导读:本文包含了嵌合体小鼠论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:嵌合体,小鼠,干细胞,诱导性,基因,骨髓移植,胸腺。
嵌合体小鼠论文文献综述
孟晓伟,杨冠恒,王云杰,马晴雯[1]（2018）在《基于实时荧光定量PCR技术的唐氏综合征嵌合体小鼠嵌合率检测和分析》一文中研究指出目的·建立一种定量检测唐氏综合征嵌合体小鼠各脏器嵌合情况的方法,并初步探究其不同器官中的嵌合规律。方法·分别针对唐氏综合征模型Tc1小鼠细胞(叁体细胞)内人源21号染色体(记为Hsa21)上SIM2基因和小鼠15号染色体(记为Mmu15)上Derl1基因设计引物,采用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,qPCR)技术对SIM2和Derl1进行检测来反映Hsa21和Mmu15的比例,并以此计算嵌合体小鼠各器官中Tc1小鼠细胞的嵌合占比。结果·所鉴定的小鼠中有3只为嵌合体小鼠。该3只小鼠心脏组织Tc1小鼠细胞嵌合率分别为8.98%、21.71%和57.70%,小脑组织分别为5.62%、20.17%和40.43%,大脑组织分别为8.48%、15.35%和20.45%,肝脏组织分别为2.66%、6.50%和16.84%,脾脏组织分别为1.73%、3.80%和11.80%。结论·基于qPCR技术对不同染色体上的基因进行定量分析的方法可用于唐氏综合征嵌合体小鼠中叁体细胞嵌合率的定量检测。Tc1小鼠细胞在嵌合体小鼠的心脏、小脑、大脑、肝脏、脾脏均可发生嵌合,心脏组织的嵌合率偏向最高。(本文来源于《上海交通大学学报(医学版)》期刊2018年11期）
王荣根[2]（2018）在《大鼠—小鼠嵌合体异种肺器官的研究及GGTA1/CMAH/β4GalNT2敲除猪器官/组织的免疫原性的研究》一文中研究指出第一部分大鼠-小鼠嵌合体异种肺器官的研究研究背景利用人多功能干细胞培育组织/器官是再生医学的终极目标。但是体外器官发育十分复杂,通过干细胞体外分化而获得完整的器官是非常困难的。目前已有实验室通过异种囊胚互补技术在Pdx-/-胰腺缺陷的小鼠体内生长出大鼠PSC来源的胰腺组织。研究目的通过囊胚互补技术,将大鼠iPSCs注射到TTF-1-/-小鼠的囊胚中,在小鼠体内获得互补再生的大鼠iPSCs来源的肺器官,并检测和分析大鼠iPSCs在嵌合小鼠肺组织中的嵌合情况,来证明种间肺器官再生的可行性,为最终实现在猪体内培育出人源化的肺器官奠定良好的理论和实验基础。研究方法(1)取TTF-1+/-雌性小鼠和TTF-1+/-雄性小鼠交配后第19天的小鼠胎儿,通过H&E染色来观察其肺发育的情况。(2)通过碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase,AP)染色的方法,鉴定大鼠iPSCs的状态。同时,用 anti-C-myc,anti-Oct4,anti-SSEA-1 和 anti-Nanog 四种抗体,来检测大鼠iPSCs的潜能性。(3)通过显微操作技术,将大鼠iPSCs作为供体细胞注射到TTF-1+/-雌性小鼠和TTF-1+/-雄性小鼠交配后获得的囊胚中,其中一部分注射后的囊胚在体外培养并观察发育情况。另一部分注射后的囊胚移植到代孕母鼠体内,等到E19时取出胎儿,通过H&E染色观察肺发育情况,用TTF-1、CCSP、SP-C等肺特异性抗体检测嵌合体肺组织的细胞类别。(4)设计4个guideRNA,将Cas9mRNA和4个guideRNA混合,通过小鼠显微注射将Cas9 mRNA和guide RNA混合物注射到小鼠受精卵胞质中,在体外培养发育到囊胚,通过测序来鉴定囊胚基因型。实验结果(1)通过基因型和表型鉴定,发现TTF-1--基因型小鼠严重的肺发育缺陷,其胸腔中的两侧肺叶均消失,只留下囊泡状的肺叶残留。(2)大鼠iPSCs的AP染色呈阳性,干细胞特异性因子C-myc,Oct4,anti-SSEA-1和Nanog都是阳性表达。(3)通过荧光显微镜观察发现,大鼠iPSCs注射后的囊胚在体外培养12h和24h后,大鼠iPSCs在嵌合体胚胎中仍能强烈表达红色荧光。相比TTF-1-/-基因型小鼠发育异常的肺而言,大鼠iPSCs互补的肺有实质的填充。(4)通过小鼠显微注射将Cas9 mRNA和guide RNA混合注射到小鼠受精卵胞质当中,在体外培养发育到囊胚,通过测序来鉴定囊胚基因型,其中3#guide RNA和5#guide RNA识别的TTF-1靶向位点插入2个碱基。实验结论我们进行了 6次囊胚注射,并获得了一枚基因型是TTF-1-/-纯合子E19d小鼠。通过对该嵌合体小鼠的肺组织分析,发现相比TTF-1-/-基因型小鼠发育异常的肺而言,大鼠iPSCs互补的嵌合体肺组织中有实质的填充。我们通过TTF-1、CCSP、SP-C抗体免疫组化检测发现大鼠iPSCs补偿了肺组织中有正常肺组织的细胞,其中有Ⅱ型肺泡细胞,克拉拉细胞和肺早期近端的TTF-1阳性的肺前体干细胞的分布。