导读:本文包含了二磷酸核苷酸酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:核苷酸,磷酸,层析,亲和,细菌,效应器,核蛋白。
二磷酸核苷酸酶论文文献综述
张晓,杨洋,孙梅好[1]（2014）在《一种基于酵母3',5'-二磷酸核苷酸酶的蛋白亲和层析纯化体系》一文中研究指出蛋白质是生命活动的主要承担者。蛋白质的结构和功能的研究在后基因组时代尤为重要。为深入分析蛋白质的结构和功能,研究者们需要分离纯化大量不同的蛋白质。亲和层析具有高选择性、高活性回收率和高纯度等特点已成为纯化蛋白质等生物大分子最有效的技术之一。目前,常用的亲和层析标签有多聚组氨酸、谷胱甘肽转硫酶、麦芽糖结合蛋白等,但不同的标签各有其优缺点。例如:研究发现如果表达的蛋白表面有几个接近的组氨酸,此蛋白可能结合Ni-NTA介质,最终和目的蛋白一同洗脱下(本文来源于《今日科技》期刊2014年03期）
杨洋[2]（2013）在《酵母3’5’二磷酸核苷酸酶的生化应用》一文中研究指出硫是生命活动的必需元素,主要以-2和+6价发挥生物学功能。硫的活化是硫同化代谢的关键反应,包括ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)催化硫酸盐与ATP反应生成腺苷-5’-磷酰硫酸(adenosine5'-phosphosulfate,APS)和焦磷酸(pyrophosphate,PPi)以及腺苷-5’-磷酰硫酸激酶(adenosine5'-phosphosulfate kinase,APSK)催化APS的3’羟基磷酸化生成3’-磷酸腺苷5’-磷酰硫酸(adenosine3'-phosphate5'-phosphosulfate,PAPS)两步反应。PAPS作为胞内硫酸化反应的硫供体以及PAPS还原酶的底物,可生成3’,5’二磷酸腺苷(3',5'bisphosphate adenosine,PAP)。酵母3’,5’二核苷酸酶(Yeast3',5'-Bisphosphate Nucleotidase,YND),亦称为HAL2,催化PAPS或者PAP脱磷酸生成APS或AMP,参与细胞硫代谢和抗盐性。YND和PAP之间具较高的亲和力,其KmPAP为亚微摩尔。此高亲和力及PAP琼脂糖的存在使得YND作为亲和标签纯化蛋白成为可能。亲和层析是最常见的蛋白纯化方法之一,不同的纯化标签都有自己的优缺点,开发新的标签以及组合使用不同标签可不断开发新的亲和层析工艺。为探索YND作为一个蛋白纯化亲和标签的可行性,我们对YND的特性进行了深入分析。结果表明KmPAP和kcatPAP分别为0.3μM和11s-1,在Ca2+或Mg2+存在的情况下其Kd分别为0.008和0.49μM。pH影响YND对PAP的亲和力,pH7.5和pH8时,其亲和力最强Kd为～8nM。通过构建一系列表达YND,YND-APSK,YND-蛋白酶载体,基于Ca2+可有效促进YND·PAP的形成,抑制YND对PAP的水解,且易于被EGTA螯合进行洗脱等,我们合理设计了YND融合蛋白的纯化步骤,并成功纯化、分析大肠杆菌APSK。通过比较不同标签的经济性、促溶、流速、产品纯度和产量等特性,我们发现YND是有效、经济的原核蛋白表达、纯化标签。YND活性的改变可调节胞内PAP的浓度,从而影响磺基转移酶,酰基载体蛋白合酶和RNA加工酶的活性,进而影响细胞的生长发育。PAPS是胞内硫酸转移酶的底物,YND如何区分PAPS和PAP尚无相关报道。通过分析其晶体结构,发现G236的R基团,可能对于PAPS或者PAP的结合具有一定的影响。