塞内卡病毒和口蹄疫病毒二重实时荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立

论文摘要

为了建立一种快速、敏感、特异的能够鉴别诊断口蹄疫病毒（FMDV）和塞内卡病毒（SVV）二重实时荧光RT-PCR方法,根据FMDV及SVV的保守基因序列,设计了2套特异性引物和不同荧光素标记的MGB探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了FMDV和SVV二重实时荧光RT-PCR检测方法,并对二重实时荧光RT-PCR检测方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对98份疑似FMDV和SVV感染的临床样品进行了检测。结果显示,成功建立的FMDV及SVV二重实时荧光RT-PCR检测方法,模板在101～107拷贝/μL有很好的线性关系;对pGEM-T/FMDV和pGEM-T/SVV重组质粒出现阳性扩增信号,但对正常细胞培养物对照和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线,方法特异性较好;最低检测模板浓度为10拷贝/μL;自98份疑似FMDV和SVV感染样品中检出9份FMDV阳性,10份SVV阳性,2份FMDV和SVV双阳性,并且和克隆测序结果一致。本研究建立的FMDV及SVV二重实时荧光RT-PCR检测方法,可用于FMDV和SVV的快速鉴别检测,为FMDV和SVV的鉴别诊断提供特异、敏感和高通量的方法。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 谢彩华,闫若潜,班付国,王东方,赵雪丽,赵兴绪,闫志玲,王翠,刘影,王淑娟,马震原,王华俊

关键词: 口蹄疫病毒,塞内卡病毒,二重实时荧光

来源: 中国兽医学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 甘肃农业大学动物医学院,河南省动物疫病预防控制中心,焦作市动物疫病预防控制中心

基金: 河南省科技创新人才计划资助项目(174200510003),河南省科技攻关资助项目(142102110181)

分类号: S852.65

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.12.05

页码: 2298-2304

总页数: 7

文件大小: 762K

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