第二部分 GGTA1/CMAH/β4GalNT2敲除猪器官/组织免疫原性的研究研究背景猪的器官/组织和红细胞将来可以解决临床上同种异体移植中人器官供体短缺问题,但是能被人抗体识别的异种抗原是猪器官/组织用于临床的障碍。同时敲除猪的GGTA1,CMAH和β4GalNT2这叁个基因,将相应消除αGal,Neu5Gc和sd(a)叁种异种抗原。已经有研究表明,GGTA1/CMAH/β4GalNT2敲除(TKO)猪的心脏瓣膜和心包膜可明显降低人抗体的结合能力。但猪的其他器官/组织的免疫原性还未知。研究目的检测TKO猪的不同器官/组织(心,肝,脾,肺,肾,胰腺,角膜,皮肤和红细胞)的免疫原性,为TKO猪作为异种移植供体应用于临床提供实验依据。研究方法(1)分别用BSI-B4和DBA凝集素来检测αGal和sd(a)抗原在野生型(WT)和TKO猪红细胞以及人红细胞上的表达,以及用chickenanti-Neu5Gc抗体来检测Neu5Gc在不同红细胞上的表达情况。用山羊抗人IgG/IgM抗体检测人AB血清孵育后的WT和TKO猪红细胞以及人红细胞,检测红细胞对人抗体的结合能力。(2)分别从WT,GTKO和TKO猪获取角膜组织用于组织学检测,通过H&E染色来检测角膜的组织形态和细胞结构。用BSI-B4和DBA凝集素来检测αGal和sd(a)抗原在不同角膜组织上的表达,以及用chicken anti-Neu5Gc抗体来检测Neu5Gc在角膜组织上的表达情况。用山羊抗人IgG/IgM抗体检测人AB血清孵育后的不同角膜组织,检测不同组织和人抗体的结合能力。(3)分别从WT和TKO猪获取不同的器官/组织(心,肝,脾,肺,肾,胰腺和皮肤)用于组织学检测。通过H&E染色来检测不同组织形态和细胞结构。用BSI-B4和DBA凝集素来检测αGal和sd(a)抗原在不同组织上的表达,以及用chicken anti-Neu5Gc抗体来检测Neu5Gc在不同组织上的表达情况。用山羊抗人IgG/IgM抗体检测人AB血清孵育后的不同组织,检测不同组织和人抗体的结合能力。实验结果(1)通过流式细胞仪分析的结果显示在WT猪红细胞表面αGal,sd(a)抗原和Neu5Gc都有明显的表达,TKO猪来源的红细胞以及人红细胞表面均未检测到表达。人IgG/IgM抗体结合到人红细胞和TKO猪红细胞的水平明显低于人IgG/IgM抗体结合到WT猪红细胞的水平(p<0.01),并且人IgG抗体结合到TKO猪红细胞的水平略高于人IgG抗体结合到人红细胞的水平,但是人IgM抗体结合到TKO猪红细胞的水平和人IgM抗体结合到人红细胞的水平没有显着性差异。(2)通过HE组化分析发现WT,GTKO/CD46和TKO叁种不同猪的角膜结构和细胞形态均没有差异,说明基因改造猪的角膜结构未发生变化。通过免疫荧光分析发现,αGal在WT猪角膜表面总体上表达量很低,仅在角膜的前基质层的少量角膜细胞呈现αGal弱阳性。但是,在GTKO/CD46和TKO猪角膜中均未检测到αGal的表达。在WT和GTKO/CD46猪角膜上皮层前部的角膜细胞均有sd(a)抗原和Neu5Gc表达。但是sd(a)抗原和Neu5Gc在TKO猪角膜中没有表达。结果显示WT猪角膜广泛地结合人IgG和IgM抗体。相对于WT猪角膜而言,在GTKO/CD46和TKO猪角膜中人IgG和IgM抗体结合的能力显着降低。但是,GTKO/CD46和TKO猪角膜仍有人IgG和IgM抗体的结合。说明通过降低猪αGal,NeuGc和sd(a)抗原的表达,可以明显降低角膜组织和人抗体的结合能力,即降低了猪角膜组织的免疫原性。(3)通过HE组织化学分析发现WT和TKO猪的不同组织(心,肝,脾,肺,肾,胰腺和皮肤)结构和细胞形态均没有差异,说明基因改造均未影响猪的组织结构。通过免疫荧光分析发现,αGal,sd(a)抗原和Neu5Gc在WT猪所有上述组织都有广泛的表达,而TKO猪的组织中均未检测到叁种抗原的表达。TKO猪的角膜,心肌,肺脏和肾脏组织结合人IgG/IgM抗体的能力有所减弱。但是在TKO的肝脏,脾脏,胰腺和皮肤组织中,人IgG/IgM抗体的结合能力并没有减弱。实验结论通过基因编辑技术敲除猪的GGTA1,CMAH和β4GalNT2这叁个基因,进而将相应的αGal,Neu5Gc和sd(a)叁种异种抗原消除后,TKO猪红细胞结合人IgG/IgM抗体的能力显着性减弱,即降低了猪红细胞的免疫原性。通过相关的凝集素和抗体,我们检测了 αGal,sd(a)抗原和Neu5Gc在心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺和皮肤中的表达情况,并且免疫荧光染色结果表明这叁种糖蛋白呈现组织特异性分布,其中在WT猪的组织的小血管或毛细血管内皮表达比较高,相应的在我们的TKO猪的组织中均未检测到表达。TKO猪的心肌,肺脏和肾脏组织结合人IgG/IgM抗体的能力有所减弱,这说明可能通过基因修饰可以减少这些组织对人IgG/IgM抗体的反应。但是在TKO的其他组织中,人IgG/IgM抗体的结合能力并没有减弱,可能是这些组织中猪白细胞抗原(SLA)在异种抗原中占有主要作用。(本文来源于《南京医科大学》期刊2018-04-01）