将G236突变为较大R基团氨基酸,对其相应蛋白进行活性分析发现随着R基团的增大,对PAPS的亲和力降低。G236V水解PAP的催化效率为水解PAPS的5592倍,使得G236V成为PAP特异性3’磷酸核苷酸酶。通过和肌激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶偶联,G236V可作为偶联酶分析硫酸转移酶的酶学特性。APSK催化APS磷酸化的机理已经较为清楚,但作为APS类似物的AMP是否可以作为APSK的底物,尚无相关报道。通过对APSK的叁维结构进行分析发现,R68同时和APS的α磷酸根和p硫酸根形成氢键,稳定APS的结合。而K侧链基团比R短2.4A,R68K突变将导致K不能和距离较远的p硫酸根离子相互作用,从而减弱APS的亲和力,而增加与α磷酸根离子的相互作用,可能提高AMP的亲和力。我们的研究结果表明AMP可作为APSK的底物,反应生成PAP。R68K突变体的最适底物变为AMP,KmAMP降低为对照的0.2倍,而催化效率提高5倍。此结果为进一步构建AMP3’羟基激酶提供了基础。本文构建了一种基于YND的亲和层析体系,一种可用来测定硫酸转移酶活性的PAP特异3’核苷酸酶和可磷酸化AMP形成PAP的3’羟基激酶。(本文来源于《浙江师范大学》期刊2013-04-02）
张巨源[3]（2007）在《蓝细菌基因组比较分析：异形胞发育进化及3’，5’-二磷酸核苷酸酶HalA的功能研究》一文中研究指出蓝细菌是地球上最为古老的物种之一。一些丝状蓝细菌在缺氮环境中,菌丝体上有部分细胞会分化成专门执行固氮功能的异形胞(heterocyst)。化石证据和地质学证据表明,异形胞大约出现在24亿年前,是地球上已知的最早出现的细胞分化现象之一。异形胞形成机制是蓝细菌研究的重要领域。最近二十多年来,发现了近百个与异形胞发育密切相关的基因(如氮代谢过程中的全局调控基因ntcA,异形胞分化中心调控基因hetR,固氮酶基因nifHDK,异形胞胞被合成基因hepA、hglE等)和一些小分子信号(如2-OG、Ca~(2+)等)。这些基因和信号分子构成了一个复杂的异形胞分化调控网络。然而该调控网络在进化中是如何形成的却仍不清楚,与此相关的研究也还处于空白。在本论文中,我们用比较基因组学的方法研究了异形胞发育的进化过程。我们检测了产异形胞蓝细菌Anabaena PCC7120中已知的异形胞发育相关基因(het基因)在其他18种蓝细菌基因组中的分布,发现大部分的het基因还存在于其它不产异形胞菌株的基因组中。根据分布情况,het基因可分为以下几类:一,在多数蓝细菌中都存在的基因;二,只在丝状菌株中存在的基因;叁,只在固氮菌株中存在的基因;四,主要在产异形胞菌株中存在的基因;五,其他分布类型的基因。利用分布情况和序列信息,我们分析了每个het基因的进化过程。结果表明,一,het基因出现在蓝细菌进化的各个阶段;二,绝大部分的het基因在异形胞分化现象出现之前就已经存在于蓝细菌基因中了;叁,水平基因转移在异形胞进化过程中发挥了重要作用。在Anabaena PCC7120中,HetR和PatS共同调控了异形胞分化起始以及其在菌丝上的分布。我们在被检测的几种不产异形胞的丝状蓝细菌中皆发现了HetR的表达,并在已知基因组序列的几种丝状蓝细菌(包括不产异形胞菌株TrichodesmiumIMS101和Arthrospira platensis的基因组)中皆发现了patS基因。Arthrospira platensis细胞内的HetR蛋白在缺氮后表达增加。在Anabaena PCC7120中Arthrospiraplatensis的hetR基因(arhetR)会刺激异形胞分化,而Arthrospira platensis的patS基因(arpatS)会抑制异形胞分化,并且它们也分别受到与Anabaena自身hetR和patS类似的转录调控。