共表达分子伴侣提高漆酶在毕赤酵母中的分泌

共表达分子伴侣提高漆酶在毕赤酵母中的分泌

论文摘要

通过共表达分子伴侣的策略提高漆酶在毕赤酵母中的产量。前期基于Pichia pastoris密码子偏好性,合成了来源于Cerrena sp. WR1的漆酶基因,克隆至pPIC9K,转化Pichia pastoris GS115,得到重组菌株PP-L。在PP-L中,分别过量表达蛋白质折叠(BIP、ERO1)、囊泡运输(SEC53、SEC1)、胁迫应激(HAC1、GCN4)相关的6种分子伴侣。结果显示,共表达这6种分子伴侣对分泌表达漆酶的菌株PP-L的正常生长没有影响;共表达BIP使重组菌胞外酶活提高359%,共表达ERO1胞外酶活反而降低22%;共表达其它4种分子伴侣对胞外酶活提高18%~53%。组合共表达BIP和HAC1的重组菌P1较PP-L胞外酶活提高了602%,酶活达到3 896 U/L。推测由于强化内质网中BIP水平进而提高了蛋白质折叠能力,从而提高其分泌效率。该研究结果将有助于发酵法生产漆酶的工业化。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株及质粒
  •     1.1.2主要试剂
  •     1.1.3 培养基
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 毕赤酵母分子伴侣共表达质粒的构建
  •     1.2.2 毕赤酵母转化与筛选
  •     1.2.3 重组菌发酵
  •     1.2.4 重组菌发酵生物量的测定
  •     1.2.5 漆酶酶活测定
  •     1.2.6 SDS-PAGE凝胶电泳分析
  •     1.2.7 漆酶的纯化及酶学性质测定
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 共表达质粒的构建
  •   2.2 共表达菌株产漆酶验证
  •   2.3 漆酶的纯化及酶学性质测定
  •   2.4 共表达分子伴侣影响漆酶蛋白活力机制解析
  • 3 结语
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王晨蕾,刘松,堵国成,陈坚

    关键词: 漆酶,毕赤酵母,分子伴侣,共表达,分泌表达,蛋白质折叠

    来源: 食品与生物技术学报 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学生物工程学院

    基金: 国家自然科学基金项目(31401638),江苏省重点研发计划社会发展项目(BE2016629)

    分类号: Q55

    页码: 1-8

    总页数: 8

    文件大小: 1513K

    下载量: 145

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