随机转论文_许泽仰,洪愉,冯梦蝶,毛普加,赵继华

导读:本文包含了随机转论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:丙酮酸,副伤寒,沙门氏菌,氯霉素,支原体,乙酰,免疫学。

随机转论文文献综述

许泽仰,洪愉,冯梦蝶,毛普加,赵继华^[1]（2016）在《随机转座子插入构建甲型副伤寒杆菌启动子文库》一文中研究指出目的构建携带氯霉素乙酰转移酶(CAT)的转座子自杀性质粒,通过接合转座获得甲型副伤寒沙门氏菌(副甲)启动子文库。方法 PCR扩增CAT的基因亚克隆至pMD-18T载体,鉴定正确后酶切插入转座子自杀性质粒pSC189,获得新的转座子载体pSC-CAT,将携带pSC-CAT的供体菌与副甲受体菌进行接合转座,涂布氯霉素平板筛选转座的细菌,以随机筛选出来的细菌基因组为模板,热不对称PCR扩增插入位点侧翼序列,并进行测序、比对分析。结果筛选获得约1000个突变菌,随机挑取6个菌,转座子插入位点的上游分别对应6个可疑启动子区域。结论通过自杀性转座子载体pSC-CAT可高效获得副甲菌启动子文库,为进一步研究副甲菌基因表达与调控奠定了基础。(本文来源于《中国医科大学学报》期刊2016年01期）

张凡庆^[2]（2014）在《鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶的生物学功能研究和随机转座突变方法的建立》一文中研究指出鸡毒支原体(Mycoplasma Gallisepticum,MG)属于支原体目、支原体科、支原体属,是禽类重要病原体之一。鸡毒支原体可感染鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑、火鸡、家雀等多种禽类,主要表现为呼吸道症状。鸡群感染鸡毒支原体后除表现咳嗽、流鼻涕、流泪、哕音、呼吸困难等症状外,还可导致蛋鸡产蛋率下降,种蛋孵化率降低,肉鸡生长发育受阻,饲料转化率降低。该病发病率极高,几乎100%的鸡场都有此病,鸡场一旦感染就很难彻底清除,给养禽业带来巨大的损失。并且,鸡毒支原体的感染可使鸡群对其它病原微生物如大肠杆菌、禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等的易感性增加,导致混合或继发感染,引起更为严重的呼吸道综合征,从而使损失加剧。丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase)是丙酮酸脱氢酶复合体的其中的一个酶,是关键的限速酶。已经有研究表明,支原体参与代谢的酶类如烯醇化酶(enolase),甘油醛-3一磷酸脱氢酶(GAPDH),丙酮酸激酶(pyruvate kinase, PK),除了自身的催化功能外,还可以作为毒力因子参与致病的作用。目前在鸡毒支原体中的的丙酮酸脱氢酶的功能尚不清楚,本文将开展其生物学功能研究。另外本研究成功构建了鸡毒支原体随机插入转座载体,利用该载体进行了随机突变,建立了随机突变库。1.丙酮酸脱氢酶的生物学功能研究根据GenBank中鸡毒支原体Rlow株的序列分别设计两对引物,通过PCR方法获得了鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶α亚基和β亚基的基因。将其克隆至pGEM-T easy,测序并完成点突变后,将pdha和pdhb分别克隆至pET28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-pdha和pET-pdhb。分别将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白His-PDHA和His-PDHB,大小分别为34kDa和41kDa。纯化蛋白后对其进行酶活性检测,结果显示该酶的单个亚基不具有酶活性,将两种酶混合后再体外具有催化功能,活性稍低于标准品。将纯化后的表达产物(His-PDHA和His-PDHB)免疫小鼠制备了PDHA和PDHB抗血清,并通过Western-blot和ELISA验证了表达蛋白的免疫原性。Western-blot显示PDHA和PDHB多抗血清可与提取的鸡毒支原体膜蛋白发生特异性结合；说明鸡毒支原体膜表面有PDHA和PDHB。同时展示在大肠杆菌膜表面的PDHA和PDHB的重组菌株可以黏附禽DF1细胞。细胞黏附试验表明His-PDHA和His-PDHB鼠多抗对DF1细胞的黏附阻断率为30.8%和45%。补体杀菌试验结果表明His-PDHB和His-PDHB多抗血清具有良好的杀菌作用。2.鸡毒支原体随机转座突变载体的构建为研究鸡毒支原体中重要蛋白与毒力的关系。本研究拟构建mini-Tn4001SpGm随机转座插入载体。该转座子具备以下特征：含庆大霉素抗性基因,由螺原体螺旋启动子启动抗性基因的表达；抗性基因两侧为含Inner和Outer的IS256插入重复区；重复区之外为金黄色葡萄球菌转座酶基因。通过对随机缺失株的抗性筛选和基因组PCR方法检测,成功获得了738株随机缺失株。Southern blot验证抗性基因在支原体基因中随机插入。运用测序方法,最终确定了插入位点。这一转座子载体的成功构建为发现鸡毒支原体毒力相关蛋白奠定了基础,对下一步在鸡毒支原体中插入外源基因表达异源蛋白提供了有效的基因操作工具.(本文来源于《南京农业大学》期刊2014-05-01）