此结果表明,hetR和pats基因在产异形胞蓝细菌和不产异形胞蓝细菌的共同祖先基因组中就已存在了,并且那时它们就已形成了相互作用的方式。基于上述的生物信息分析和实验工作,我们推测了异形胞发育的进化过程。在异形胞出现之前,许多重要的异形胞发育调控因子之间就已经形成了一个基本氮利用调控网络,异形胞的进化实质上就是一个不断获取必需的het基因,并将其纳入该网络中的过程。从根本上说,异形胞的产生是蓝细菌为了更好利用氮源而不断适应环境的结果。本研究结果将有助于了解生物界最初的演化过程,也可以为研究高等生物的细胞分化提供启示。我们在螺旋蓝细菌基因组中发现了长度为957b bp的基因,其编码序列与酵母和植物中的3',5'-二磷酸腺苷-5'-磷酸酶(PAPase)很相似,该基因被命名为halA。PAPase是硫同化途径中必需的一个酶,它负责将硫同化过程中产生的毒性副产物3',5'-二磷酸腺苷-5'-磷酸(PAP)转化为无毒性的AMP。在真核生物中已经发现了多个PAPase,它们对Li~+/Na~+都非常敏感,极低浓度的Li~+/Na~+就可使其失去活性,从而引起细胞内PAP的积累,最终产生细胞毒性。作为细胞内对盐离子最敏感的酶之一,PAPase的耐盐能力往往决定了细胞的耐盐能力。我们将halA基因在E.coli中进行了克隆、表达和生化性质研究。酶活测定表明HalA是一种Mg~(2+)依赖型的PAPase,它对PAP和3'-phosphoadenosine-5'-phosphosulfate(PAPS)皆具有特异性的降解活性。比起大多数的PAPase,HalA对Li~+和Na~+具有优良的耐受性(Li~+和Na~+对HalA活性的50%抑制浓度[IC_(50)]分别为3.6 mmol/L和600 mmol/L)。结构分析显示,HalA与Hal2p蛋白在底物结合位点存在一定差异,此差异很可能使得HalA蛋白表现出更好的Li~+/Na~+耐受性,并对PAP具有较弱的结合力。表达了HalA的大肠杆菌在含高浓度Li~+的培养基中生长情况明显比对照好,意味着原核生物中PAPase可能同样是盐离子毒性的靶点。由于HalA是已知对Na~+具有最不敏感的PAPase,因此在其他生物中表达HalA将可能是有效提高生物耐盐能力的途径之一。以前关于PAPase的研究工作都仅限于真核生物,我们在此首次对原核生物的PAPase进行了深入研究。此研究结果不仅可为了解原核生物硫代谢具体过程提供有用信息,也可为将PAPase进行改造以提高生物的硫同化效率及抗盐能力提供依据。(本文来源于《华中农业大学》期刊2007-08-01）
邹洁[4]（2004）在《螺旋蓝细菌3’，5’-二磷酸核苷酸酶基因ArHAL功能的初步研究》一文中研究指出人们早就发现许多螺旋蓝细菌Arthrospira sp.能生长在较高盐碱的环境中，但因其遗传改造手段的局限性，对其抗性机理尚未有深入的了解。目前，一株钝顶螺旋蓝细菌Arthrospira platensis的全序列测定已经完成，这将有利于从分子水平上对螺旋蓝细菌的抗性机制进行阐明。螺旋蓝细菌Arthrospira sp.在分类地位上属于细菌，但它在很多方面具有与植物类似的特征，因此研究结果有助于对高等植物的抗盐机理进行补充。 本研究利用生物信息学方法找出了一株钝顶螺旋蓝细菌基因组中与酵母3’，5’-二磷酸核苷酸酶基因HAL2高度同源的基因ArHAL。