王俊虹,魏茂提,徐忠伟[3]（2017）在《Balb/C小鼠免疫重组蓖麻毒素与相思子毒素B链嵌合体蛋白的免疫应答》一文中研究指出【目的】探讨重组蓖麻毒素、相思子毒素B链蛋白(RTB-ATB)免疫Balb/C小鼠的免疫机制。【方法】雌性Balb/C小鼠随机分为两组:RTB-ATB组和PBS组,分别腹腔免疫4次,间隔1周;间接ELISA检测血清中IgG效价和抗体分型,流式细胞技术检测细胞因子IFN-γ、IL-4,并进行攻毒实验和体外中和实验。【结果】四免后RTB-ATB组血清IgG、IgG1的效价与PBS对照组差别有统计学意义(P<0.05),而IgG2a未发生明显变化;IL-4的表达量RTB-ATB组与PBS组相比差别有显着性(P<0.05),而IFN-γ未发生变化(P>0.05)。攻毒保护实验和体外中和实验结果说明,嵌合体蛋白RTB-ATB可以抵抗4×LD50的天然AT或RT攻毒。【结论】RTB-ATB诱导以IgG1为主的抗体和Th2优势应答且显示出良好的免疫原性,为二价疫苗的研制奠定基础。(本文来源于《武警后勤学院学报(医学版)》期刊2017年11期）
郭雯铃[4]（2017）在《iPS细胞来源的嵌合体胸腺移植对异基因骨髓移植小鼠的T细胞重建和GVHD的影响》一文中研究指出背景加快异基因骨髓移植(allogeneic bone marrow transplantation,allo-BMT)后T细胞重建能够降低感染和肿瘤复发的几率。胸腺移植(thymus transplantation,TT)作为一种提高胸腺功能、加快T细胞重建的方法,已被临床用于治疗DiGeorge综合征、严重联合免疫缺陷病、艾滋病等疾病。前期研究显示,TT联合allo-BMT不但能够促进T细胞重建,加强抗肿瘤效应,而且不会引起严重的移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)。然而胸腺供体来源缺乏制约了 TT 在 allo-BMT 的应用。诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS cells)具有和胚胎干细胞相似的功能,学者们已成功将iPS细胞诱导分化为造血祖细胞、神经元、胰岛β细胞、肝细胞、血管内皮细胞等。iPS细胞技术为培养人工胸腺提供了新思路。目前国内外尚未有将iPS细胞诱导分化为胸腺并运用于异基因骨髓移植的研究报道。研究目的本课题组前期研究将表达绿色荧光蛋白的C57BL/6小鼠的iPS细胞,通过显微注射到ICR小鼠囊胚腔内,获得的嵌合胚胎移植到代孕雌性ICR小鼠子宫内,最终获得嵌合子代,用iPS细胞成功构建了嵌合体胸腺。本研究首次将嵌合体胸腺用于allo-BMT时的TT,探索其对受体T细胞重建和GVHD的影响。旨在解决TT的来源,并寻找一种加快allo-BMT后T细胞重建的新方法。研究方法1.异基因骨髓内骨髓移植、胸腺移植和淋巴细胞输注异基因骨髓内骨髓移植(intra-bone marrow-bone marrow transplantation,IBM-BMT):受体 BALB/c小鼠移植前24h均接受X射线全身照射。取C57BL/6小鼠的股骨和胫骨的骨髓细胞(bone marrow cells,BMCs),制成单细胞悬液。将受体小鼠麻醉,使用微量注射器穿过关节囊将BMC1×107/mouse注入胫骨骨髓腔内。TT:取嵌合体小鼠胸腺,分离为大小约2×2×1mm的组织块,暴露受体左侧肾脏于体腔外,将胸腺组织块置于肾被膜下,逐层缝合肌肉及皮肤。淋巴细胞输注(donor lymphocyte infusion,DLI):取C57BL/6小鼠的脾脏,研磨,计数,通过鼠尾静脉注入5×106/mouse脾脏单细胞悬液。2.IBM-BMT+TT组的供体胸腺和各组GVHD的观察实验分叁组:IBM-BMT 组,IBM-BMT+TT 组,IBM-BMT+DLI 组。移植4周后,取移植的供体胸腺行HE染色,观察组织学形态。每周测量小鼠体重2-3次,同时观察GVHD的表现。取受体小鼠的肝脏、小肠、皮肤,10%福尔马林固定,石蜡包埋,切片,HE染色,观察其GVHD的病理变化。3.检测各组T细胞亚群在移植4周后,取受体小鼠外周血,流式细胞仪分析检查植入状态、分析不同实验组T细胞亚群比例。取脾脏,流式细胞仪分析不同组Foxp3+CD4+ T细胞的比例。研究结果1.IBM-BMT+TT 组、IBM-BMT+DLI 组、IBM-BMT 组外周血 CD8+T 细胞组比例分别为(11.10±1.49)%,(8.49±0.82)%,(5.52±0.83)%,两两组间差异有统计学意义(P<0.05)。