曾嫚妮1陈浩全2
(1广西玉林市第一人民医院检验科广西玉林537000)
(2广西玉林市骨科医院检验科广西玉林537000)
【摘要】目的对3种应用于自动生化分析仪的胶乳增强免疫比浊法检测血肌红蛋白(Mb)试剂进行分析性能验证,并初步应用于临床。方法在OLYMPUS2700全自动生化分析仪上对四川迈克、太原川至和宁波美康生产的胶乳增强免疫比浊法Mb试剂(标为A、B、C)进行性能验证,对3种方法的精密度、线性范围、干扰因素进行评估,并与美国贝克曼库尔特公司生产的化学发光免疫分析仪ACCESS2及配套试剂进行比对。结果试剂A、B、C的批内CV均小于试剂盒声明不精密度;试剂A、B、C的定量测定下限基本满足检测要求;线性范围相关均良好。干扰物深度不同对试剂的干扰程度各不相同；试剂A、B、C与贝克曼库尔特化学发光免疫分析仪异常的一致率试剂B最高。结论应用于自动生化分析仪的3种胶乳增强免疫比浊法测定Mb试剂盒,具有较高的精密度和灵敏度,与贝克曼库尔特公司的化学发光免疫分析仪结果相关良好;可满足临床测试要求。但抗干扰能力存在差异,部分试剂参考范围也有待进一步验证。
【关键词】肌红蛋白指示剂和试剂胶乳增强免疫比浊法自动分析参考值
本室在OLYMPUS2700自动生化仪上对3种TURBIDIMETRY法Mb试剂盒的精密度、线性范围、灵敏度、抗干扰能力、参考范围验证等性能进行分析评价，并与美国贝克曼库尔特公司的化学发光免疫分析仪ACCESS2进行了方法学比对，结果报告如下。
1材料与方法
1.1对象
(1)精密度验证混合血清：将已知Mb浓度的患者血清混合，制备高、低浓度(约250ng/mL和10ng/mL)两份混合血清，各分装20份于-20℃冻存用于精密度试验。
(2)干扰试验血清：收集高、低Mb浓度两份患者混合血清(约200ng/mL和12ng/mL)用于干扰试验。
(3)乳糜干扰血清：留取2011年6月肉眼观察明显呈乳糜状态的门诊患者血清36份，用于临床患者的乳糜血清标本对Mb的干扰试验。
(4)比对血清：从2011年6月门诊患者血清标本中选取90份(其中30份来自心内科就诊的已明确诊断的患者)，用于3种TURBIDIMETRY法试剂与化学发光免疫分析仪比对及判断Mb符合率初步评估。
(5)参考范围验证血清：参考CLSI28-A2文件，从2011年6月体检人群中选取肝心功能正常健康人120名，其中男60名，女60名，年龄在20～83岁，用于参考范围验证试验。
1.2仪器与试剂
(1)仪器：OLYMPUS2700全自动生化分析仪，BeckmanCoultet公司生产的化学发光免疫分析仪ACCESS2。
(2)试剂：试剂A：四川迈克；试剂B:太原川至；试剂C：宁波美康。化学发光试剂由BeckmanCoultet公司提供，及各公司的配套校准品。国际试药株式会社出品的干扰物。日本第一化学药品株式会社出品的三酰甘油(TG)试剂上。
1.3方法
(1)精密度评价。
(2)灵敏度评价。
(3)线性范围评价。
(4)干扰试验。
(5)临床患者乳糜血清标本对Mb检测的干扰试验。
(6)与化学发光法比对试验。
(7)参考范围验证。
(8)与化学发光法的一致率比较。
1.4统计学分析
应用MICROSOftExcel2003及SPSS16.0软件进行统计学分析。采用K-S正态分布检验检查数据正态性，以P＞0.05表示数据呈正态分布。相关性分析采用Pearson相关分析，P＜0.05表示相关具有统计学意义。线性回归采用简单线性回归分析，以P＜0.05表示回归具有统计学意义。采用Wilcoxon秩和检验比较各试剂检测离心前后血清中Mb结果差异，以P＜0.05表示两者存在差异。采用Kappa一致性检验比较各试剂与化学发光法判定Mb异常时的一致性，以Kappa值≥0.75表示两者一致性为优。
2结果
2.1精密度试验
3种试剂的实测精密度均小于各自试剂盒标注的精密度，变异较小，可满足临床应用。
2.2灵敏度评价
试剂A、B、C各自试剂说明书提供的定量下限分别为0.14、0.23、0.09ng/mL本试验中计算得到试剂A、B、C对于Mb测定结果的定量下限分别为0.15、0.22、0.20ng/mL，试剂C高于厂商标示灵敏度较多。
2.3线性范围的评价
试剂A、B、C的线性范围均良好。
2.4干扰试验
试剂A在测定Mb浓度较低的标本时受Hb及乳糜浊度负干扰较为明显。
2.5临床患者乳糜血清标本对Mb检测的干扰试验
试剂A高速离心前后结果差异有统计学意义(P=0.000)，且离心后较离心前平均低7.31%。试剂B离心前后相比差异无统计学意义(P=0.856)，平均百分偏倚为1.42%。试剂C离心前后结果差异亦有统计学意义(P=0.015)，但平均偏倚为1.02%。
2.6与贝克曼免疫化学仪比对
应用SPSS软件对试剂A、B、C与贝克曼免疫化学仪Mb测定结果进行简单线性回归分析。试剂A、B、C与贝克曼免疫化学仪测定结果呈良好的线性关系(P=0.001)，但平均百分偏差(Bias%)较大，分别为25.3%、23.5%、27.6%，均超过10%。
2.7参考范围验证
试剂A和C初步评估建立的参考范围上限均明显高于说明书提供的参考范围上限，试剂B与说明书提供的参考范围无差异。
2.8与化学发光法的一致率比较
试剂B和试剂C与化学发光法一致性较好。若采用本室临床初步评估建立的参考范围上限重新评估，试剂A判定一致率可提高至98.6%，Kappa值为0.963(P=0.000)，较使用厂商参考范围时显著升高；试剂C判定一致率提高至98.4%，但试剂B和C较使用厂商参考范围判定符合率差异无统计学意义，Kappa值分别为1.000(P=0.000)、0.826(P=0.000)。
3讨论
本室参考CLSI文件进行部分调整后对3种胶乳增强免疫比浊法试剂的精密度、线性范围、灵敏度、抗干扰能力、参考范围等性能进行了分析评价，并与美国贝克曼库尔特公司的化学发光免疫分析仪ACCESS2进行了方法学比对，结果显示3种免疫比浊法试剂精密度、线性范围、灵敏度等基本检测性能参数接近化学发光法试剂，满足临床检测需求。
参考文献
[1]潘柏申.心肌肌钙蛋白的临床应用.上海医学检验杂志，2000，15(5)：264-266.
[2]潘柏申.心肌损伤标志物的研究进展与心肌梗死诊断的修订.临床研究杂志，2002，20(3)：129-132.
[3]王华先，孟宪琴.心肌梗死患者血清肌红蛋白测定的临床意义.检验医学与临床，2007，4(7)：684.