将该基因克隆到大肠杆菌表达载体上，并在大肠杆菌BL21(DE3)中超量表达，测定该基因体外表达产物的酶学性质以及超表达大肠杆菌的抗盐能力；同时，通过叁亲本接合转移的方法，进一步将该基因转入鱼腥蓝细菌中，在鱼腥蓝细菌体内进行了超量表达，并检测了该基因对蓝细菌抗盐能力的影响。 1．同源序列分析 经生物信息学方法查找分析，发现钝顶螺旋蓝细菌Arthrospira platensis的基因组中存在一个与酵母Saccharomyces cerevisae中3’，5’-二磷酸核苷酸酶基因HAL2高度同源的基因，我们暂将它命名为ArHAL。这个基因含有一个957bp的ORF，它编码了一条319个氨基酸的多肽链。分析发现该基因与HAL2同属于一类被称作肌醇单磷酸酶的蛋白家族，该蛋白家族具有非常保守的结构域及活性位点。前人的研究结果已证实：在酵母及拟南芥中，这类酶与硫的同化代谢途径相关，并且是金属离子产生毒性的靶点；同时这类酶的超表达能使生物表现出对高浓度盐离子的耐受性。 2．钝顶螺旋蓝细菌Arthrospira platensis基因ArHAL的功能研究 首先利用钝顶螺旋蓝细菌基因组中该基因的序列设计带有EcoR Ⅰ和Nde Ⅰ双酶切位点的特异性引物。在PCR的辅助下，将该基因克隆到A／T克隆载体pMD18-T上，利用PCR扩增片段中的EcoR Ⅰ和Nde Ⅰ双酶切位点将基因插入大肠杆菌表达载体pET28a(+)中，并转入大肠杆菌BL21(DE3)中获得超表达ArHAL基因的菌株。 在IPTG的诱导下获得该基因的超表达蛋白，经亲和层析柱纯化后测定其磷酸酶的性质。动力学研究表明该酶对底物PAP，PAPS，5’-ADP的Km值分别为：3.56，0.52，41.5mmol／L；V_(max)分别为：1111，125.6，263.2μmol／L.min~(-1).mg~(-1)，因此该酶初步定义为3’，5’-二磷酸核苷酸酶。同时测定了金属离子对酶活性的影响，结果表明：在K~+存在的情况下，该酶的活性上升了近20％；Na~+对酶活的半抑制浓度约为600mmol／L；1mmol／L的Li~+几乎对酶活没有影响。这个来源于Arthrospira platensis的ArHAL产物与来源于其它物种的3’，5’-二磷酸核苷酸酶相比，最显着的差别在于该酶不受低离子浓度Li~+的抑制。其原因有待进一步研究，但很大的可能是氨基酸序列中活性位点发生了改变。 同时分别在LB培养基与基本培养基中检测超表达大肠杆菌菌株的抗盐能力是否有所改变。结果显示:与对照菌BL21相比，超表达菌株BL21/pRLArHAL在基本培养基中的生长较好;但在含盐的基本培养基中，两种菌的生长差异性并未明显增大。 进一步将该基因克隆到在蓝细菌和大肠杆菌中都能表达的穿梭载体p肚25C中，通过叁亲本接合转移，使其在鱼腥蓝细菌PCC7120中超表达。转基因蓝细菌经PCR和RT- PCR验证为阳性克隆子，表明该基因在鱼腥蓝细菌PCC7120中确实得到了转录。但在盐胁迫条件下，未观察到转基因蓝细菌与对照菌之间在抗盐能力上有明显的差异，其原因有待进一步研究。(本文来源于《华中农业大学》期刊2004-05-01）
贾丽,廖栩泓[5]（2002）在《同时测定核苷酸口服液中二磷酸核苷的毛细管区带电泳法》一文中研究指出建立了一种毛细管区带电泳法 ,用于同时测定5种核苷酸———鸟苷二磷酸 (GDP)、尿苷二磷酸(UDP)、腺苷二磷酸 (ADP)、胞苷二磷酸 (CDP)、次黄嘌呤核苷酸 (IDP) ;研究了缓冲液的pH值及磷酸盐的浓度对分离5种核苷酸的影响 ,5种核苷酸在75mmol/L叁羟甲基氨基甲烷 (Tris) -50mmol/L磷酸二氢钠(NaH2PO4)、pH为8.00的缓冲液中可以基线分离 ;另外还研究了加入阳离子表面活性剂十六烷基叁甲基溴化胺(CTAB)以及CTAB的浓度和进样时间对分离5种核苷酸的影响 ;该法成功地应用于测定核苷酸口服液中ADP、CDP、GDP、UDP的含量(本文来源于《分析测试学报》期刊2002年04期）
