免疫系统的发育产生何种影响,仍需要深入的研究。免疫缺陷小鼠肝损伤的特性,对构建肝-免疫人源化小鼠模型是十分重要的。uPA/SCID小鼠(SCID小鼠肝脏中转基因过表达uPA)是具有肝损伤的免疫缺陷小鼠,能够有效的重建人肝脏细胞。然而,uPA/SCID小鼠具有一些缺点:1,自发肝损伤,导致实验窗口必须限制在出生3周以前;2,同源重组导致的转基因丢失;3,繁育能力低。这严重限制了其广泛应用。因此,开发一种可以调控uPA功能的新策略,从而克服上述限制,在领域内十分重要。目的在本课题中,我们首先优化抗小鼠Fas抗体(Jo2)诱导免疫缺陷小鼠肝损伤的实验方案,并评估人胚胎肝脏细胞重建的效果;然后建立肝-免疫人源化小鼠模型,研究人肝脏细胞对人免疫系统发育的影响;此外,我们将探讨基于uPA的小鼠肝损伤新策略及其在理论上的可行性(即uPA-ERT2融合表达时,ERT2是否能够调控uPA的功能);我们用NOD/SCID小鼠制备了肝脏特异表达uPA-ERT2的转基因小鼠(NOD/SCID-uPA-ERT2)。方法我们首先建立基于抗小鼠Fas抗体(Jo2)处理的免疫缺陷小鼠肝损伤模型,通过移植人胚胎肝脏细胞,建立人胚胎肝脏细胞重建的小鼠。通过ELISA、免疫组化和qRCR的方法,评价人胚胎肝细胞重建和发育的情况。然后,我们在人胚胎肝细胞重建的基础上,再对小鼠进行同源人胚胎胸腺组织和胚胎肝脏来源CD34~+细胞联合移植,建立肝-免疫人源化小鼠。通过流式、免疫组化、多色免疫组化和qPCR方法研究人肝脏细胞对外周血、脾脏和肝脏中人免疫系统发育的影响,并且探索可能导致相应影响的原因。通过体外人肝脏细胞和人免疫细胞共培养实验,进一步验证肝脏细胞对免疫细胞存活和扩增的影响。最后,我们设计了基于uPA的小鼠肝损伤新策略,即融合表达uPA-ERT2,并通过细胞迁移实验和uPA酶活性实验,验证ERT2能否能通过它的配体4羟基他莫昔芬(4OH-T)调控uPA的功能。构建基于Tol2转座子系统的载体Mouse albumin promoter/enhancer-uPA-ERT2-pA,和转座酶一起显微注射到NOD/SCID小鼠的受精卵,制备NOD/SCID-uPA-ERT2小鼠。结果注射不同剂量的Jo2抗体(0,0.2,0.4,0.9mg/kg),导致NCG免疫缺陷小鼠血清中ALT的水平显着不同,HE实验显示肝损伤的情况不同。Jo2导致的肝脏细胞死亡主要发生在血管周围。我们发现,不同剂量的Jo2抗体,能够导致小鼠存活的概率不同,分别注射0,0.3,0.4,0.5mg/kg Jo2抗体,48小时内小鼠的存活率分别为100%,100%,67%,33%。间隔24小时连续注射两次Jo2(0.3mg/kg),能够产生持续的肝损伤。连续注射Jo2(0.3mg/kg/3天)10周,NCG小鼠是健康的。人胚胎肝脏细胞经脾脏移植给NCG小鼠,在移植后24小时,可以观察到人胚胎肝脏细胞从小鼠脾脏向肝脏的转移。这些小鼠经过0.3mg/kg/3天的Jo2抗体持续处理10周,外周血中具有持续的、逐渐升高的人白蛋白分泌。免疫组化检测到小鼠肝脏组织中具有人肝脏细胞的重建。