IBM-BMT+TT组的外周血CD4+T细胞比例为(9.60±0.69)%,显着高于 IBM-BMT+DLI 组的(8.07±0.65)%及 IBM-BMT 组(6.42±1.40)%(P<0.05)。2.IBM-BMT+TT、IBM-BMT组的脾脏Foxp3+细胞占CD4+T细胞比例分别为(1.86±0.36)%、(2.29±0.23)%,显着高于 IBM-BMT+DLI组(0.07±0.05)%(P<0.05)。3.IBM-BMT+TT、IBM-BMT 组的 GVHD 临床评分低于 IBM-BMT+DLI 组,病理学检查GVHD表现更轻。结论:1.iPS细胞来源的嵌合体胸腺移植,通过胸腺依赖路径,能有效加快移植后的CD4+和CD8+ T细胞数目的恢复,支持Foxp3+CD4+ T细胞(即Treg细胞)的发育,促进T细胞重建。2.IBM-BMT+TT组GVHD反应轻,可能是嵌合体胸腺支持Foxp3+CD4+ T细胞的产生,抑制GVHD反应。3.iPS细胞来源的嵌合体胸腺移植能促进T细胞重建,并不引起严重GVHD,为解决TT的来源和allo-BMT后T细胞重建迟缓和免疫排斥的提供了新方法。(本文来源于《南方医科大学》期刊2017-05-18）
郭雯铃,吴翠玲,梁惠,石明,张玉明[5]（2017）在《iPS细胞来源的嵌合体胸腺移植促进异基因骨髓移植小鼠的T细胞重建和抑制移植物抗宿主病》一文中研究指出目的:探讨诱导性多能干细胞(i PS细胞)来源的嵌合体胸腺移植(TT)对异基因骨髓移植小鼠的T细胞重建和移植物抗宿主病(GVHD)的影响。方法:将i PS细胞来源的嵌合体胸腺,植入异基因骨髓内骨髓移植(IBM-BMT)受体小鼠的肾被膜下,4周后分析比较IBM-BMT组、IBM-BMT+TT组、IBM-BMT+淋巴细胞输注(DLI)组的T细胞亚群、GVHD临床评分和病理学检查。结果:IBM-BMT组、IBM-BMT+TT组、IBM-BMT+DLI组外周血CD8+T细胞比例分别为(5.52±0.83)%、(11.10±1.49)%、(8.49±0.82)%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。IBM-BMT+TT组的CD4+T细胞比例为(9.60±0.69)%,高于IBM-BMT组(6.42±1.40)%和IBM-BMT+DLI组(8.07±0.65)%(P<0.05)。IBM-BMT组、IBM-BMT+TT的GVHD评分低于IBM-BMT+DLI组,病理表现更轻。结论:i PS细胞来源的嵌合体胸腺移植,能有效加快移植后T细胞重建,并抑制GVHD反应。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2017年09期）
吴坤[6]（2014）在《利用高代数iPSC制备嵌合体小鼠》一文中研究指出胚胎干细胞（ES）具有全能性，可以在特定的条件下诱导成为其他类型的细胞，ES细胞的特性让它在模式动物建立及细胞治疗方面有着广阔的应用空间。但是ES细胞在人类的应用上存在着伦理道德等问题，因此ES的研究只能停留在动物层面上。诱导型多功能干细胞（iPSC）的出现再次让科学家们对干细胞产生了浓厚的兴趣。iPSC同ES细胞一样都具有全能性，并且避开了ES细胞研究在伦理方面的局限，同时为细胞治疗及转基因动物方面的研究提供了有力的保障。随着研究的深入获得iPSC的方法越来越多但是效率却仍然很低，虽然我们一直在努力的优化方法但是获得iPSC依然不容易。最关键的是iPSC在应用上受到代数的影响，有研究认为高代数的iPSC因为无法保证其全能性，所以在应用上高代数的iPSC的潜力被忽略了。本实验通过对IP2-19第40代这株细胞制备嵌合体小鼠证明高代数的iPSC依然具有良好的全能性。我们利用不同的方法获得不同时期的胚胎，比较他们发育到囊胚的情况。利用体外授精的方式获得原核期胚胎，在体外进行培养，直至发育到囊胚期；其次通过正常交配取得2-cell胚胎然后体外发育至囊胚；第叁种方式是通过正常交配让胚胎在体内发育到囊胚期后冲胚获得，胚胎在体内完成发育过程。实验结果表明：在使用相同数量小鼠的前提下，通过体外授精的方法发育到囊胚期的胚胎数量最多，平均55.2枚胚胎/4只小鼠；而通过正常交配的小鼠1.5d取胚胎平均为52.25枚胚胎/4只小鼠；而通过正常交配取3.5d的胚胎则38.2枚胚胎/四只小鼠。正常交配1.5d获得胚胎发育到囊胚是77%±7%比体外授精的方式（73%±7%）稍高,但是体外授精的方式获得的囊胚数比1.5d取胚比率要高，而且两者跟冲胚获得囊胚数相比差异显着。我们采用手动和用陶瓷破膜仪（pizeo）两种方法分别对囊胚进行注射，其中通过pizeo囊胚注射后胚腔塌陷后重新形成囊胚率73.8%要高于手动注射的59.1%。我们将注射后的囊胚进行移植，有一只假孕鼠产仔，共产仔8只，有一只是阳性鼠其余为阴性阳性率为12.5%。小鼠出生后生长正常没有出现异常。本实验中，进一步挖掘了iPSC的发展和应用空间，通过制备健康的嵌合体小鼠证明iPSC在高代数的情况下，依然保持良好的全能性。(本文来源于《河南大学》期刊2014-06-01）
