王昊[1]2004年在《应力作用下成骨细胞增殖信号转导机制的初步研究》文中进行了进一步梳理早在一个世纪以前人们就已经发现机械应力在骨改建中的重要作用。然而，骨组织受到机械应力作用后，体内骨组织细胞如何应答机械应力刺激，并将刺激信号转导进入细胞内，从而调节骨改建的细胞机制仍未能得到清楚的认识。不同学者应用不同的研究方法得到的结果表明：细胞的反应很大程度上依赖于细胞所受机械应力的大小。有研究报道，机械应力刺激能促进细胞的增殖。但也有学者认为细胞受到机械应力作用后，其增殖受到抑制。本研究采用自行设计的流动小室系统对体外培养的单层成骨细胞施加可控的流体剪应力。通过检测成骨细胞受到不同流动剪应力后细胞增殖的变化，试图探索调节成骨细胞增殖的最适生理应力值。大鼠成骨细胞受到流动剪应力后，以MTT法检验细胞增殖情况。发现机械应力对骨改建的调节作用与成骨细胞受到应力诱导产生的流动剪应力的刺激有关。低剪应力(6dyne／cm2) 对细胞的增殖影响不大，中等大小的剪应力(12dyne／cm2) 明显刺激细胞的增殖，高剪应力(18dyne／cm2) 将抑制细胞的增殖。还利用流动小室方法对在剪应力作用下细胞核内原癌基因c-fos蛋白的翻译水平的表达进行了初步研究，结果提示大鼠成骨细胞在剪应力作用下，c-fos蛋白有明显的表达。流动剪应力诱导的c-fos的适度表达可以导致细胞伸展、细胞骨架蛋白合成等，以适应流动剪应力的作用。该工作为进一步开展剪应力对大鼠成骨细胞信号转导机制的影响提供了实验数据。研究原癌基因表达与剪应力的关系对于了解细胞通过何种途径将剪应力信号的刺激传入细胞内并引起一系列的细胞应答，对于进一步认识流动剪应力作用对成骨细胞功能、代谢等产生的影响都有重要的意义。利用膜片钳及成骨细胞流动小室方法对大鼠成骨细胞在剪应力作用下成骨细胞膜K+通道的开放进行了初步研究，结果提示成骨细胞膜上存在剪应力敏感的K+通道。剪应力作用后，成骨细胞膜上K+电流明显增大。流动剪应力可以通过影响成骨细胞的K+通道的开放引起离子通透性的增加，进而引起细胞内Caz+的变化。这些变化都可以进一步引起细胞信号转导机制的激活。该工作为进一步开展剪应力对成骨细胞信号转导机制的影响提供了实验数据。
刘欢[2]2012年在《应力环境下成骨细胞差异基因表达及选择性剪接调控研究》文中进行了进一步梳理生命有机体受应力调节的生长一直是人们关注的问题。许多细胞都响应力信号，包括内皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞、平滑肌细胞等。应力可能引起这些力效应细胞在基因水平或表达水平的调控。由于细胞内的应力信号转导是一个异常复杂的过程，一系列的基因、受体和通路都参与其中，因此需要通过基因组水平的检测手段全面分析应力信号的生物学功能和作用机制。本研究利用基因表达系列分析（Long SAGE）的方法检测了应力刺激前后成骨细胞内的差异表达基因，并对这些基因进行了生物信息学分析，包括功能分析、基因本体论（Gene Ontology，GO）分析和信号通路分析，根据生物信息学的研究结果构建了成骨细胞力信号转导的调控网络。应力刺激能够改变成骨细胞内的基因表达，其中一种可能的机制是应力刺激对选择性剪接的调控。真核生物的基因表达需要经历转录后的修饰，才能产生成熟的mRNA进入胞浆，选择性剪接是转录后修饰的一种重要手段。本研究应用分子生物学的检测手段（实时定量PCR）鉴定了参与选择性剪接应力调控的剪接因子，检测了过载拉伸前后剪接因子的表达水平。剪接因子调控剪接功能的发挥与其自身的磷酸化水平密切相关，本研究通过检测过载拉伸前后剪接因子磷酸化激酶的表达，分析了参与选择性剪接应力调控的可能的磷酸化通路。主要研究内容和结论如下：①成骨细胞体外加载模型的构建：成骨细胞的原代培养及鉴定结果显示，组织块贴壁法获取的成骨细胞形态良好具有成骨细胞的特征，可以用于后续试验；设计制作过载拉伸装置，本装置可以对成骨细胞施加大应变量的拉伸加载，加载后成骨细胞生长状态良好，单次加载获取细胞量大，能够满足基因组水平检测的需要。②对成骨细胞施加不同参数的过载拉伸刺激，检测成骨细胞的生理行为：细胞周期检测结果显示，过载拉伸能够改变成骨细胞细胞周期分布，促进成骨细胞的增殖；ALP检测结果显示，过载拉伸能够抑制成骨细胞的分化；成骨细胞内钙分泌检测结果显示，过载拉伸刺激能够促进成骨细胞的矿化。③对成骨细胞施加不同参数的过载拉伸刺激，检测成骨细胞内特异性基因的表达。结果显示，过载拉伸能够有效地调控成骨细胞的多种特异性基因的表达，从而对成骨细胞的生理行为，如增殖、分化和矿化进行调控。④应用Long SAGE技术构建过载拉伸前后成骨细胞基因表达文库，对两个文库进行对比分析。结果显示，过载拉伸刺激后成骨细胞内显着上调的基因有100个，显着下调的基因有72个，表明应力刺激能够有效地调节成骨细胞内的基因表达。⑤应用实时定量PCR的方法对Long SAGE文库进行可靠性验证。随机选取的6个差异表达基因的PCR检测结果与Long SAGE检测结果一致，说明LongSAGE文库提供的实验数据是真实可靠的，可用于生物信息学分析。⑥差异表达基因的生物信息学分析：功能分析结果显示，受应力调控的差异表达基因主要调节细胞的蛋白质生物合成，信号转导，代谢，离子结合，发育，凋亡，细胞粘附，细胞骨架，细胞增殖和细胞运动等功能；GO分析结果显示，这些差异表达基因具有不同的GO分类和功能，同时应力刺激也将通过调控这些差异表达基因来调控成骨细胞的各个生理过程和行为；KEGG信号通路分析结果显示，差异表达基因参与的叁条最主要的通路分别是核糖体通路，细胞粘附通路和细胞外基质-受体相互作用通路。