应用qPCR比较重建人胚胎肝脏细胞的小鼠肝组织、人胚胎肝组织和成人肝组织中人肝脏细胞特异的代谢基因表达,如CYP1A2(Cytochrome P450 1A2)和CYP2D6(Cytochrome P450 2D6),Phase II酶UGT1A1(Bilirubin UDP-glucuronosyltransferase 1-1),和Transpotors MRP2(Multidrug resistance-associated protein 2)和NTCP(Na+/taurocholate Cotransporting),我们发现人胚胎肝脏细胞在小鼠肝脏中有向成人肝脏细胞方向发育的趋势,但仍然不及成人肝脏细胞成熟。NCG小鼠中重建人胚胎肝脏细胞后,再经过人胚胎胸腺组织和胚胎肝脏来源CD34~+细胞联合移植,应用Jo2进行小鼠肝损伤诱导来促进人肝脏细胞的重建,即可建立肝-免疫人源化小鼠模型。该小鼠的外周血中具有持续的人白蛋白分泌,肝脏中具有人肝脏细胞的重建。该肝-免疫人源化小鼠,相比于免疫系统人源化小鼠,外周血和脾脏中人免疫细胞水平没有明显的区别,脾脏中人免疫细胞亚群包括CD3~+CD4~+T、CD3~+CD4~+T、CD19~+B和CD14~+单核/巨噬细胞的比例也没有明显区别;而肝脏中的免疫细胞的水平,包括CD68~+巨噬细胞、CD11c~+树突状细胞和CD94~+NK细胞,却有明显的升高。进一步研究发现,在肝-免疫人源化小鼠的肝脏中,人肝脏细胞富集的区域具有更多的人免疫细胞重建,这些人免疫细胞包括CD68~+单核/巨噬细胞、CD11c~+树突状细胞和CD94~+NK细胞。重建在小鼠肝脏中的人肝脏细胞能够分泌一系列造血细胞因子,包括IL-3、GM-CSF、M-CSF和IL-15,以及免疫细胞趋化因子MCP-1、CXCL-1和CXCL-10。此外,体外共培养实验证明,人肝脏细胞能够促进人免疫细胞存活和扩增,这些细胞包括CD33~+细胞,NKp46~+细胞,和CD3~+细胞。4T1-uPA-2ERT2细胞系的迁移能力和4T1-GFP相似,都明显低于4T1-uPA。当加入ERT2的配体4OH-T时,尽管它能抑制4T1细胞系的迁移,但是4T1-uPA-2ERT2的迁移能力变得和4T1-uPA一样,即4OH-T处理后的4T1-uPA-ERT2提高了迁移能力。此外,4OH-T处理后,瞬转的293FT-uPA-ERT2细胞的培养上清液和细胞裂解的蛋白中uPA的酶活性升高,并且是4OH-T剂量依赖的。这些结果证明,ERT2能够通过4OH-T调控uPA的酶活性。此外,我们共得到20只F0代NOD/SCID-uPA-ERT2小鼠,随机抽取的10只得到DNA测序的进一步验证。RT-PCR实验表明uPA-ERT2特异在NOD/SCID-uPA-ERT2小鼠的肝脏中表达。与NOD/SCID小鼠相比,NOD/SCID-uPA-ERT2小鼠有一定程度的肝损伤,这可能是由于uPA-ERT2存在一定程度的渗漏。NOD/SCID-uPA-ERT2小鼠分离的肝脏细胞在体外培养的过程中,经过4OH-T处理后,培养上清液中uPA的酶活性升高。更重要的是,NOD/SCID-uPA-ERT2小鼠经过他莫昔芬灌胃处理后,血清中uPA的酶活性和ALT水平明显升高。结论人胚胎肝脏细胞能够在基于Jo2的肝损伤NCG小鼠中有效的重建,它们具有肝向成熟肝脏细胞方向发育的趋势;在肝-免疫人源化小鼠中,人肝脏细胞对外周血和脾脏中的人免疫系统发育没有明显的影响,而对肝脏中人免疫系统的发育具有显着的促进作用;人免疫细胞和人肝脏细胞在位置上共定位,即肝-免疫人源化小鼠肝脏中重建人肝脏细胞的区域具有更多的人免疫细胞;重建的人肝脏细胞能够分泌一系列造血细胞因子和免疫细胞趋化因子;在体外,人肝脏细胞能够促进人免疫细胞的存活和扩增;通过体外实验、离体实验和体内实验,我们证明ERT2能够通过它的配体4OH-T调控uPA的功能。NOD/SCID-uPA-ERT2小鼠通过他莫昔芬能够能够提高肝损伤。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-12-01）