赵银锁,乔小燕,吴乃虎,吴相钰[6]（1996）在《谷子核酮糖1,5-二磷酸羧化加氧酶大亚基基因的核苷酸序列(英文)》一文中研究指出谷子（Ｓｅｔａｒｉａ ｉｔａｌｉｃａ）叶绿体ＤＮＡ 含有ｒｂｃＬ基因的３．０ ｋｂ Ｂｇｌ Ⅱ＋ ＸｂａⅠ酶切片段被克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ （－ ）质粒载体上，并构建了该基因的限制性酶切图谱，测定了该基因的１９９０ ｂｐ 全序列。其中基因的编码区长１４３１ ｂｐ，共编码４７６ 个氨基酸，推测其分子量为５２６７９ Ｄ。其３８９ ｂｐ 的５′上游区含有类似于原核生物的－ １０ ｂｏｘ、－ ３５ ｂｏｘ 和ＳＤ序列。其１７０ ｂｐ ３′下游区含有３ 个茎环结构。对Ｃ４ 植物和Ｃ３ 植物中的ｒｂｃＬ基因序列进行比较，表明在编码区、启动区和３′下游区没有差别。由此认为Ｃ４ 植物中ｒｂｃＬ基因的细胞特异性表达与其序列无关(本文来源于《植物学报》期刊1996年09期）
张德昌[7]（1996）在《二磷酸核苷酸激酶在跨膜信息传递机理中的作用》一文中研究指出二磷酸核苷酸激酶在跨膜信息传递机理中的作用张德昌（中国医学科学院，中国协和医科大学基础医学研究所，北京１００００５）对二磷酸核苷酸激酶（ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｄｉｐｈｏａｓｐｈａｔｅｋｉｎａｓｅ，ＮＤＰＫ）在跨膜信息传递机理中的作用进行系统的观察。用自...(本文来源于《中国医学科学院学报》期刊1996年03期）
张德昌[8]（1989）在《二磷酸核苷酸激酶与跨细胞膜信息传递》一文中研究指出近年来大量的研究表明，乌嘌呤核营酸调节蛋白质(Guanine Nucleotide Regulatory Proteins，G-proteins)在跨膜信息传递的多种机制中起着重要的调节作用。根据它们对腺苷酸环化酶的影响，可以发现有Gs和Gi两种不同的G—蛋白质。Gs介导受体对腺苷酸环化酶的激活作用，Gi则介导受体对腺苷酸环化酶的抑制作用。此外，在脑组织中还大量存在一种目前功能尚未明了的G—蛋白质(Go)，但有证据表明这种G—蛋白质能与M—胆硷受体，GABA受体及α_2—肾上腺素受体相互作用。G—蛋白质家族的第四个成员是Gt—蛋白质，它存在于视网膜。其生理功能是调节cGMP磷酸二酯酶的活性从而控制光对视紫红质(rhodopsin)的激活。 上述各种G—蛋白质在结构和作用方式上都有许多共同之处。它们都是由αβγ叁个不同亚单位组成的叁聚体。Gs和Gi的β亚单位在电泳上表现为35kd和36kd两条蛋白质带，而Gt的β亚单位分子量则是36kd。进一步的研究表明所有的β亚单位都有相同的电泳表现，一致的氨基酸组成和水解后的肽片段组成。同时，Gs和Gi的γ亚单位也是相同的，分子量大约8kd。 各种G-蛋白质的α亚单位却有着明显的不同。Gs_α的分子量是45kd，Gi。是41kd而Gt_α和Go_α则分别是40kd及39kd。此外，Gs_α能在霍乱毒素的催化下被ADP-核苷化，而Gi_α和Go_α则能在百日咳毒素的催化下被ADP-核苷化；Gt既能被霍乱毒素也能被百日咳毒素催化ADP-核苷化。 做为G—蛋白质家族的成员，各种α亚单位又有基本的共同点，即它们都具有与乌嘌呤核苷酸结合的高亲和力位点，同时具有GTP酶活性，可以水解GTP。 人们早已熟知G—蛋白质可以介导受体对腺苷酸环化酶的激活或抑制作用。