⑦根据过载拉伸前后成骨细胞内差异表达基因的生物信息学分析结果，构建了一个完整的、系统的成骨细胞响应细胞外应力刺激的信号转导网络，即细胞通过胞外基质感知应力刺激，随后激活与细胞膜结合的如整合素，钙离子通道，DAG，Wnt， BMP-6/TGF-β受体；导致与之相关的几种信号通路被激活，包括ECM-整合素通路，肌动蛋白通路，ERK1/2通路，BMP-6/TGF-β通路，Wnt通路，Ca2+调节通路和NO调节通路；最后这些力信号由细胞质传递进入细胞核，调节与前mRNA剪接相关的基因转录，细胞外基质组件，细胞骨架重组，成骨细胞增殖，分化和凋亡。⑧选择性剪接应力调控机制分析：应力调控剪接因子的鉴定，以SR蛋白（ASF/SF2和SC35）和hnRNP蛋白（hnRNPA1）为研究对象，应用实时定量PCR手段检测过载拉伸前后两类剪接因子的表达。结果显示，应力刺激对与选择性剪接调控直接相关的两类剪接因子SR蛋白和hnRNP蛋白都有显着的调控作用，因此我们推测应力刺激可能通过剪接因子的表达来调控成骨细胞的剪接变异体表达；参与选择性剪接应力调控的磷酸化通路分析，应用实时定量PCR的方法检测了参与选择性剪接过程中SR蛋白磷酸化和去磷酸化相关的激酶的表达。实验结果显示，无论是细胞质内起作用的SRPK激酶，比如SRPK1和SRPK2，PI3K激酶，还是在细胞核内发挥功能的CLK激酶，比如CLK1，PP1激酶，在应力刺激后的成骨细胞内都显着上调。根据剪接应力调控的磷酸化通路分析结果，初步构建了应力刺激对成骨细胞内选择性剪接过程中SR蛋白的磷酸化与去磷酸化的调控模型。
米晓晖[3]2006年在《张、压应力刺激下成骨细胞早期应答及力学信号转导机制的初步研究》文中研究说明口腔正畸矫治借助“力”的作用在颌骨、牙槽骨内部产生生物力学反应，使其发生骨改建。成骨细胞既是力学感受器又是心力刺激骨组织生长改建的关键细胞，在骨形成和骨改建过程中占据中心调控地化。深入研究成骨细胞的力学信号转导机制对于阐明正畸矫治中骨改建的机理十分必要，但目前张、压应力刺激早期成骨细胞的力学信号转导机制尚不清楚，有待进一步研究。 本研究采用自行开发设计的四点弯曲体外细胞加载装置(专利号ZL01256849．X)，以成骨样细胞株MG63为研究对象，观察不同性质、不同强度、不同作用时间应力刺激早期对成骨细胞力学应答及其信号分子整合素(integrin，α5、α6、β1)，粘着斑激酶(FAK)及环氧合酶2(COX2)表达的影响，深入探讨张、压应力刺激早期成骨细胞的力学信号转导机制及其与功能状态之间的关系，为临床及机理研究提供依据。 结果显示： 1．四点弯曲体外细胞加载装置可对贴壁生长的成骨样细胞MG63加载生理水平的张、压应力，加载前后细胞生长良好；但超生理水平的应力加载容易使细胞脱落死亡。
李彬[4]2004年在《力学环境对成骨细胞功能状态的影响及其叁维培养的研究》文中研究指明机械应力、应变在骨的重塑中起着重要的作用，它影响成骨细胞的活性及分化已为人们所熟知，然而，机械应力、应变如何诱导细胞内的反应，从而控制成骨细胞的分化并维持其表型尚未完全搞清。四点弯曲加载装置可通过对细胞基底施加应变而使细胞受到拉伸刺激，因此在我们的研究中，运用该装置对鼠成骨细胞施加生理范围内的不同应变，观察成骨细胞在应变作用下，随着时间变化的反应过程。结果表明，两种应变条件下均促进了细胞的增殖，随着加载时间的增加，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)的活性呈现出一种先升高，后降低，再又逐渐恢复正常的过程；而Ⅰ型胶原的表达则呈现一种先增后降的过程。结合实验结果，可认为1000με及2000με下加载6-12h，促进了细胞分化，有利于骨的形成；而加载12-24h则抑制了细胞分化，不利于骨的形成。同时，在实验中发现，立即早期基因c-fos也出现了短暂的变化，以上结果表明了机械应变在分子和细胞水平影响着成骨细胞的活性。虽然大量的实验表明，机械应力、应变能影响成骨细胞的活性及分化，从而调控骨的生成与重建。然而，这些已有的研究结果只是从某一侧面对应力、应变作用下成骨细胞的反应及骨的改建与重塑进行了探索，可还是难以解释其中复杂的生理学现象。蛋白质组学是后基因组时代的一个新兴领域，其理论和技术的发展为研究应力、应变作用下成骨细胞功能状态的改变提供了新的方法。本实验采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助的图像分析技术，对应变作用下成骨细胞与未加载成骨细胞蛋白质进行分离和比较分析。结果显示，未加载的成骨细胞可分离512±11个蛋白点，加载后的成骨细胞可分离533±14个蛋白点。有9种蛋白质在应变作用下发生了明显和稳定的质和量的改变，其中2种在应变作用后降低，7种在应变作用后表达增高。这些差异表达的蛋白质可能在成骨细胞对应变的反应中起着重要的作用，对于信号转导的进一步研究也很有帮助。本文还探讨了通过成骨细胞叁维培养，在体外构建组织工程化骨的可行性。运用骨片组织培养法，分离培养Wistar大鼠乳鼠的成骨细胞，传至第叁代后，与珊瑚-羟基磷灰石(CHA)形成成骨细胞-CHA复合物，然后在旋转式细胞培养系统(RCCS)中培养。通过茜素红(ARS)染色，MTT法及其他组织化学的方法来研究在RCCS中培养14天时力学环境对成骨细胞功能状态的影响及其叁维培养的研究的成骨潜能。结果发现成骨细胞和C队支架材料有良好的生物相容性，在RCCS中，成骨细胞一CHA复合物培养至第14天时，CHA明显促进了细胞的增殖，ARS染色呈弱阳性反应，同时，ALP的分泌减少。这些结果表明CHA材料和RCCS可以为成骨细胞提供良好的生物学环境，叁者联合运用有希望成为构建组织工程骨的理想方法。
