Fur过表达对大肠杆菌血红素合成的影响

Fur过表达对大肠杆菌血红素合成的影响

论文摘要

为了阐明铁摄取调节子基因fur对大肠杆菌血红素合成的影响,对fur基因进行了同源过表达,考察了菌体生长、铁离子浓度及血红素合成变化,并分析了血红素合成途径关键基因的表达水平。结果表明,原始菌株在限铁条件下的血红素量比在非限铁条件下的血红素量下降2.54倍;fur过表达对菌体的生长有抑制作用,胞内的铁离子减少;非限铁条件下,过表达菌株Eco/pEF的血红素量比原始菌株下降了3.55倍;而过表达菌株Eco/pEF在限铁条件下的血红素量比在非限铁条件下的血红素量增加3.10倍。fur过表达引起hemA下调,而gltX、hemB、hemC分别上调4.93倍、4.61倍和9.39倍;菌株Eco/pEF在限铁条件下hemB与hemG分别上调了5.59倍和4.49倍。虽然fur过表达使血红素合成途径基因表达水平上调,但并未导致血红素大量合成。该结果为通过铁离子摄取调控胞内血红素的水平提供了新的理论支持。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株与质粒
  •     1.1.2 试剂及仪器
  •     1.1.3 培养基及培养条件
  •   1.2 铁摄取调节子基因过表达重组菌的构建
  •     (1)引物设计及合成:
  •     (2)产物扩增与连接:
  •     (3)连接产物转化与阳性克隆验证:
  •   1.3 重组蛋白表达及SDS-PAGE检测
  •   1.4 生长曲线测定
  •   1.5 ICP-MS法测定胞内铁含量
  •   1.6 血红素及5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid, ALA)浓度测定
  •   1.7 实时荧光定量PCR
  • 2 结果与分析
  •   2.1 铁摄取调节子基因过表达重组菌的构建
  •     2.1.1 基因fur片段的扩增与连接
  •     2.1.2 扩增产物连接与转化
  •     2.1.3 阳性克隆筛选与鉴定
  •     2.1.4 重组蛋白表达及SDS-PAGE检测
  •   2.2 铁摄取调节子基因过表达对重组菌生长的影响
  •   2.3 铁摄取调节子基因过表达对重组菌胞内铁离子浓度的影响
  •   2.4 铁摄取调节子基因过表达对血红素合成的影响
  •   2.5 铁摄取调节子基因过表达对血红素合成途径关键基因转录水平的影响
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李蒙蒙,王雨萱,唐蕾

    关键词: 血红素,大肠杆菌,铁摄取调节子,铁离子,联吡啶

    来源: 食品与发酵工业 2019年16期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 工业生物技术教育部重点实验室(江南大学),江南大学生物工程学院

    基金: 111引智计划(111-2-06),国家轻工技术与工程一流学科自主课题资助(LITE2018-27)

    分类号: Q78;Q936

    DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020834

    页码: 18-25

    总页数: 8

    文件大小: 999K

    下载量: 127

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