MiR-499靶向HMGB1保护缺氧复氧心肌细胞损伤的分子机制探讨

MiR-499靶向HMGB1保护缺氧复氧心肌细胞损伤的分子机制探讨

论文摘要

目的研究miR-499对缺氧复氧心肌细胞H9c2损伤的影响,并探讨其作用机制。方法运用免疫印迹法(Western blot)检测缺氧复氧心肌细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、免抗人单克隆抗体(Bax)、caspase-3的蛋白表达;将H/R+miR-con组(转染miRcon)、H/R+miR-499组(转染miR-499 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、miR-499组(转染miR-499mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-499组(转染anti-miR-499)、H/R+si-con组(转染si-con)、H/R+si-HMGB1组(转染si-HMGB1)、H/R+miR-499+Ctrl组(miR-499 mimics和pcDNA3.1共转染)、H/R+miR-499+HMGB1组(miR-499 mimics和pcDNA3.1-HMGB1共转染),均以脂质体法转染至H9c2细胞;实时荧光定量聚合酶链锁反应(q RT-PCR)检测各组细胞中miR-499的表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与NC组相比,H/R组细胞中HMGB1蛋白表达显著升高,miR-499表达显著降低(P<0.05);过表达miR-499或敲减HMGB1均可显著下调H/R H9c2细胞凋亡率,显著下调Bax、caspase-3的蛋白表达,上调Bcl-2的蛋白表达(P均<0.05);过表达HMGB1可逆转miR-499对H/R H9c2细胞凋亡的抑制作用。结论 MiR-499可抑制缺氧复氧心肌细胞H9c2凋亡,保护心肌细胞,其机制与靶向HMGB1有关,将可为心脏病的治疗提供新靶点。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 细胞培养及模型制造
  •     1.2.2 细胞转染
  •     1.2.3 Western blot实验
  •     1.2.4 qRT-PCR实验
  •     1.2.5 Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡
  •     1.2.6 双荧光素酶报告基因检测实验
  •     1.2.7统计学处理
  • 2 结果
  •   2.1 缺氧复氧H9c2心肌细胞对miR-499和HMGB1表达的影响
  •   2.2 过表达miR-499抑制缺氧复氧H9c2心肌细胞凋亡
  •   2.3 miR-499靶向HMGB1
  •   2.4 敲减HMGB1抑制缺氧复氧H9c2心肌细胞的凋亡
  •   2.5 过表达HMGB1逆转miR-499对缺氧复氧H9c2心肌细胞凋亡的抑制作用
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 周慧良,甘受益,李宾,冯光瑞,宋巧巧,王淼

    关键词: 高迁移率族蛋白,缺氧复氧心肌细胞,凋亡

    来源: 中国循证心血管医学杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 心血管系统疾病

    单位: 咸宁市中心医院湖北科技学院附属第一医院心血管内科,湖北科技学院内科教研室

    基金: 十二五国家科技支撑计划(2011BAI11B01),咸宁市中心医院湖北科技学院附属第一医院项目资助(2018XYA006)

    分类号: R541

    页码: 1456-1460

    总页数: 5

    文件大小: 1325K

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