欧阳清渊,胡深强,王继文[8]（2018）在《GATA4/5/6基因表达与鸭心脏和肝脏早期发育的关系初探》一文中研究指出引言在快大型肉禽早期生长过程中,心脏和肝脏的发育往往滞后于体重的快速生长,这可能是致使机体抗病力下降、腿病、猝死、腹水症等疾病多发的主要原因之一。因此,研究肉禽早期心脏和肝脏发育规律及调控机制较为重要。GATA4/5/6主要在心脏和肝脏等器官中表达,通过与其他组织富集转录因子相互作用行使发育调控功能,但目前关于GATA4/5/6在器官发育中的作用研究仅在哺乳动物和鱼类的胚胎(本文来源于《中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集》期刊2018-11-21）
全书月,李忠,梁宏伟,罗相忠,王丹[9]（2018）在《长丰鲢卵巢发育后期的肝脏、卵巢营养成分及脂肪酸变化》一文中研究指出为了解繁殖期长丰鲢卵巢和肝脏营养状况,明确亲鱼的营养程度,对长丰鲢卵巢发育后期的肝脏和卵巢营养成分及脂肪酸组成进行了对比分析。结果显示:卵巢中的粗脂肪和粗蛋白含量先上升后下降,肝脏中的粗脂肪含量逐渐下降,粗蛋白基本稳定不变。在卵巢和肝脏中共检测到21种脂肪酸,其中含量较高的脂肪酸种类分别是C16∶0、C18∶1、C22∶6和C16∶0、C18∶0、C18∶1;在卵巢和肝脏中单不饱和脂肪酸含量丰富,占总脂肪酸含量分别为38.5%~43.1%和33.0%~40.7%;在高度不饱和脂肪酸中,二十二碳六烯酸(DHA)含量在卵巢和肝脏中都是最高,含量分别为12.9%~15.5%和3.4%~5.7%。研究揭示了长丰鲢卵巢发育后期的肝脏和卵巢在营养物质组成上的特点。(本文来源于《淡水渔业》期刊2018年05期）
祝琴芳[10]（2018）在《核仁蛋白Rcl1在斑马鱼肝脏发育过程中的功能研究》一文中研究指出Rcl1是一个在酵母中首次被发现并研究的核仁蛋白,在真核生物中具有较高保守性,并作为SSU组装复合体的组份,参与rRNA的加工过程。此外,在人细胞系中也证实RCL1的缺失影响了 rRNA的加工过程。本课题以斑马鱼作为模式生物,对Rcl1在脊椎动物中的功能进行研究。斑马鱼rcl1基因是一个母源基因。在卵子发育时大量储存于成熟的卵细胞中,并在受精后表达水平下降,随着胚胎发育出现一个全身性的表达小高峰,之后伴随表达水平下降表现出消化器官组织特异性的表达模式。在消化器官如肝脏中,Rcl1定位于核仁中。我们运用两个独立的rcl1突变体品系:假性逆转录病毒插入导致的rcl1lacZ突变体以及利用CRISPR/Cas9基因编辑系统产生移码突变的rcl1cas9突变体,检测Rcl1缺失对斑马鱼早期胚胎发育的影响。发现由于Rcl1的缺失,源自内胚层的肝脏、肠道、胰腺、胆囊、鱼鳔以及下颚咽弓软骨的生长发育受到严重阻滞。此外,其他胚层来源的器官发育也受到Rcl1缺失的影响,但没有内胚层器官严重。同时,确认Rcl1在肝脏、胰腺等芽基生长、扩张中具有重要作用。当缺乏Rcl1时,肝实质细胞无法顺利从G2期晚期进入M期的,导致细胞周期受到阻滞。此外,我们发现斑马鱼Rcl1的缺失影响18S rRNA的加工和成熟过程。