李少妮[5]2012年在《机械牵张力对成骨样细胞影响的糖蛋白组学的初步研究》文中提出机械力学刺激作为正畸牙周组织改建重要的生物调节因素在骨形成和骨重塑中发挥重要作用。正畸矫治错合畸形的基本原理正是利用矫治器作用于牙齿，使得机械力通过牙体硬组织、牙周膜传递至牙槽骨，引起牙槽骨组织重塑，牙齿因此移动到新位置。适宜的机械刺激可通过影响成骨细胞的增殖活性、表型蛋白的表达和功能促进骨生长与骨重塑。糖蛋白组学方法为全面分析机械力学刺激对骨重塑翻译后修饰、揭示参与骨形成和骨重塑的糖蛋白提供技术支持。为深入研究其机制，我们以糖蛋白组学为技术平台，通过筛选差异蛋白研究力学转导中的重要蛋白质，为应力刺激下骨重塑机理的深入研究提供依据。本实验通过Flexcell应力加载系统，对人成骨样细胞（MG-63）施以不同加载时间的周期性牵张力，采用凝集素芯片技术分析在不同加载时长情况下成骨样细胞糖链变化，并对差异糖链的相关糖蛋白进行分离富集及质谱鉴定，明确应力刺激骨重塑中差异表达的糖蛋白，分析差异糖蛋白受应力刺激在骨重塑中的作用，为后续的研究提供依据：1．机械牵张力对成骨样细胞糖蛋白糖链的影响目的：研究机械牵张力对人成骨样细胞MG-63糖蛋白糖链表达的影响。方法：以Flexcell细胞应力培养系统对人成骨样细胞MG-63施以形变率为12%，加载时长分别为4h、8h、12h、24h的周期性机械牵张力，利用凝集素芯片技术筛选出糖蛋白糖谱中差异表达的糖蛋白糖链，比较不同载荷时间对成骨样细胞糖链的影响。结果：8小时实验组表达差异最明显，在加力后实验组凝集素Jacalin、RCA120、LEL、GSL-I、DBA、VVA、ACA的亲和作用增强，而对凝集素WFA、EEL、AAL、LCA、STL的亲和作用减弱，提示在机械牵张力作用下成骨样细胞表面可能出现增多的黏蛋白T/Tn抗原、I-抗原、 N-乙酰半乳糖胺（包括α1-3链接方式）、α及β链接半乳糖结构，而岩藻糖α1-2链接半乳糖、核心岩藻糖、N-乙酰葡糖胺等结构减少。结论：本文通过凝集素芯片技术研究发现力学刺激下成骨样细胞糖链变化与时间呈相关性，推测在加载4小时后成骨样细胞便出现对信号转导的重要调节修饰，在加载8小时后成骨样细胞半乳糖型糖蛋白明显增加，细胞已具备了某些骨化的早期表现。为研究骨改建信号转导发生机制提供了糖组学理论支持。2．不同应力成骨样细胞的半乳糖型糖蛋白的分离纯化目的：利用以琼脂糖微粒为固定载体的凝集素亲和技术，对不同加载时长后的成骨样细胞蛋白样品进行糖蛋白的分离富集，为下一步质谱分析做准备。方法：以结合榴莲凝集素（Jacalin）及蓖麻凝集素（RCA120）的琼脂糖微粒为载体对成骨样细胞的空白组、8h和24h实验组蛋白样品进行半乳糖型糖蛋白的分离富集。在富集时固定化的凝集素与特定的糖蛋白结合，非结合部分则被洗脱。凝集素与之后洗脱液中的半乳糖竞争性结合，将糖结合物从固定化的凝集素上移除并收集。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳验证分离效果。结果：SDS-PAGE电泳显示琼脂糖-凝集素亲和层析技术可实现复杂蛋白质较好的分离。结论：利用琼脂糖微粒做固定化载体，在富集糖蛋白过程中去除非糖蛋白和糖蛋白中的非半乳糖型糖蛋白，降低了样品的复杂性，具有较好的有效性和特异性，为复杂样品的蛋白糖基化研究提供基础。3．机械牵张力作用下成骨样细胞差异糖蛋白的质谱分析目的：用液相色谱质谱技术检测不同机械牵张力条件下成骨样细胞蛋白差异表达。根据鉴定结果推测成骨样细胞的差异糖蛋白如何对机械牵张力刺激做出响应。方法：将实验二中富集后的糖蛋白样品进行酶解脱盐，之后使用液相色谱（LC）分离蛋白质，LTQ Velos质谱仪进行多肽碎片的扫描鉴定并用BIOWORKS软件搜索相应的数据库。最后得到机械牵张力刺激骨重塑相关的差异糖蛋白。结果：鉴定出24个差异表达糖蛋白，其中4个为空白组成骨样细胞表达升高的糖蛋白，20个为实验组表达升高的糖蛋白。差异表达的糖蛋白主要参与细胞增殖、细胞骨架、信号传导及能量代谢等多个生命活动过程。结论：力学刺激成骨样细胞引发特征蛋白的功能改变，引起细胞增殖、细胞骨架、信号传导及能量代谢等多个生物学改变。通过糖蛋白组学研究可以筛选参与力传导细胞生命活动过程中的重要糖蛋白，为深入探索其机制提供信息，从而为揭示骨重塑中成骨细胞生命活动的基本规律奠定基础。
李菲菲[6]2009年在《机械牵张应力对成骨细胞生物特性的影响及蛋白组学研究》文中进行了进一步梳理机械力学刺激是骨代谢的重要调节因素,适宜的牵张应力刺激可以在正畸牙移动、牵张成骨以及骨折修复等许多临床治疗中刺激骨组织自身的生长与重建,达到形成新骨的目的。成骨细胞是一种对应力敏感的细胞,来自多潜能的间充质干细胞,与骨基质形成及钙化密切相关,在骨形成的过程中起主要作用。因此,深入研究成骨细胞的力学信号转导机制对于阐明正畸矫治中骨改建的机理非常重要,但目前机械牵张应力刺激成骨细胞的力学信号转导机制尚不清楚,有待进一步研究。研究发现,周期性的力学刺激比持续性的力学刺激更能促进成骨细胞的增殖与分化,而碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OC)等的合成以及矿化结节的形成都是成骨细胞分化的经典标志物,它们共同增进细胞间的连接和信息的传递,促进成骨细胞的成熟。最近有研究表明,Wnt信号转导通路的受体Lrp5缺失会引起骨质疏松,而获得性Lrp5突变会导致骨硬化症,即Wnt信号通路对于骨骼发育以及骨量的维持和调控都非常重要。β-catenin是该通路的核心因子,它的表达与变化受到细胞内外许多激素和蛋白的调节,来共同发挥与成骨相关的信号转导的作用。