顾瑜,刘建国,关薇薇,管晓燕,陈筑[7]（2014）在《表达嵌合体蛋白PAcP/CTB的转基因番茄免疫BABL/c小鼠的实验研究》一文中研究指出目的:观察表达变异链球菌表面蛋白PAcP和霍乱毒素B亚单位融合蛋白(PAcP/CTB)的转基因番茄的免疫原性和安全性。方法:取24 d龄BABL/c小鼠18只,随机分成3组(n=6),分别用转基因番茄果汁(实验组)、变异链球菌灭活全菌(阳性对照组)、非转基因番茄果汁(阴性对照组)灌胃免疫,共4次,每次间隔1周;于首次免疫前1 d和每次免疫后1周称体质量,采集血清、唾液样品,用ELISA法检测血清中IgG、唾液中SIgA抗体水平;最后1次采样后处死所有动物,取心、肝、脾、肺、肾进行组织病理检查。结果:免疫后,实验组和阳性对照组小鼠血清特异性IgG和唾液特异性SIgA水平均明显升高,与阴性对照组相比P<0.05;各组小鼠免疫前后的体质量变化均无统计学差异(P﹥0.05);组织病理学检查,实验组心、肝、脾、肺、肾均未见明显异常。结论:转基因番茄表达的外源目的蛋白PAcP/CTB具有免疫原性和一般安全性。(本文来源于《牙体牙髓牙周病学杂志》期刊2014年02期）
段彪,杜海燕,张荣[8]（2013）在《转增强型绿色荧光蛋白的脐血干细胞制备嵌合体小鼠的研究》一文中研究指出目的本研究通过囊胚腔显微注射转增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的脐血干细胞的方法制备嵌合体小鼠,以期为研究成体干细胞的体内分化提供一定的实验依据和理论基础。方法分离得到的表达绿色荧光的小鼠脐血干细胞用于囊胚腔显微注射。然后进行胚胎移植,出生的嵌合体小鼠首先进行毛色嵌合的观察,再对各组织进行基因组DNA和RNA水平的检测。流式细胞术检测阳性小鼠的组织中绿色荧光细胞的百分率。结果分离出的脐血干细胞,经流式检测表达绿色荧光的细胞所占的比例为80.25%。经显微注射和胚胎移植,共出生5只小鼠,均为白色,没有发生毛色嵌合。分别取心肌、肝、肺、皮肤、腿肌和脂肪共6种组织对EGFP基因进行PCR和RT-PCR检测。结果显示,有2只小鼠的腿肌和脂肪组织显示阳性,其他组织和其他3只小鼠的6种组织均为阴性。将这2只小鼠的腿肌和脂肪组织消化成单细胞悬液,进行流式细胞分析。结果显示2只嵌合小鼠腿肌和脂肪组织的平均嵌合率分别为9.87%和5.78%。结论来自成体的脐血干细胞在体内可以分化成腿部肌肉和脂肪组织的细胞。(本文来源于《中华临床医师杂志(电子版)》期刊2013年15期）
潘晓靖,王鹏博,胡春超,徐继强,崔丽芳[9]（2013）在《利用敲除PLCζ基因的JM8细胞制备嵌合体小鼠》一文中研究指出为了研究PLCζ对公鼠生殖能力的影响,试验采用显微注射的方法将敲除PLCζ基因的JM8胚胎干细胞注入8-细胞胚胎获得嵌合体小鼠,并通过微卫星分析检测公鼠生殖系嵌合的情况及能否通过生殖系传递。共移植562枚胚胎,出生小鼠127只,出生率为22.60%,其中成年的毛色嵌合体小鼠数为46只,嵌合率为36.22%,对10只成年嵌合体公鼠的12种组织(脑,心脏,膀胱,肺脏,肝脏,胃,肾脏,睾丸,胰腺,肠,肌肉,脾脏)进行检验,有4只小鼠睾丸发生了嵌合,说明通过显微注射获得了生殖系嵌合的公鼠,但是生殖系嵌合的公鼠和CD-1母鼠交配后没有生下毛色嵌合小鼠,说明这些公鼠没有生殖系传递的痕迹,表明敲除了PLCζ基因影响了嵌合体公鼠的生精能力。(本文来源于《河北农业大学学报》期刊2013年04期）
刘长城[10]（2013）在《人源化肝脏嵌合体小鼠模型的建立及MSC介导的免疫抑制作用在肝细胞移植中的应用》一文中研究指出应用人肝细胞异种移植到受体鼠肝内建立人源化肝脏的嵌合体小鼠（人鼠嵌合肝），对药物代谢、乙肝病毒等嗜肝性病毒及其疫苗的研究具有重要的意义。延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因剔除小鼠（Fah~(-/-)小鼠），是模拟遗传型酪氨酸血症I型疾病建立的小鼠模型。作为国际上公认度很高的肝损伤模型之一，Fah~(-/-)小鼠已被广泛应用于肝脏再殖的研究。Fah~(-/-)小鼠是开展肝细胞移植的理想模型，100个移植的肝细胞就可重建肝小叶的结构与功能。非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠具有T、B淋巴细胞联合免疫缺陷、NK细胞活性低下、无循环补体、无巨噬细胞和抗原提呈细胞功能损害等多种先天和获得性免疫缺陷，不易发生免疫逃逸，是理想的异种移植模型。本研究结合Fah~(-/-)小鼠的肝脏再殖优势与Nod/Scid小鼠可以异种移植的特点，将两个品系杂交繁育建立Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠品系,开展人肝细胞移植到Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠建立人源化肝脏嵌合体小鼠模型的研究。