牛支原体P33蛋白的原核表达及鉴定

论文摘要

为了实现牛支原体P33蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验在不改变P33蛋白氨基酸序列的情况下,根据GenBank发表的P33基因序列（登录号为AIA33909.1）设计并合成特异性引物,利用PCR法扩增P33基因,进行双酶切并将基因片段克隆到pET28a（+）载体中,构建重组质粒pET28a（+）/P33,转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,经IPTG诱导后进行原核表达,再利用His-tag镍柱纯化P33重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明:成功扩增得到牛支原体P33基因,其核苷酸序列长度为710 bp,重组菌株在温度为30℃、以0.5 mmol/L IPTG诱导12小时时,P33蛋白表达量最高;经His-tag镍柱纯化后P33蛋白在33 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明成功实现了在大肠杆菌中表达牛支原体P33重组蛋白。

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类型: 期刊论文

作者: 李令臣,吴胜昔,梁望旺,李俊萱,曾政,黄恒

关键词: 牛支原体,蛋白,载体构建,原核表达,重组菌株,蛋白免疫印迹分析

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年07期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆市动物疫病预防控制中心

基金: 重庆市社会民生科技创新专项(cstc2015shmszx80027,cstc2016shmszx0076),重庆市巴南区科技计划项目(2017TJ06)

分类号: S852.62

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.02.0059

页码: 81-84

总页数: 4

文件大小: 242K

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标签：牛支原体论文;  蛋白论文;  载体构建论文;  原核表达论文;  重组菌株论文;  蛋白免疫印迹分析论文;