在47S pre-rRNA的加工过程中,经A2/2位置的内切作用产生的18S rRNA前体由于Rcl1的缺失,无法对其5'ETS碱基进行移除,使得这一异常产物在rcl1突变体中大量积累,并最终导致18S rRNA大量减少。其作用机理需要进一步的实验进行探索验证。最后,我们通过转录组学分析rcl1突变体中异常表达基因,发现上调的基因主要富集于rRNA的合成和加工、核糖体蛋白复合物的形成以及核糖体细胞器的形成等。这可能是由于Rcl1表达不足导致核糖体生成受影响,从而通过负反馈上调参与核糖体形成的其他基因的表达量。而下调的基因影响了各种代谢反应,与消化器官发育不全表型一致。同时,rcl1基因的缺失导致了 429个基因发生了共计549件可变剪切事件。其中,429个基因中的387个基因的表达量均未发生显着变化。这些剪切异常基因未发现明显功能富集。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-07-16）
肝脏发育论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本试验旨在研究初生重对新生梅山仔猪肝脏发育和脂代谢的影响。选取正常初生重(NBW)和低初生重(LBW)新生梅山仔猪各6头,不喂食母乳,出生6 h内颈动脉放血致死。取仔猪血液测定血浆脂代谢指标,屠宰取样测定肝脏器官指数、肝脏脂代谢指标及相关基因的表达。结果表明:与NBW组相比,LBW组新生梅山仔猪的肝脏细胞粒径和面积极显着降低(P<0.01);血浆总胆固醇(TC)含量极显着升高(P <0.01),血浆低密度脂蛋白(LDL)含量显着升高(P<0.05),血浆甘油叁酯(TG)含量极显着降低(P<0.01);肝脏TC含量显着降低(P<0.05),肝脏TG含量和脂蛋白脂酶(LPL)活性极显着降低(P<0.01),肝脏肝脂酶(HL)活性呈下降趋势(P=0.086);肝脏脂肪酸合成酶(FAS)和LPL的基因表达量极显着降低(P<0.01),肝脏激素敏感脂肪酶(HSL)的基因表达量显着降低(P<0.05)。上述结果显示,LBW会抑制新生梅山仔猪的肝脏发育,降低脂代谢功能。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肝脏发育论文参考文献
[1].欧阳清渊,王郁石,胡深强,李亮,刘贺贺.GATA4/5/6基因克隆及其在出生后鸭心脏和肝脏中的发育性表达模式[J].畜牧兽医学报.2019
[2].仲召鑫,董丽,毛俊舟,张永胜,喻礼怀.初生重对新生梅山仔猪肝脏发育和脂代谢的影响[J].动物营养学报.2019
[3].韩新卢.Gspt1l在斑马鱼肝脏发育中的功能研究[D].西南大学.2019
[4].方可可.小鼠肝脏γδT细胞肝内发育过程的初步探究[D].山东大学.2019
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[8].欧阳清渊,胡深强,王继文.GATA4/5/6基因表达与鸭心脏和肝脏早期发育的关系初探[C].中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集.2018
[9].全书月,李忠,梁宏伟,罗相忠,王丹.长丰鲢卵巢发育后期的肝脏、卵巢营养成分及脂肪酸变化[J].淡水渔业.2018
[10].祝琴芳.核仁蛋白Rcl1在斑马鱼肝脏发育过程中的功能研究[D].浙江大学.2018