于恒峰（连云港市赣榆县瑞慈医院江苏连云港222100）
【摘要】我国现行的《中国药典》对于药品微生物的限度检查在检查的基础上还需要进行方法验证。企业所生产的药品必须要对全部采用微生物限度检查的产品进行检查方法的验证，通过验证之后才能够得到可靠的结论。本文就抗菌药物微生物限度检查要点进行了一定的分析和探讨。
【关键词】抗菌药物微生物限度检查验证
【中图分类号】R978【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）19-0123-02
微生物限度的检查是对于非规定的灭菌制剂和制剂所使用的原料、辅助材料进行微生物污染检查。药品微生物限度检查法验证工作毫无疑问是一项系统性的工程，其中考虑到细菌选择、供试液处理、对供试品进行考察以及试验方法和环境等等方面，这些都是影响微生物的因素。
一．抗菌药物微生物限度检查中的完整性分析
对于抗菌药物进行微生物限度检查，验证过程如果不够完善，遗漏或者是缺少了某些环节，就不能够完善体现供试品以及试验过程对于微生物的影响，干扰了最终结果的判断与分析。
我国的药典规定了，计数方式的验证应该采用五种试验菌，也就是金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、枯草芽胞杆菌和黑曲霉菌。不能够只采用部分菌种进行验证，有的供试品中含有抗微生物的物质，需要通过一定的方法来祛除或者抑制该物质的活性。在进行计数验证的时候应该进行3次的平行试验，需要对其进行分别取样3次，在刺激出上进行判断计算。
二．抗菌药物微生物限度检查中的科学性分析
1.菌种选择
我国的药典规定了微生物限度检查中使用的试验菌理论上不能够超过5代，同时需要根据不同的制剂的给药方式或者是剂型来对菌种进行挑选控制。不过在当前的申报资料中，经常会出现忽视菌种选择的现场，他们所选择的控制菌并不符合有关要求。
对于某些包含有动物组织的制剂，我国的新版药典规定需要特别对沙门菌进行检查，如果是非动物组织，但是是来源于动物的，比如在牛尿中提取的药品，是否要对沙门菌进行检查，并没有明确的规定。不过保险起见，考虑到药品的来源以及在收集保存过程中可能受到的污染，通常还是倾向于检查沙门菌。胶囊的外壳主要成分也是来源于动物皮或者骨头，因此，胶囊外壳或者是胶囊本身都应该对沙门菌检查。
2.供试液的制备
中国药典的200年版规定了需要按照供试品的物理化学和生物学方面的性质，来相应的选择供试液的制备途径。
如果检查的药物样品是脂溶性的药品或者是包含有脂溶性基质的制剂，如果采用常规的方法是很难制作均匀的供试液，样品中被污染的微生物并不能够分散游离在供试液里面，自然也就不能够准确的检查到样品中的污染情况。根据相似相溶的原理，有机溶剂能够对脂溶性药品或者所用制剂中的脂溶性基质进行提取，使用稀释剂对其洗脱，静置一段时间，取得稀释剂层作为试液。实验中使用的有机溶剂要求对于微生物是不能造成损害的。在检查沙门菌的时候，药典规定了供试液的检查量是10g或者是10毫升，相对于2000年的药典并没有改变检查限度，但是提高了质量方面的要求。有的申请资料并没有考虑到这个问题，仍然采用的过去的检验量。
3.稀释剂对照组
在采用细菌计数方法进行验证时，基本上所有的抗菌药物试验都应该过滤供试液，加以冲洗，从而祛除抑菌的作用，并且需要在最后一次冲洗过程中加入试验菌，再进行过滤。有的申请组织在制作实验组供试液的时候，直接在冲洗步骤前就添加了试验菌，有的是在过滤后就添加了试验菌。
在建立稀释剂对照组的时候，并不是单纯的考察稀释剂对于微生物限度所产生的影响，还需要考虑到供试液制备程序中对微生物带来的影响。因此，在进行对照组实验的时候，并不应该采用稀释剂加菌液进行注皿培养，这样的方式是不妥当。科学的处理方式是借用供试液的处理方法，比如薄膜过滤法计数时，需要使用相应的稀释液来取代供试品，在加入试验菌，模仿实验组的供试液制度方法，进行薄膜过滤和冲洗，最后培养。在这个时候，需要注意到稀释剂对照组中加入试验菌的步骤需要和试验组有所差异，同时还需要注意到保持对照组冲洗量和冲洗方法需要和试验组保持一致。
4.菌液的浓度
要保证试验方法的可行性，我国的药典明文规定了各种菌液的浓度。在进行试验的过程中人们应该注意菌液浓度是否在该规定范围之内。比如对于检查结果进行判断，细菌、霉菌还有酵母菌的浓度应该在50-100cfu之间，但是可能由于试验中的多种因素使得菌落数偏大或者偏小，计数的结果出现了一定的偏差，在这种情况下需要再次试验。
5.阴性对照组
有的时候对控制菌进行检查，人们为了验证这种菌类专门属性从而设置了阴性对照组。那么阴性对照组所使用的曾军培养基应该和验证菌保持一致。比如在验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌检查法的时候，阴性对照菌使用的是金黄色葡萄球菌，这种情况下金黄色葡萄球菌使用的增菌培养基需要跟前者保持一致，而不是选择金黄色葡萄球菌通常采用的常规曾军培养基。
6.统一性处理
有的申请人为了保证自己的验证资料能够一次性通过审核，无论什么品种都采用的是薄膜过滤的方法。更有甚者所有品种的冲洗量都选择的是1000ml，这样的方式不仅大大增加了试验过程的复杂性，还容易造成浪费，同时还可能破坏微生物的生物活性，影响到试验结果。
三．总结
微生物限度检查工作是一项复杂的工作，其中任何一个环节的失误都可能影响到最终的实验结果，在对抗菌药物进行微生物限度检查的时候，需要做好每一个细节，根据规定来进行试验，才能够得到进行正确的判断，得到科学的结果。
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