C3H1OT1/2细胞系过度表达β-catenin蛋白会引起成骨细胞的早期分化标志ALP的表达及活性增加,这说明β-catenin在成骨前体细胞及成骨细胞增殖分化过程中发挥着重要作用,而给Lrp5转基因小鼠的长骨进行四点弯曲加载可以上调Wnt/β-catenin通路目标基因的表达,这提示Wnt/β-catenin信号通路在成骨细胞对牵张应力加载的反应过程中可能发挥着重要作用。近年来,蛋白质组学的研究方法在对蛋白表达谱的检测和定量、翻译后修饰的识别,以及蛋白质之间相互作用等方面取得了重要进展,而机械应力对成骨细胞的影响正是通过多因子多通路的相互作用构成的网络来控制的,传统的研究手段只能针对某一种因子或蛋白质,无法全面地呈现参与这个过程的所有蛋白质,因此,蛋白质组学为我们提供了一个新的研究成骨细胞力学信号转导机制的平台。本研究通过Flexcell牵张应力加载系统,对体外培养的人成骨样细胞系Saos-2细胞加载机械牵张力,拟采用免疫组化、RT-PCR、免疫印迹、蛋白质双向电泳、生物质谱等方法观察机械牵张应力对成骨细胞细胞增殖及骨特异性分化指标的影响;研究机械牵张应力对成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响以及β-catenin在力学信号转导过程中的定位和作用;获取机械牵张应力刺激成骨细胞后的蛋白质双向凝胶电泳图谱,并对差异蛋白质点进行质谱鉴定。研究内容如下:1.机械牵张应力对成骨细胞增殖和分化的影响目的:研究机械牵张应力对成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法:人成骨样细胞系Saos-2购自美国培养物保存中心(ATCC号:HTB-85),采用Flexcell牵张应力加载系统,分别用不同大小应变值的张应力(0%,6%,12%,24%)以及不同的刺激时间(0h,4h,8h,12h,24h)对成骨样细胞Saos-2进行力学刺激。用MTT法检测细胞受力后的增殖变化;用ALP试剂盒检测细胞受力后ALP活性的变化;用半定量RT-PCR检测骨钙蛋白(OC)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA的表达;在这个过程中进行力学刺激,分别在第10天和第20天,用茜素红染色观察矿化结节形成。结果:当应变值为12%时,力学刺激对成骨样细胞Saos-2增殖以及ALP活性的促进作用最强(P<0.01)。应变值为12%的力学刺激呈时间依赖性明显上调了成骨样细胞Saos-2的增殖、ALP活性以及骨桥蛋白和骨钙蛋白mRNA的表达(P<0.01);茜素红染色结果显示,牵张应力刺激组较对照组更加容易形成矿化结节。结论:大小适宜的牵张应力可以促进成骨细胞的增殖以及分化指标如ALP活性、骨桥蛋白和骨钙蛋白mRNA的转录水平、矿化结节的形成等,说明机械牵张应力对于成骨细胞的增殖和分化发挥着重要的调控作用。2.机械牵张应力对成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响目的:研究机械牵张应力对成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响以及β-catenin在力学信号转导过程中的定位和作用。方法:采用Flexcell牵张应力加载系统,用12%大小的应力值对成骨样细胞Saos-2进行力学刺激。作用1h、2h和4h后,用免疫荧光的方法检测β-catenin的表达和在细胞上定位的变化;用半定量RT-PCR检测β-catenin mRNA表达的变化;用质粒转染的方法检测荧光素酶报告基因Tcf转录的情况;用半定量RT-PCR检测Wnt/β-catenin通路下游基因COX-2,cyclinD1, c-fos, c-Jun mRNA表达的情况;用免疫共沉淀的方法检测β-catenin和E-Cadherin的结合情况。结果:对照组的β-catenin主要表达于胞膜,在牵拉刺激1h、2h和4h后β-catenin大量聚集于胞核,核内β-catenin荧光强度明显强于对照组,而各实验组间无显着性差异;实验组与对照组之间β-catenin mRNA表达的水平没有显着性差异(P>0.05);细胞受力后细胞Tcf报告基因的转录活性与对照组相比显着提高(P<0.01);实验组的四种下游基因COX-2,cyclinD1, c-fos, c-Jun的mRNA表达水平均较对照组有显着提高(P<0.01);实验组β-catenin和E-Cadherin的蛋白质水平与对照组相比都没有显着改变(P>0.05),但是β-catenin与E-Cadherin的结合水平显着降低(P<0.01)。结论:12%牵张应力加载会引起成骨细胞内β-catenin的核移位,刺激核内转录因子Tcf的表达,激活Wnt/β-catenin信号通路,促进下游目的基因转录水平的提高,成骨细胞胞膜上的β-catenin/E-Cadherin复合体在牵张力的作用下解聚并造成β-catenin入核则可能是机械信号转导的内在机制之一。3.机械牵张应力刺激成骨细胞的蛋白质双向凝胶电泳目的:研究机械牵张应力刺激成骨细胞后蛋白质双向凝胶电泳表达的差异。方法:采用Flexcell牵张应力加载系统,用12%大小的应力值对成骨样细胞Saos-2进行力学刺激24h后,进行细胞裂解,Bradford法蛋白质定量,蛋白质双向凝胶电泳,凝胶硝酸银染色,并使用凝胶分析软件ImageMaster 2D对蛋白点进行分析。结果:对照组和加力组分别得到1031±41和928±25个蛋白质点。总蛋白质点在细胞受到牵张力后有所减少。两组蛋白电泳基本类似,蛋白点集中分布于pI 6 -10间的区域,通过软件对差异蛋白点的光密度、点大小以及叁维观察等作图像分析,比值大于2或小于0.5被认为是差异蛋白点,共检测出30个差异表达蛋白点。