进年来大量实验证据表明，G-蛋白质还参与其它很多种调节过程。例如，G-蛋白质调节膜上磷脂酶C(Phospholipase C)的活性而影响磷酯酰肌醇的代谢，后者是很重要的信息物质，影响细胞内Ca浓度的调节。G-蛋白质也影响磷酯酶A_2的调节，从而作用于前列腺素类物质的代谢。其它诸如K~+-通道、C_a~(2+)-通道等都可能受G-蛋白质的调节。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊1989-05-01）
孙崇荣,筱崎一雄,杉浦昌弘[9]（1987）在《蚕豆核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基基因5’区域核苷酸顺序的分析》一文中研究指出核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基基因存在于叶绿体DNA中,它的转录作用能受光诱导。我们从蚕豆重组DNA中制备得到该基因片段后,应用Maxam和Gilbert的化学法分析了该基因5'端区的核苷酸顺序。结果表明叶绿体中光诱导基因的启动区具有一些共同特征。同时该大亚基肽链N端在进化过程中具有相当的守恒性。(本文来源于《生物工程学报》期刊1987年04期）
宁正祥,胡立侃[10]（1987）在《核苷酸对柑桔1,5-二磷酸核酮糖羧化酶活性的影响》一文中研究指出用核苷酸及其降解产物处理从普通甜橙叶片中制备的RuBP羧化酶反应液,比较了不同降解产物对RuBP羧化酶的激活作用。结果表明,在激活效果上,核苷酸>碱基>核苷;除尿嘧啶核苷酸外,其余核苷酸降解产物对RuBP羧化酶的激活效果均不如500ppm的核苷酸混合物。(本文来源于《中国柑桔》期刊1987年02期）
二磷酸核苷酸酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
硫是生命活动的必需元素,主要以-2和+6价发挥生物学功能。硫的活化是硫同化代谢的关键反应,包括ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)催化硫酸盐与ATP反应生成腺苷-5’-磷酰硫酸(adenosine5'-phosphosulfate,APS)和焦磷酸(pyrophosphate,PPi)以及腺苷-5’-磷酰硫酸激酶(adenosine5'-phosphosulfate kinase,APSK)催化APS的3’羟基磷酸化生成3’-磷酸腺苷5’-磷酰硫酸(adenosine3'-phosphate5'-phosphosulfate,PAPS)两步反应。PAPS作为胞内硫酸化反应的硫供体以及PAPS还原酶的底物,可生成3’,5’二磷酸腺苷(3',5'bisphosphate adenosine,PAP)。酵母3’,5’二核苷酸酶(Yeast3',5'-Bisphosphate Nucleotidase,YND),亦称为HAL2,催化PAPS或者PAP脱磷酸生成APS或AMP,参与细胞硫代谢和抗盐性。YND和PAP之间具较高的亲和力,其KmPAP为亚微摩尔。此高亲和力及PAP琼脂糖的存在使得YND作为亲和标签纯化蛋白成为可能。亲和层析是最常见的蛋白纯化方法之一,不同的纯化标签都有自己的优缺点,开发新的标签以及组合使用不同标签可不断开发新的亲和层析工艺。为探索YND作为一个蛋白纯化亲和标签的可行性,我们对YND的特性进行了深入分析。结果表明KmPAP和kcatPAP分别为0.3μM和11s-1,在Ca2+或Mg2+存在的情况下其Kd分别为0.008和0.49μM。