通过对人的肝细胞在Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠肝脏中再殖及其程度观察，评价再殖的人肝细胞能否具有正常的肝细胞功能，评价利用人肝细胞移植Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠建立人鼠嵌合肝模型的可行性。同时，在临床上开展肝细胞移植治疗肝脏疾病的实践中，应用同种异基因人肝细胞移植时可能导致的免疫反应是不得不考虑的问题。间充质干细胞（MSCs）能与先天或获得性免疫系统的细胞相互作用，通过调节免疫系统的效应分子发挥免疫抑制和组织修复的作用，为其在临床上应用以调节肝细胞移植时的免疫反应提供了可能的选择方案。因此，在第二部分研究中，我们以同种异基因小鼠肝细胞与MSCs混合移植Fah~(-/-)小鼠模型，以移植细胞是否再殖受体小鼠肝脏作为评价指标，观察间充质干细胞在肝细胞移植中是否发挥免疫抑制作用，以及这种作用是否能促进同种异基因小鼠肝细胞在受体肝脏中的再殖。在第一部分研究中，首先，通过杂交、基因型鉴定和保种繁育，我们建立了Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠品系，该小鼠品系可以纯合保种并且能够正常繁殖；其次，我们开展了同种异基因小鼠肝细胞移植Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠的工作。通过观察小鼠肝细胞在Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠肝脏中的再殖及其程度，评价建立的Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠是否具备免疫缺陷Fah~(-/-)小鼠的基本生物学特性，为下一步进行人肝细胞移植建立人鼠嵌合肝模型奠定基础；第叁，分离原代人肝细胞并移植Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠。在人肝细胞移植前后，我们针对受体鼠采取了一些预处理措施，包括：移植前一周逐步撤除Fah~(-/-)抑制药物NTBC，提前诱导受体小鼠肝脏的损伤来形成有利外源细胞植入的微环境；细胞移植后用临床常用的免疫抑制剂——FK506抑制异种细胞移植后的免疫排斥反应，促进植入人肝细胞的增殖。通过以上处理措施，观察人肝细胞在Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠肝脏中再殖及再殖的肝细胞是否有正常的肝细胞功能。免疫组织化学染色结果表明，移植的人肝细胞能够在Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠肝脏中显着增殖，肝脏再殖程度可达30%以上。采用体重曲线、肝功能生化和人肝细胞功能蛋白表达等叁方面指标评价嵌合肝脏中人肝细胞的功能，结果表明再殖的肝细胞具有正常人肝细胞的功能。以上结果表明，Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠可以作为理想的可规模化应用的人鼠嵌合肝模型，该技术体系的改进简化了Fah~(-/-)小鼠作为人源化肝脏小鼠模型的实用性问题。在第二部分研究中，应用提前撤除受体小鼠抑制药物NTBC的预处理方案，我们分别将未处理及以细胞因子IFN-γ和TNF-α活化处理的MSCs混合C57BL/6J品系小鼠肝细胞移植129S4品系的Fah~(-/-)小鼠，同时选择在混合移植前1天及移植后1、3、5、7天分别对受体尾静脉注射MSCs以增强其免疫抑制作用。采用免疫组织化学、体重曲线以及肝脏生化指标，观察不同处理的MSCs在同种异基因小鼠肝细胞移植中的免疫抑制作用。结果表明，C57BL/6J肝细胞单独移植129S4Fah~(-/-)小鼠时，未见任何移植细胞的植入和增殖；C57BL/6J肝细胞混合未经细胞因子诱导处理MSCs移植时，129S4Fah~(-/-)小鼠肝脏中出现单个散在的移植细胞植入；C57BL/6J肝细胞混合经细胞因子IFN-γ和TNF-α活化处理MSCs移植时，移植细胞在受体肝脏中的再殖程度提高，损伤的肝脏功能明显改善。这些结果初步表明MSCs在同种异基因小鼠肝细胞移植中发挥了一定的免疫抑制作用，并改善了受体小鼠的肝脏功能，为进一步开展应用MSCs调节临床上肝细胞移植后的免疫抑制作用奠定了基础。(本文来源于《第二军医大学》期刊2013-05-01）
嵌合体小鼠论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