结论:通过蛋白质双向凝胶技术结合硝酸银染色可以得到分辨率较高,可重复性较好的成骨细胞牵张应力加载的差异表达蛋白质图谱,为进一步进行质谱鉴定奠定了良好的基础。4.机械牵张应力刺激成骨细胞差异蛋白质点的质谱鉴定与分析目的:获得差异蛋白点的肽质量指纹图谱后进行质谱鉴定,根据鉴定结果推测这些差异蛋白质在成骨细胞受到机械牵张应力后所发挥的作用。方法:蛋白质原位酶解后制备样品,样品脱盐,使用MALDI-TOF质谱仪进行分析,将获得的蛋白质肽质量指纹数据通过Mascot搜索引擎在NCBI数据库中进行检索,并确定出蛋白质的各种信息。结果:送检30个差异蛋白点经MALDI-TOF质谱获得了肽质量指纹图,进入蛋白数据库鉴定出26个相应蛋白质,按照功能分类大致与以下生物活动相关:应激反应,能量代谢,细胞增殖,细胞骨架重建,信号转导及成骨分化。结论:成骨细胞对机械牵张应力的反应是一个非常复杂的过程,牵张应力会引起成骨细胞应激反应,能量代谢,细胞增殖,细胞骨架重建,信号转导及成骨分化等许多方面的改变,每一种生物学功能的实现都涉及到很多种蛋白质的参与和调控。这些鉴定结果为以后研究这些差异蛋白在正畸骨组织改建中的生物学功能确定了目标。
郑翼[7]2004年在《机械力作用下成骨细胞的早期应答反应及力学信号转导机制的初步研究》文中提出口腔正畸治疗与机械力的控制和使用密切相关,力作用于牙齿及其他相关结构,引起包括牙槽骨、骨缝甚至颞下颌关节区域的骨改建。成骨细胞既是骨形成过程的主要效应细胞,同时也对破骨细胞的分化和成熟具有重要的调控作用,因此深入研究成骨细胞在机械应力作用下的生物应答及应答机制是十分必要的。 目前,对成骨细胞的后期生物力学应答已有了较多的研究,其中包括多种效应因子、基因及第二信使系统在机械力作用下所发生的变化,但结论并不一致甚至完全相反,其根本的原因在于对力学信号的具体转导机制这一复杂“黑箱”的认识不足。 本课题利用四点弯曲细胞力学加载装置和离心加力系统,对体外培养的成骨样细胞MG-63及UMR106,在不同力学环境所发生的生物力学应答,特别是早期应答及相关力学信号转导机制进行了探讨。以多个具有重要生理功能并可能在力学信号转导过程中处于上游调控枢纽地位的分子为切入点,运用实时荧光定量PCR(Real-Time quantitive PCR)、Western免疫印迹、流式细胞术(FCM)及MTT等方法,从多个层面研究了不同方向、不同强度、不同作用时间的应力应变对成骨细胞特异性分化因子Cbfa1/Osf2、转录因子NF-κB及细胞外信号调
刘春生[8]2016年在《张应力对小鼠成骨细胞增殖分化的影响及基因谱差异分析》文中提出目的:正畸治疗和牵张成骨的生物学基础是颅颌面部骨组织对应力刺激的适应性改建作用,在骨改建的过程中,成骨细胞起着重要的作用,成骨细胞是骨组织中的主要细胞,也是体内的应力敏感型细胞,在骨代谢过程中具有中心调控作用。适宜强度和作用时间的应力刺激可有效促进成骨细胞的增殖活性,诱导新骨形成,但细胞是如何感知外界力学刺激信号并将其转变为胞内生物学信号的转导机制尚不明确。以往学者们只对一个或几个相关基因进行研究,很难全面的了解成骨细胞对力学信号应答的分子机制。故本实验使用Flexcell 5000细胞拉伸加载装置对体外培养的小鼠成骨细胞MC3T3-E1加载周期性牵张应力,用MTT法检测张应力对成骨细胞增殖分化的影响,并筛选出促进成骨细胞增殖的最适力值,采用Affymetrix基因表达谱芯片技术,检测最适应力刺激成骨细胞后全基因组差异基因的表达情况,通过基因差异分析,从分子水平探讨成骨细胞对力学信号的应答机制,为临床上正畸治疗和牵张成骨提供分子理论基础。方法:1成骨细胞的复苏和传代培养将冻存的原代小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1进行细胞复苏,镜下观察细胞生长情况,待细胞长满瓶底80%,且生长状况良好时进行细胞传代。2成骨细胞的接种取生长状态良好的第5代成骨细胞,制备成单细胞悬液,以2×105/孔的细胞浓度接种于5个Bioflex弹性基底膜六孔培养板中,培养24 h后将培养液更换为低浓度血清培养液,使之同步化生长24 h后待用。3建立成骨细胞体外加力模型将5个6孔培养板随机分为A、B、C、D、E五组,每组6孔,每孔换成2 ml 10%血清培养液,使用Flexercell 5000应力加载仪进行加力,每组分别施加0%、6%、12%、18%、22%的拉伸力,频率0.1 Hz,即6周/min(5 S牵拉,5 S松弛),波形为1/2正弦,加力时间为24 h。4成骨细胞增殖活性的检测加力结束后,使用mtt法检测各组细胞的增殖情况,用酶联免疫检测仪检测各组细胞在490nm处的吸光度值(opticaldensity,od),记录数据,并使用spss19.0统计软件进行统计分析。5细胞总rna的提取收集最适应力组和对照组的细胞,使用trizol法提取细胞的总rna,并测定rna的纯度和完整性。6基因芯片检测应用affymetrix全基因组表达谱芯片检测最适应力组和对照组的基因表达水平并扫描分析。采用transcriptomeanalysisconsole3.0分析软件对扫描结果进行分析,筛选差异基因。结果:1mtt结果:成骨细胞加载周期性张应力24h后各组吸光度值的比较:(1)0%对照组(a组):0.3931±0.0538(2)6%形变率(b组):0.4621±0.0120;(3)12%形变率(c组):0.5423±0.0148;(4)18%形变率(d组):0.4511±0.0369;(5)22%形变率(e组):0.3623±0.0324。各实验组与对照组之间成骨细胞吸光度值有统计学差异(p<0.01)。6%、12%、18%实验组细胞增殖能力较0%对照组(a组)增强,但以12%形变率的c组细胞增殖最为显着(p<0.01),22%形变率的e组od值小于0%对照组(a组),抑制细胞的增殖(p<0.01)。