不对称还原苯丙酮酸的L-乳酸脱氢酶L-LcLDH2的表达及生物信息学分析

论文摘要

以干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增一种L-乳酸脱氢酶（L-Lc LDH2）的编码基因Lcldh2;借助表达质粒pET-28a（+）将Lcldh2在大肠杆菌BL21（DE3）中实施异源表达。实验结果表明,细胞超声破碎液中L-Lc LDH2催化苯丙酮酸的酶活性为47 U/mg总蛋白质;采用重组E. coli/Lcldh2全细胞催化苯丙酮酸还原,所获产物L-苯乳酸的对映体过量（eep）值> 99%。生物信息学分析表明,Lcldh2开放阅读框长906 bp,编码含301个氨基酸的L-Lc LDH2,预测其相对分子质量和等电点分别为32 585和5.5;L-Lc LDH2含有典型的NAD+结合位点序列（GXGXXG）,属于NAD依赖型L-乳酸脱氢酶,且是一种非分泌、非跨膜、无信号肽和定位于细胞质的酶蛋白。L-Lc LDH2的获得为生物法制备高光学纯L-苯乳酸提供了新的酶源。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质粒、菌株和培养基

1.1.2 主要试剂和仪器

1.2 方法

1.2.1 引物设计

1.2.2 L-Lc LDH2基因的克隆

1.2.3 L-Lc LDH2的诱导表达

1.2.4 L-Lc LDH2酶活性的测定

1.2.5全细胞转化PPA生成PLA

1.2.6 HPLC分析PPA和PLA

1.2.7 L-Lc LDH2的生物信息学分析

2 结果与分析

2.1 L-Lc LDH2编码基因Lcldh2的克隆

2.2 L-Lc LDH2的诱导表达

2.3 全细胞催化PPA生成L-PLA

2.4 L-Lc LDH2的生物信息学分析

2.4.1 L-Lc LDH2的一级结构分析

2.4.2 L-Lc LDH2的二级结构预测和三维结构的同源建模

3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李雪晴,袁风娇,刘艳,李剑芳,邬敏辰

关键词: 乳酸脱氢酶,苯丙酮酸,不对称还原,表达,生物信息学

来源: 食品与生物技术学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学食品学院,江南大学无锡医学院

基金: 国家自然科学基金项目（21676117）

分类号: Q55

页码: 25-30

总页数: 6

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不对称还原苯丙酮酸的L-乳酸脱氢酶L-LcLDH2的表达及生物信息学分析

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