pH影响YND对PAP的亲和力,pH7.5和pH8时,其亲和力最强Kd为～8nM。通过构建一系列表达YND,YND-APSK,YND-蛋白酶载体,基于Ca2+可有效促进YND·PAP的形成,抑制YND对PAP的水解,且易于被EGTA螯合进行洗脱等,我们合理设计了YND融合蛋白的纯化步骤,并成功纯化、分析大肠杆菌APSK。通过比较不同标签的经济性、促溶、流速、产品纯度和产量等特性,我们发现YND是有效、经济的原核蛋白表达、纯化标签。YND活性的改变可调节胞内PAP的浓度,从而影响磺基转移酶,酰基载体蛋白合酶和RNA加工酶的活性,进而影响细胞的生长发育。PAPS是胞内硫酸转移酶的底物,YND如何区分PAPS和PAP尚无相关报道。通过分析其晶体结构,发现G236的R基团,可能对于PAPS或者PAP的结合具有一定的影响。将G236突变为较大R基团氨基酸,对其相应蛋白进行活性分析发现随着R基团的增大,对PAPS的亲和力降低。G236V水解PAP的催化效率为水解PAPS的5592倍,使得G236V成为PAP特异性3’磷酸核苷酸酶。通过和肌激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶偶联,G236V可作为偶联酶分析硫酸转移酶的酶学特性。APSK催化APS磷酸化的机理已经较为清楚,但作为APS类似物的AMP是否可以作为APSK的底物,尚无相关报道。通过对APSK的叁维结构进行分析发现,R68同时和APS的α磷酸根和p硫酸根形成氢键,稳定APS的结合。而K侧链基团比R短2.4A,R68K突变将导致K不能和距离较远的p硫酸根离子相互作用,从而减弱APS的亲和力,而增加与α磷酸根离子的相互作用,可能提高AMP的亲和力。我们的研究结果表明AMP可作为APSK的底物,反应生成PAP。R68K突变体的最适底物变为AMP,KmAMP降低为对照的0.2倍,而催化效率提高5倍。此结果为进一步构建AMP3’羟基激酶提供了基础。本文构建了一种基于YND的亲和层析体系,一种可用来测定硫酸转移酶活性的PAP特异3’核苷酸酶和可磷酸化AMP形成PAP的3’羟基激酶。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
二磷酸核苷酸酶论文参考文献
[1].张晓,杨洋,孙梅好.一种基于酵母3',5'-二磷酸核苷酸酶的蛋白亲和层析纯化体系[J].今日科技.2014
[2].杨洋.酵母3’5’二磷酸核苷酸酶的生化应用[D].浙江师范大学.2013
[3].张巨源.蓝细菌基因组比较分析：异形胞发育进化及3’，5’-二磷酸核苷酸酶HalA的功能研究[D].华中农业大学.2007
[4].邹洁.螺旋蓝细菌3’，5’-二磷酸核苷酸酶基因ArHAL功能的初步研究[D].华中农业大学.2004
[5].贾丽,廖栩泓.同时测定核苷酸口服液中二磷酸核苷的毛细管区带电泳法[J].分析测试学报.2002
[6].赵银锁,乔小燕,吴乃虎,吴相钰.谷子核酮糖1,5-二磷酸羧化加氧酶大亚基基因的核苷酸序列(英文)[J].植物学报.1996
[7].张德昌.二磷酸核苷酸激酶在跨膜信息传递机理中的作用[J].中国医学科学院学报.1996
[8].张德昌.二磷酸核苷酸激酶与跨细胞膜信息传递[D].中国协和医科大学.1989
[9].孙崇荣,筱崎一雄,杉浦昌弘.蚕豆核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基基因5’区域核苷酸顺序的分析[J].生物工程学报.1987
[10].宁正祥,胡立侃.核苷酸对柑桔1,5-二磷酸核酮糖羧化酶活性的影响[J].中国柑桔.1987
论文知识图