因此,我们认为c组12%形变率为促进成骨细胞增殖的最适力值(如图4,表1)。2总rna纯度及完整性鉴定1)紫外分光光度计检测显示:a、c两组细胞总rna的od260/od280比值均在1.9~2.1之间,纯度及浓度符合实验要求。2)凝胶电泳结果显示:a、c两组样本提取的mrna经1%琼脂糖凝胶电泳后可见叁个条带出现,且第一条带(28s)亮度约为第二条(18s)的两倍,最下面一条(5s)最淡,说明a、c两组样本提取的rna完整性较好。3基因表达谱结果:12%形变率的周期性张应力(c组)加载成骨细胞24h后,与对照组(a组)相比,2倍以上变化的差异表达基因有722个,其中560个表达上调,162个表达下调,与细胞增殖分化相关的差异基因主要有rho、sost、wnt3a、bmp4、mapk10、mapk3,分别为对照组的2.35、-2.37、2.15、3.19、2.71、2.53倍,其所在的bmp/smads信号通路、wnt信号通路和mapk信号通路参与了力学诱导下细胞增殖分化的过程。结论:1适当的张应力在一定加力时间条件下,可促进成骨细胞的增殖活性,力值过大会抑制细胞的增殖。2适当的张应力加载成骨细胞后,基因的表达发生改变,细胞增殖分化相关的差异基因Rho、Wnt3a、BMP4、MAPK10和MAPK3的表达上调,SOST的表达下调。3 SOST、Wnt3a、BMP4、Rho、MAPK10和MAPK3基因可通过与成骨相关的Wnt、BMP/smads、MAPK叁条信号通路来调控力学刺激诱导下成骨细胞的增殖分化过程。
张连昌[9]2015年在《不同力学因素作用下人源MG-63成骨样细胞差异基因表达的研究》文中研究指明成骨细胞是骨形成细胞,在新骨形成和旧骨吸收的稳态平衡中具有十分重要的意义。适当应力刺激作用于成骨细胞后可通过多种信号转导通路传导至细胞内部,促使成骨细胞分泌多种生长因子、转录因子,从而影响成骨细胞生物学功能。目前已证实,流体剪切应力是成骨细胞和骨细胞在生理状态下感受到的主要机械应力刺激。此外,重力作为一种场力,也可影响成骨细胞的功能。在航天飞行中的失重环境可导致航天员出现骨质丢失,主要原因就是失重所导致的成骨细胞功能下降,骨形成能力降低。目前,应力和重力刺激对成骨细胞生物学功能影响的研究多集中在某个或者某些已知与成骨细胞功能密切相关的分子物质,但基因水平的变化机制尚不明确。基因芯片技术将探针分子密集固定于支持物表面后与预先标记荧光染料的样品(蛋白质、cDNA等)进行杂交,通过测量探针的荧光强度从而获得样品的表达情况和序列信息。因此,利用基因芯片研究应力和重力等力学因素调控成骨细胞生物学功能的分子类型,对探索失重性骨质丢失的细胞生物学机制,寻找对抗失重性骨质丢失的分子靶点,开发新型对抗措施具有重要意义。本课题针对流体剪切应力和重力两种力学因素作用下成骨细胞基因表达谱的变化开展研究工作。通过基因芯片技术,分别检测了流体剪切应力作用后人源mg-63成骨样细胞基因表达谱的变化,回转器模拟失重后mg-63细胞基因表达谱的变化,并选择在两种应力变化下均显着差异表达的基因esm1,进一步探讨了esm1对成骨细胞生物学功能的影响。具体实验结果如下:一、流体剪切应力作用后mg-63细胞差异基因研究mg-63细胞以适当密度(1×105个/孔)接种于载玻片(25.5×21.5mm),于六孔板中常规培养72h。将细胞随机分为剪切应力组和正常对照组。剪切应力组移至流体剪切系统中给予符合在体生理范围的流体剪切应力刺激(1.5pa,60min)。正常对照组细胞给予除流体剪切应力作用外的相同处理。处理结束后分别提取两组总rna,对rna进行质检,合格后进行affymetrix基因芯片杂交扫描,并对芯片结果进行生物信息学分析。经过芯片扫描,发现剪切应力组与正常对照组相比,有6223个基因发生了改变,其中表达上调基因2554个,表达下调基因3669个。geneontology注释分析发现,差异基因主要参与细胞的转录调控、细胞内信号级联响应、细胞凋亡调控和细胞增殖等功能调控。pathway富集注释分析还发现差异表达基因主要参与了mapk信号通路、tgf-β信号通路、p53信号转导通路、focaladhesion信号转导通路和wnt信号转导通路的信号调控。在上调和下调表达变化倍数最大的各10个差异基因中,15个基因尚未见在成骨细胞中开展过研究报道。二、模拟失重后mg-63细胞差异基因研究mg-63细胞以适当密度(1×105个/孔)接种于载玻片(25.5×21.5mm),于六孔板中常规培养72h。将细胞随机分为模拟失重组和正常对照组。模拟失重组置于2d-rwvs型双向多样本回转器中回转,回转速度24rpm,作用时间48h。正常对照组细胞在回转舱中静置相同时间。处理结束后分别提取两组的总rna,质检合格后进行affymetrix基因芯片杂交扫描,并对芯片结果进行生物信息学分析。基因芯片扫描结果发现,模拟失重组与正常对照组相比,197个基因发生了改变,其中表达上调基因151个,表达下调基因46个。geneontology注释分析发现,表达上调基因主要参与细胞生物合成进程的负性调控和细胞死亡的调控等功能调控。表达下调基因主要参与细胞骨架联接、细胞大分子物质代谢等细胞组分和功能调控。差异表达基因翻译蛋白相互作用分析发现,fos、fosb、stat3和hbegf等差异表达基因的蛋白产物与其他差异表达基因蛋白产物相互作用关系紧密。在上调和下调表达变化倍数最大的各10个差异基因中,13个基因尚未见在成骨细胞中开展过研究报道。叁、模拟失重后差异表达基因esm1对成骨细胞生物学功能的影响流体剪切应力和模拟失重后的基因芯片结果中,均显示esm1发生显着性差异性表达。