第一部分大鼠-小鼠嵌合体异种肺器官的研究研究背景利用人多功能干细胞培育组织/器官是再生医学的终极目标。但是体外器官发育十分复杂,通过干细胞体外分化而获得完整的器官是非常困难的。目前已有实验室通过异种囊胚互补技术在Pdx-/-胰腺缺陷的小鼠体内生长出大鼠PSC来源的胰腺组织。研究目的通过囊胚互补技术,将大鼠iPSCs注射到TTF-1-/-小鼠的囊胚中,在小鼠体内获得互补再生的大鼠iPSCs来源的肺器官,并检测和分析大鼠iPSCs在嵌合小鼠肺组织中的嵌合情况,来证明种间肺器官再生的可行性,为最终实现在猪体内培育出人源化的肺器官奠定良好的理论和实验基础。研究方法(1)取TTF-1+/-雌性小鼠和TTF-1+/-雄性小鼠交配后第19天的小鼠胎儿,通过H&E染色来观察其肺发育的情况。(2)通过碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase,AP)染色的方法,鉴定大鼠iPSCs的状态。同时,用 anti-C-myc,anti-Oct4,anti-SSEA-1 和 anti-Nanog 四种抗体,来检测大鼠iPSCs的潜能性。(3)通过显微操作技术,将大鼠iPSCs作为供体细胞注射到TTF-1+/-雌性小鼠和TTF-1+/-雄性小鼠交配后获得的囊胚中,其中一部分注射后的囊胚在体外培养并观察发育情况。另一部分注射后的囊胚移植到代孕母鼠体内,等到E19时取出胎儿,通过H&E染色观察肺发育情况,用TTF-1、CCSP、SP-C等肺特异性抗体检测嵌合体肺组织的细胞类别。(4)设计4个guideRNA,将Cas9mRNA和4个guideRNA混合,通过小鼠显微注射将Cas9 mRNA和guide RNA混合物注射到小鼠受精卵胞质中,在体外培养发育到囊胚,通过测序来鉴定囊胚基因型。实验结果(1)通过基因型和表型鉴定,发现TTF-1--基因型小鼠严重的肺发育缺陷,其胸腔中的两侧肺叶均消失,只留下囊泡状的肺叶残留。(2)大鼠iPSCs的AP染色呈阳性,干细胞特异性因子C-myc,Oct4,anti-SSEA-1和Nanog都是阳性表达。(3)通过荧光显微镜观察发现,大鼠iPSCs注射后的囊胚在体外培养12h和24h后,大鼠iPSCs在嵌合体胚胎中仍能强烈表达红色荧光。相比TTF-1-/-基因型小鼠发育异常的肺而言,大鼠iPSCs互补的肺有实质的填充。(4)通过小鼠显微注射将Cas9 mRNA和guide RNA混合注射到小鼠受精卵胞质当中,在体外培养发育到囊胚,通过测序来鉴定囊胚基因型,其中3#guide RNA和5#guide RNA识别的TTF-1靶向位点插入2个碱基。实验结论我们进行了 6次囊胚注射,并获得了一枚基因型是TTF-1-/-纯合子E19d小鼠。通过对该嵌合体小鼠的肺组织分析,发现相比TTF-1-/-基因型小鼠发育异常的肺而言,大鼠iPSCs互补的嵌合体肺组织中有实质的填充。我们通过TTF-1、CCSP、SP-C抗体免疫组化检测发现大鼠iPSCs补偿了肺组织中有正常肺组织的细胞,其中有Ⅱ型肺泡细胞,克拉拉细胞和肺早期近端的TTF-1阳性的肺前体干细胞的分布。第二部分 GGTA1/CMAH/β4GalNT2敲除猪器官/组织免疫原性的研究研究背景猪的器官/组织和红细胞将来可以解决临床上同种异体移植中人器官供体短缺问题,但是能被人抗体识别的异种抗原是猪器官/组织用于临床的障碍。同时敲除猪的GGTA1,CMAH和β4GalNT2这叁个基因,将相应消除αGal,Neu5Gc和sd(a)叁种异种抗原。已经有研究表明,GGTA1/CMAH/β4GalNT2敲除(TKO)猪的心脏瓣膜和心包膜可明显降低人抗体的结合能力。但猪的其他器官/组织的免疫原性还未知。研究目的检测TKO猪的不同器官/组织(心,肝,脾,肺,肾,胰腺,角膜,皮肤和红细胞)的免疫原性,为TKO猪作为异种移植供体应用于临床提供实验依据。研究方法(1)分别用BSI-B4和DBA凝集素来检测αGal和sd(a)抗原在野生型(WT)和TKO猪红细胞以及人红细胞上的表达,以及用chickenanti-Neu5Gc抗体来检测Neu5Gc在不同红细胞上的表达情况。用山羊抗人IgG/IgM抗体检测人AB血清孵育后的WT和TKO猪红细胞以及人红细胞,检测红细胞对人抗体的结合能力。(2)分别从WT,GTKO和TKO猪获取角膜组织用于组织学检测,通过H&E染色来检测角膜的组织形态和细胞结构。用BSI-B4和DBA凝集素来检测αGal和sd(a)抗原在不同角膜组织上的表达,以及用chicken anti-Neu5Gc抗体来检测Neu5Gc在角膜组织上的表达情况。用山羊抗人IgG/IgM抗体检测人AB血清孵育后的不同角膜组织,检测不同组织和人抗体的结合能力。(3)分别从WT和TKO猪获取不同的器官/组织(心,肝,脾,肺,肾,胰腺和皮肤)用于组织学检测。通过H&E染色来检测不同组织形态和细胞结构。用BSI-B4和DBA凝集素来检测αGal和sd(a)抗原在不同组织上的表达,以及用chicken anti-Neu5Gc抗体来检测Neu5Gc在不同组织上的表达情况。