线粒体ROS改变参与石蒜碱诱导的HepG2细胞凋亡

论文摘要

探究石蒜碱诱导HepG2细胞凋亡的分子机理. CCK-8实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测加或不加SS31情况下,石蒜碱对HepG2细胞凋亡比例的影响;用核酸染料Hoechst 33342评估凋亡细胞细胞核的形态变化;用Western blot分析技术检测PARP片段的表达情况.成功构建靶向线粒体的Mito-Grx1-roGFP2转基因稳定株肝癌细胞系HepG2. SS31作为线粒体ROS的定向清除剂,能够改善石蒜碱引起的HepG2细胞形态学损伤及细胞核内PARP切割,抑制石蒜碱诱导的细胞凋亡,降低反映线粒体ROS含量的405 nm/488 nm荧光比值.研究结果提示,线粒体内ROS水平的改变是石蒜碱诱导HepG2细胞凋亡的机制之一.石蒜碱有望成为治疗肝癌的潜力药物,值得更深入的研究.

论文目录

1 材料

1.1 抗体及试剂

1.2 主要仪器

2 方法

2.1 构建靶向线粒体的mito-Grx1-roGFP2转基因稳定株肝癌细胞系HepG2

2.2 细胞培养

2.3 细胞生长抑制实验（CCK-8）

2.4 激光共聚焦技术（CLSM）检测细胞mt ROS的变化

2.5 流式细胞术（FCM）分析石蒜碱对细胞凋亡率的影响

2.6 细胞核染色观察石蒜碱对细胞核形态的影响

2.7 Western blot分析石蒜碱对细胞内PARP片段化的影响

2.8 数据处理

3 结果

3.1 HepG2-mito-Grx1-roGFP2细胞响应H2O2和DTT引起的氧化还原改变

3.2 石蒜碱抑制HepG2-mito-Grx1-roGFP2细胞生长

3.3 石蒜碱促进Hep G2-mito-Grx1-roGFP2细胞中mt ROS的产生

3.4 石蒜碱诱导HepG2-mito-Grx1-roGFP2细胞的凋亡和核形态学改变

3.5 石蒜碱促进PARP的切割

4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 抗晶晶,刘晓宁

关键词: 石蒜碱,人类肝癌细胞,细胞凋亡,线粒体

来源: 南京师大学报(自然科学版) 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 中药学

单位: 黄河科技学院医学院生化教研室

基金: 河南省科技厅科技攻关项目(172102310208)

分类号: R285

页码: 91-96

总页数: 6

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线粒体ROS改变参与石蒜碱诱导的HepG2细胞凋亡

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