为此,我们对esm1在成骨细胞生物学功能中的作用进行了验证性研究。首先,使用实时荧光定量pcr技术验证回转器模拟失重后mg-63细胞中esm1基因的表达变化;其次,通过转染sirna抑制esm1基因表达,观察mg-63细胞增殖、分化、矿化能力的变化。结果证实,在模拟失重后esm1的基因表达显着上调。通过转染sirna沉默esm1表达后,mg-63细胞增殖能力显着增强,表明esm1对mg-63细胞的增殖有负性调控作用;抑制esm1表达后,mg-63细胞分化标志物alp、runx2表达量显着下降,表明esm1对mg-63细胞的分化有正性调控作用;抑制esm1表达后,茜素红染色表明细胞矿化能力显着增强,表明esm1对mg-63细胞的矿化有负性调控作用。综上所述,流体剪切应力和模拟失重作用后人源mg-63成骨样细胞的基因表达谱发生了显着改变。差异表达基因广泛参与细胞的分子功能、细胞组分、生物学途径和信号通路调控。同时,在高倍数差异表达的基因中,较多基因在成骨细胞功能调控中的作用尚不明确。本研究的成果,为开展力学因素调控成骨细胞功能的细胞学机制研究提供了大量有意义的分子靶点,其中esm1的初步研究结果证实了可以通过生物信息学的方法选择出合适的研究靶点。通过对这些差异基因开展进一步的研究,将对阐明力学因素作用下成骨细胞生物学功能改变的分子机制,寻找对抗失重性骨质丢失的分子靶点,开发新型对抗措施具有重要意义。
陈思[10]2013年在《胰岛素样生长因子-1对模拟失重下成骨细胞整合素亚单位表达的影响》文中进行了进一步梳理[研究背景]骨质疏松症主要特征是骨量减少,骨的微观结构退化：骨小梁变细、断裂、数量减少；皮质骨多孔变薄等。主要临床表现为骨强度下降、脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性疾病。骨质疏松症分为原发性骨质疏松和继发性骨质疏松,绝经后骨质疏松、老年性骨质疏松等属于原发性骨质疏松。而失重性骨质疏松是继发性骨质疏松的一种,目前认为它是由航天失重环境引起的一种特殊的废用性骨质疏松,随着航天事业的蓬勃发展,它已严重的阻碍了人类探索太空的脚步。目前空间飞行采取的运动锻炼、药物预防和营养补充都不能有效防止骨丢失的发生发展；为了确保航天员在未来长期飞行任务中健康、高效工作,需要在细胞分子水平阐明空间骨丢失的发生机制；发展基于细胞分子本质认识的有效对抗防护措施。在航天飞行中宇航员们处于一个完全失重的状态,表现为只有质量而没有重量,我们把这种特殊的力学环境叫做微重力。物体处于微重力环境中时,受到的非引力的力一般都很小,产生的加速度也很小。这种非引力加速度通常只有地面重力加速度的万分之一或更小,其大小通常不超过10-5～1O-4g。为了与正常的重力对比,就把这种微加速度现象叫做“微重力”,微重力越小,失重越完全。失重状态只是理想状态,微重力才是实际情况。失重性骨质疏松就是以力学刺激作用了骨组织导致的骨质疏松。研究发现失重性骨质疏松的骨量丢失的原因主要为骨形成的降低,而骨吸收并没有明显的上升。而成骨细胞的主要作用是感受力学刺激,进而发挥成骨作用,是维持骨量的主要细胞。在失重时成骨细胞的失去正常的代谢规律,他的增殖、分化的功能以及细胞内细胞骨架的聚合与解聚均受到了抑制,这种成骨细胞的数量的变化以及代谢的紊乱就更进一步的降低了成骨细胞的成骨能力,导致骨形成的减少。目前对失重条件下,成骨细胞感受和传导力学刺激的细胞骨架、细胞信号转导及基因表达等发生的变化都取得了一定的进展。目前研究表明胰岛素样生长因子I(IGF-1)的水平与骨质疏松的的发生有密切联系,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)是成骨细胞分化调控的重要生长因子,它能减少骨胶原退化、增加骨质沉积、促进成骨细胞分化成熟,其水平与骨密度相关。在骨质疏松的病人中发现血清IGF-1水平降低,而在失重条件下IGF-I信号级联受到抑制。整合素是细胞跨膜分子中的重要一种,细胞通过整合素与聚焦粘附激酶、胞外基质蛋白、细胞骨架蛋白等的相互作用,将感应的力信号转化为化学信号,参与细胞各种生理功能的调节,在机械信号转导中发挥重要作用。在模拟失重的条件下,成骨细胞整合素亚单位的表达是下降的。胰岛素样生长因子系统(IGFS)包括IGF1和IGF2,两个IGF受体,六个IGF结合蛋白(IGFBP1—6), IGFBP蛋白酶。IGFS与成骨细胞和破骨细胞的功能及其成骨破骨偶联有着密切关系。IGF-1是IGFS的重要组成部分。IGF-1是长骨生长的一种必需因子,在干骺端,它刺激软骨细胞的增殖分化,在皮质及松质骨的形成过程中发挥作用,刺激成骨细胞的增殖和分化,增加I型胶原的合成,碱性磷酸酶的活性以及骨钙素的产生。抑制由成骨细胞产生的胶原降解,还对无机盐及肾脏1,25(OH)2D3合成产生作用。IGF-1被认为是肠道吸收及细胞外钙和磷的重要调控剂。最新的研究结果表明,绝经妇女的血中IGF-1含量较成年人低30%～40%,由此可见IGF-1与年龄呈负相关。在青春期前,IGF-1缺乏或呈抵抗可延缓长骨生长及峰值骨量的减低。用双能x线骨密度仪测定去卵巢大鼠的骨质疏松模型的椎、胫骨及胫骨远端骨矿物质密度(BMD)。然后将一种特殊的可持续释放IGF-1的装置放入大鼠皮下6周,结果发现实验所测3个位点的BMD均有一定程度的增加,且呈剂量依赖性。该动物模型由IGF-1引起的BMD的增加,主要是通过骨干增粗来实现的。成骨细胞除具有IGF-1受体外,也具有产生1GF-1的机能。因此IGF-1与骨代谢有着重要的关系。整合素是存在于细胞表面的一种重要跨膜分子,细胞感应细胞外基质中的各种刺激(包括物理,化学等)后,胞外基质蛋白将这种刺激传递给细胞表面的整合素,整合素再通过与细胞骨架蛋白以及细胞内各种酶的反应,将感应到的各种刺激转化为化学信号,从而调节细胞的生理机能,机械信号转导的实现很大程度上也是依赖这一途径进行的。