LIN28A在GT1-7细胞中过表达对性发育相关基因的影响

LIN28A在GT1-7细胞中过表达对性发育相关基因的影响

论文摘要

[目的]在GT1-7细胞过表达LIN28A,研究其与性发育相关基因表达是否存在调控关系; RNA-seq发现LIN28A参与调控性发育的信号通路和基因。[方法]构建LIN28A慢病毒过表达载体,转染GT1-7细胞,Real-Time PCR检测LIN28A和性发育相关基因在mRNA水平表达变化;将过表达LIN28A的GT1-7细胞进行RNA-seq、生物信息学分析、Real-Time PCR验证,找到影响性发育的信号通路和基因。[结果]与对照相比,LIN28A在GT1-7细胞过表达18倍(P <0. 001),KISS1在mRNA水平显著升高(P <0. 01); KEGG分析,LIN28A相关的差异基因在MAPK信号通路差异显著,MAPK通路筛选到多个性发育相关基因(Fgf21、JUN、Cyp1a1、Rasgrp2),Real-Time PCR验证它们在mRNA水平差异显著(P <0. 05)。[结论]成功构建LIN28A慢病毒过表达载体,LIN28A在GT1-7细胞中过表达会促进KISS1的表达,并且LIN28A可能通过MAPK通路调控性发育。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 实验材料
  •     1.1.2 试剂
  •     1.1.3 仪器
  •     1.1.4 培养基
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 LIN28A慢病毒表达载体的构建、克隆和鉴定
  •     1.2.2 LIN28A慢病毒表达载体转染GT1-7细胞
  •     1.2.3 Real-Time PCR检测LIN28A、KISS1等及转录组测序筛选到的其他性发育基因在mR-NA水平的表达
  •     1.2.4 将成功过表达LIN28A的GT1-7细胞进行RNA-seq
  •     1.2.5 统计学方法与作图
  • 2 结果与分析
  •   2.1 GT1-7细胞转染LIN28A的慢病毒表达载体
  •   2.2 Real-Time PCR检测LIN28A的表达
  •   2.3 LIN28A过表达的GT1-7细胞中KISS1等性发育相关基因的表达
  •   2.4 将LIN28A过表达的GT1-7细胞进行RNA-seq, 数据进行KEGG分析, Real-Time PCR验证
  •     2.4.1 KEGG分析
  •     2.4.2 Real-Time PCR验证
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 范雅婷,王欣,孙贤丽,肖君华,李凯,周宇荀

    关键词: 过表达,细胞

    来源: 生物技术 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 东华大学化学化工与生物工程学院

    分类号: Q344

    DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.01.0015

    页码: 84-89

    总页数: 6

    文件大小: 1231K

    下载量: 67

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