随机转论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

鸡毒支原体(Mycoplasma Gallisepticum,MG)属于支原体目、支原体科、支原体属,是禽类重要病原体之一。鸡毒支原体可感染鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑、火鸡、家雀等多种禽类,主要表现为呼吸道症状。鸡群感染鸡毒支原体后除表现咳嗽、流鼻涕、流泪、哕音、呼吸困难等症状外,还可导致蛋鸡产蛋率下降,种蛋孵化率降低,肉鸡生长发育受阻,饲料转化率降低。该病发病率极高,几乎100%的鸡场都有此病,鸡场一旦感染就很难彻底清除,给养禽业带来巨大的损失。并且,鸡毒支原体的感染可使鸡群对其它病原微生物如大肠杆菌、禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等的易感性增加,导致混合或继发感染,引起更为严重的呼吸道综合征,从而使损失加剧。丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase)是丙酮酸脱氢酶复合体的其中的一个酶,是关键的限速酶。已经有研究表明,支原体参与代谢的酶类如烯醇化酶(enolase),甘油醛-3一磷酸脱氢酶(GAPDH),丙酮酸激酶(pyruvate kinase, PK),除了自身的催化功能外,还可以作为毒力因子参与致病的作用。目前在鸡毒支原体中的的丙酮酸脱氢酶的功能尚不清楚,本文将开展其生物学功能研究。另外本研究成功构建了鸡毒支原体随机插入转座载体,利用该载体进行了随机突变,建立了随机突变库。1.丙酮酸脱氢酶的生物学功能研究根据GenBank中鸡毒支原体Rlow株的序列分别设计两对引物,通过PCR方法获得了鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶α亚基和β亚基的基因。将其克隆至pGEM-T easy,测序并完成点突变后,将pdha和pdhb分别克隆至pET28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-pdha和pET-pdhb。分别将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白His-PDHA和His-PDHB,大小分别为34kDa和41kDa。纯化蛋白后对其进行酶活性检测,结果显示该酶的单个亚基不具有酶活性,将两种酶混合后再体外具有催化功能,活性稍低于标准品。将纯化后的表达产物(His-PDHA和His-PDHB)免疫小鼠制备了PDHA和PDHB抗血清,并通过Western-blot和ELISA验证了表达蛋白的免疫原性。Western-blot显示PDHA和PDHB多抗血清可与提取的鸡毒支原体膜蛋白发生特异性结合；说明鸡毒支原体膜表面有PDHA和PDHB。同时展示在大肠杆菌膜表面的PDHA和PDHB的重组菌株可以黏附禽DF1细胞。细胞黏附试验表明His-PDHA和His-PDHB鼠多抗对DF1细胞的黏附阻断率为30.8%和45%。补体杀菌试验结果表明His-PDHB和His-PDHB多抗血清具有良好的杀菌作用。2.鸡毒支原体随机转座突变载体的构建为研究鸡毒支原体中重要蛋白与毒力的关系。本研究拟构建mini-Tn4001SpGm随机转座插入载体。该转座子具备以下特征：含庆大霉素抗性基因,由螺原体螺旋启动子启动抗性基因的表达；抗性基因两侧为含Inner和Outer的IS256插入重复区；重复区之外为金黄色葡萄球菌转座酶基因。通过对随机缺失株的抗性筛选和基因组PCR方法检测,成功获得了738株随机缺失株。Southern blot验证抗性基因在支原体基因中随机插入。运用测序方法,最终确定了插入位点。这一转座子载体的成功构建为发现鸡毒支原体毒力相关蛋白奠定了基础,对下一步在鸡毒支原体中插入外源基因表达异源蛋白提供了有效的基因操作工具.

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。