研究证实失重或模拟失重环境下骨骼的机械信号传导途径受到抑制,其中一条重要的途径为细胞外基质-整合素-细胞骨架系统,失重情况下整合素亚单位的表达下降,表明失重可能通过抑制整合素的表达来调节下游分子的变化。研究表明IGF-1和整合素信号通路存在相互联系,失重可能通过整合素影响IGF-1通路的作用。本实验旨在探讨失重条件下IGF-1对成骨细胞整合素亚单位基因表达的影响,为失重性骨质疏松的治疗提供理论和实验依据。[目的]本研究主要从细胞分子水平探讨失重导致骨质疏松的可能机制。以小鼠成骨样细胞株(MC3T3-E1)作对象,以回转器模拟微重力效应,探讨失重条件下IGF-1对成骨细胞整合素亚单位基因表达的影响。以期进一步了解IGF-1及整合素在失重性骨质疏松发生中的相互作用,为骨质疏松的治疗提供新的方法。[对象和方法]1.细胞株及培养利用已建株的小鼠成骨样细胞MC3T3-E1(南方医科大学解剖实验室提供),采用同一批冻存细胞复苏,用低糖的DMEM培养基,10%胎牛血清和双抗作常规培养,4d传代,隔天换液。2.成骨细胞株活性鉴定采用茜素红矿化结节染色法检测体外矿化能力。3.建立模拟失重成骨细胞模型及添加干预使用旋转细胞培养系统(RCCS)中50m1容积的高截面纵横比容器(High Aspect Ratio Vessel, HARV)模拟微重力,并联合Cephodex型微载体进行成骨细胞培养。当成骨细胞株复苏后传至第3代时,在细胞对数生长期,细胞性状较稳定时,更换培养基为无血清的低糖DMEM饥饿培养24h,收集细胞按3×105个细胞/ml随机接种于预先放置微载体的5个回旋培养筒中,分为正常重力组,模拟失重组,模拟失重+10ng/mlIGF-1组,模拟失重+50ng/mlIGF-1组,模拟失重+100ng/mlIGF-1组。正常重力组及模拟失重组灌满无血清的低糖DMEM,其余各组分别灌满含10ng/mlIGF-1、50ng/mlIGF-1、100ng/mlIGF-1的无血清低糖DMEM,排净气泡。正常重力组置于37℃、5%C02、湿度饱和的培养箱中静置培养,其余各组置于回转器上,前8h低速间歇回转,每45min搅动1～2min,之后以30r/min的转速回转培养,每天观察容器内有无气泡产生,如发现气泡,立即在在无菌条件下抽尽气泡,培养48h后消化收集细胞。4.提取RNA进行RT-PCR反应利用Trizol法提取总RNA进行反转录PCR,检测整合素α2α5β1亚单位mRNA的表达,同时以GAPDH基因作为内参照。扫描PCR产物电泳照片,计算integrina2/GAPDH、integrina5/GAPDH、integrinβ1/GAPDH的积分光密度比值,推算integrinα2、integrinα5、integrinβ1基因的相对表达水平。5.统计学方法相同条件的实验重复5次(n=5),实验数据以x±s表示,组间比较利用SPSS19.0统计软件进行单向方差分析(one-way ANOVA)检测各组间差异,LSD方法进行多样本均数两两比较,方差齐性采用Levene检验,显着性检验水准0<0.05。[结果]1.成骨细胞生长情况：MC3T3—E1细胞株经复苏培养后,在相差显微镜下呈叁角形、菱形、多边形等不规则形状,细胞透明度好,细胞膜内未见黑色小颗粒。细胞核为较大的圆球形,内含核仁。细胞有2-3个触突,每个细胞的触突均向外伸展,与周围的细胞的突起连接取来,聚集成团形成集落样生长的趋势。2.各组整合素亚单位表达情况：与正常重力组比较,模拟失重组的integriα2、 integrinα5、integrinβ1的mRNA表达明显下降(P<0.05)；与模拟失重组比较,模拟失重+IGF-1组的integrinα2、integrinα5、integrinβ1的mRNA表达明显升高(P<0.05),且呈明显剂量依赖性。[结论]1.MC3T3-E1成骨细胞株具有和原代培养大鼠成骨细胞相同的生物学特性。2.模拟失重状态下,成骨细胞整合素亚单位表达是下降的。3.在模拟失重环境下,胰岛素样生长因子1能增加成骨细胞整合素亚单位表达,且呈明显的剂量依赖性。
参考文献：
[1]. 应力作用下成骨细胞增殖信号转导机制的初步研究[D]. 王昊. 中国人民解放军军事医学科学院. 2004
[2]. 应力环境下成骨细胞差异基因表达及选择性剪接调控研究[D]. 刘欢. 重庆大学. 2012
[3]. 张、压应力刺激下成骨细胞早期应答及力学信号转导机制的初步研究[D]. 米晓晖. 四川大学. 2006
[4]. 力学环境对成骨细胞功能状态的影响及其叁维培养的研究[D]. 李彬. 中国人民解放军军事医学科学院. 2004
[5]. 机械牵张力对成骨样细胞影响的糖蛋白组学的初步研究[D]. 李少妮. 第四军医大学. 2012
[6]. 机械牵张应力对成骨细胞生物特性的影响及蛋白组学研究[D]. 李菲菲. 第四军医大学. 2009
[7]. 机械力作用下成骨细胞的早期应答反应及力学信号转导机制的初步研究[D]. 郑翼. 四川大学. 2004
[8]. 张应力对小鼠成骨细胞增殖分化的影响及基因谱差异分析[D]. 刘春生. 河北医科大学. 2016
[9]. 不同力学因素作用下人源MG-63成骨样细胞差异基因表达的研究[D]. 张连昌. 第四军医大学. 2015
[10]. 胰岛素样生长因子-1对模拟失重下成骨细胞整合素亚单位表达的影响[D]. 陈思. 南方医科大学. 2013
标签：生物医学工程论文; 糖蛋白论文; 剪应力论文; 细胞增殖论文; 细胞分化论文; 应力状态论文; 基因合成论文; 力学论文; 信号通路论文; 应力论文;