用山羊抗人IgG/IgM抗体检测人AB血清孵育后的不同组织,检测不同组织和人抗体的结合能力。实验结果(1)通过流式细胞仪分析的结果显示在WT猪红细胞表面αGal,sd(a)抗原和Neu5Gc都有明显的表达,TKO猪来源的红细胞以及人红细胞表面均未检测到表达。人IgG/IgM抗体结合到人红细胞和TKO猪红细胞的水平明显低于人IgG/IgM抗体结合到WT猪红细胞的水平(p<0.01),并且人IgG抗体结合到TKO猪红细胞的水平略高于人IgG抗体结合到人红细胞的水平,但是人IgM抗体结合到TKO猪红细胞的水平和人IgM抗体结合到人红细胞的水平没有显着性差异。(2)通过HE组化分析发现WT,GTKO/CD46和TKO叁种不同猪的角膜结构和细胞形态均没有差异,说明基因改造猪的角膜结构未发生变化。通过免疫荧光分析发现,αGal在WT猪角膜表面总体上表达量很低,仅在角膜的前基质层的少量角膜细胞呈现αGal弱阳性。但是,在GTKO/CD46和TKO猪角膜中均未检测到αGal的表达。在WT和GTKO/CD46猪角膜上皮层前部的角膜细胞均有sd(a)抗原和Neu5Gc表达。但是sd(a)抗原和Neu5Gc在TKO猪角膜中没有表达。结果显示WT猪角膜广泛地结合人IgG和IgM抗体。相对于WT猪角膜而言,在GTKO/CD46和TKO猪角膜中人IgG和IgM抗体结合的能力显着降低。但是,GTKO/CD46和TKO猪角膜仍有人IgG和IgM抗体的结合。说明通过降低猪αGal,NeuGc和sd(a)抗原的表达,可以明显降低角膜组织和人抗体的结合能力,即降低了猪角膜组织的免疫原性。(3)通过HE组织化学分析发现WT和TKO猪的不同组织(心,肝,脾,肺,肾,胰腺和皮肤)结构和细胞形态均没有差异,说明基因改造均未影响猪的组织结构。通过免疫荧光分析发现,αGal,sd(a)抗原和Neu5Gc在WT猪所有上述组织都有广泛的表达,而TKO猪的组织中均未检测到叁种抗原的表达。TKO猪的角膜,心肌,肺脏和肾脏组织结合人IgG/IgM抗体的能力有所减弱。但是在TKO的肝脏,脾脏,胰腺和皮肤组织中,人IgG/IgM抗体的结合能力并没有减弱。实验结论通过基因编辑技术敲除猪的GGTA1,CMAH和β4GalNT2这叁个基因,进而将相应的αGal,Neu5Gc和sd(a)叁种异种抗原消除后,TKO猪红细胞结合人IgG/IgM抗体的能力显着性减弱,即降低了猪红细胞的免疫原性。通过相关的凝集素和抗体,我们检测了 αGal,sd(a)抗原和Neu5Gc在心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺和皮肤中的表达情况,并且免疫荧光染色结果表明这叁种糖蛋白呈现组织特异性分布,其中在WT猪的组织的小血管或毛细血管内皮表达比较高,相应的在我们的TKO猪的组织中均未检测到表达。TKO猪的心肌,肺脏和肾脏组织结合人IgG/IgM抗体的能力有所减弱,这说明可能通过基因修饰可以减少这些组织对人IgG/IgM抗体的反应。但是在TKO的其他组织中,人IgG/IgM抗体的结合能力并没有减弱,可能是这些组织中猪白细胞抗原(SLA)在异种抗原中占有主要作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
嵌合体小鼠论文参考文献
[1].孟晓伟,杨冠恒,王云杰,马晴雯.基于实时荧光定量PCR技术的唐氏综合征嵌合体小鼠嵌合率检测和分析[J].上海交通大学学报(医学版).2018
[2].王荣根.大鼠—小鼠嵌合体异种肺器官的研究及GGTA1/CMAH/β4GalNT2敲除猪器官/组织的免疫原性的研究[D].南京医科大学.2018
[3].王俊虹,魏茂提,徐忠伟.Balb/C小鼠免疫重组蓖麻毒素与相思子毒素B链嵌合体蛋白的免疫应答[J].武警后勤学院学报(医学版).2017
[4].郭雯铃.iPS细胞来源的嵌合体胸腺移植对异基因骨髓移植小鼠的T细胞重建和GVHD的影响[D].南方医科大学.2017
[5].郭雯铃,吴翠玲,梁惠,石明,张玉明.iPS细胞来源的嵌合体胸腺移植促进异基因骨髓移植小鼠的T细胞重建和抑制移植物抗宿主病[J].实用医学杂志.2017
[6].吴坤.利用高代数iPSC制备嵌合体小鼠[D].河南大学.2014
[7].顾瑜,刘建国,关薇薇,管晓燕,陈筑.表达嵌合体蛋白PAcP/CTB的转基因番茄免疫BABL/c小鼠的实验研究[J].牙体牙髓牙周病学杂志.2014
[8].段彪,杜海燕,张荣.转增强型绿色荧光蛋白的脐血干细胞制备嵌合体小鼠的研究[J].中华临床医师杂志(电子版).2013
[9].潘晓靖,王鹏博,胡春超,徐继强,崔丽芳.利用敲除PLCζ基因的JM8细胞制备嵌合体小鼠[J].河北农业大学学报.2013
[10].刘长城.人源化肝脏嵌合体小鼠模型的建立及MSC介导的免疫抑制作用在肝细胞移植中的应用[D].第二军医大学.2013
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