导读:本文包含了真核表达质粒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:质粒,基因,转染,蛋白,细胞,因子,病毒。
真核表达质粒论文文献综述
王孜恒,周敬伟,侯筱宇[1]（2019）在《Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察》一文中研究指出目的构建Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相关细胞死亡因子(Bad)基因真核表达质粒pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad,并观察两质粒转染至人胚肾293(HEK293)细胞后Bax、Bad的表达。方法采用TRIzol试剂提取大鼠脑组织总RNA,利用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Bax和Bad的互补DNA(cDNA)序列,将cDNA分别克隆至pcDNA3.1载体上。采用脂质体转染法将序列正确的pcDNA3.1-Bax和pcDNA3.1-Bad真核表达质粒分别转染至HEK293细胞,免疫印迹法鉴定Bax、Bad在细胞中的表达。结果双酶切和DNA测序分析显示Bax和Bad基因片段成功插入pcDNA3.1载体中,并且与其cDNA(Genbank:NM_017059.2和AF031227.1)序列完全一致。免疫印迹显示pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒能够在HEK293细胞中高效表达。结论 pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒构建成功,Bax、Bad在HEK293细胞中成功过表达。(本文来源于《山东医药》期刊2019年30期）
马玉腾,罗永仁,姜永越,于成东,张皓[2]（2019）在《气肿疽NanA基因真核表达质粒的构建与鉴定》一文中研究指出为构建气肿疽NanA基因真核表达质粒,根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列,设计合成了1对特异性引物,以气肿疽梭菌基因组DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD 18-T simple载体,将连接后的pMD 18-T-NanA进行鉴定分析。将克隆质粒pMD 18-T-NanA进行双酶切后,与pVAX1真核表达质粒连接。结果表明:构建的重组克隆质粒pMD 18-T-NanA和重组表达质粒pVAX1-NanA经PCR鉴定和酶切鉴定正确。该试验成功构建了气肿疽NanA基因真核表达质粒,为气肿疽核酸疫苗的制备奠定了基础。(本文来源于《延边大学农学学报》期刊2019年03期）
蔡辉,黄文利,孙朝辉[3]（2019）在《PcDNA3.1(+)/CYP11B2真核表达质粒的构建及其在NCI-H295R细胞中的表达》一文中研究指出目的构建人醛固酮合成酶基因(CYP11B2)的真核表达质粒,并在人肾上腺上皮细胞(NCI-H295R)中表达,为下一步定点突变研究奠定基础。方法从人的肾上腺组织中提取总的RNA,采用RT-PCR扩增法扩增人的CYP11B2全长cDNA并克隆到PMD18-T载体中,然后再亚克隆于PcDNA3.1(+)真核表达载体,通过菌液PCR和酶切鉴定重组真核表达质粒,并以DNA测序证实。利用阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染NCI-H295R,RT-PCR和放射免疫法(RIA) 检测CYP11B2基因的表达。结果菌液PCR扩增和酶切证实真核表达质粒构建成功,测序表明CYP11B2基因cDNA全长(1 509bp)和GenBank上公布的序列(D13752)相比较,存在一个碱基差异A3323G,这个变异使得第173位的赖氨酸变为精氨酸,核苷酸序列的同源性为99.9%,氨基酸序列的同源性为99.8%。真核表达质粒转染人肾上腺上皮细胞后CYP11B2 mRNA表达增加,细胞上清中的醛固酮含量显着增加。结论①通过查阅国外SNP数据库得知K173R为一个SNP位点,编号为rs4539。②成功构建了人CYP11B2基因的真核表达质粒,阳离子脂质体是NCI-H295R有效的体外转染体系,本实验为进一步研究该基因的结构与功能关系奠定了基础。(本文来源于《中国现代医药杂志》期刊2019年09期）
刘新峰,陈明明,张俊星,李燕,苏君[4]（2019）在《牛FSHβ基因真核表达质粒的构建及表达分析》一文中研究指出为开发可以体外合成牛促卵泡素(FSH)的表达系统,试验通过基因合成的手段获得牛FSHβ基因的目的片段,并通过酶切及T4 DNA连接酶的作用将FSHβ目的片段构建成pcDNA3.1-EGFP-FSHβ重组质粒,并针对构建的pcDNA3.1-EGFP-FSHβ重组质粒,采用菌液PCR、双酶切的方法对该重组质粒进行鉴定,并进一步利用293T细胞检测该重组质粒的表达情况。结果表明:菌液PCR和双酶切的结果证实了牛FSHβ基因片段插入了重组质粒中;pcDNA3.1-EGFP-FSHβ重组质粒可以在293T细胞中表达出绿色荧光蛋白,而且经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测发现pcDNA3.1-EGFP-FSHβ重组质粒可以在293T细胞中转录并翻译出牛FSHβ基因的蛋白表达产物。说明pcDNA3.1-EGFP-FSHβ重组表达质粒构建成功,并且可以在293T细胞中表达。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年15期）
王晓娟,张洁,杨惠,刘淑英[5]（2019）在《靶向enJSRV env基因shRNA真核表达质粒的构建及其干扰效率的测定》一文中研究指出所有哺乳动物的胎盘都是由胚胎滋养层细胞和母体的子宫内膜细胞构成的。从解剖形态上来说,羊为子叶型胎盘。大量研究发现,en JSRV囊膜蛋白(Env)在绵羊绒毛膜滋养层细胞及生殖道上皮(子宫内膜上皮,子宫颈上皮,阴道上皮等)均有表达。而且目前众多学者提出假说认为,绵羊滋养外胚层细胞与子宫内膜上皮细胞在en JSRV囊膜蛋白(Env)及其受体透明质酸酶2(Hyaluronidases 2,Hyal 2)的相互作用下融合形成多核合胞体,最终形成胎盘的子叶。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
李振玲,王帝,宋远见,王玉兰[6]（2019）在《细胞分裂周期蛋白42结构域突变真核表达质粒的构建与鉴定》一文中研究指出目的:构建细胞分裂周期蛋白(Cdc42)的结构域突变质粒,即鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)结构域突变质粒。方法:根据NCBI中小鼠Cdc42全长cDNA序列找到结构域GEF,将GEF的氨基酸突变成丙氨酸,根据突变后的序列设计引物,PCR扩增得到目的片段588 bp,限制性内切酶EcoRI和HindⅢ双酶切后插入到编码红色荧光蛋白(RFP)和his标签的真核表达载体PM-his-RFP中,构建PM-his-Cdc42(GEF)-RFP重组质粒,进行酶切电泳及DNA测序验证。用脂质体介导方法将重组质粒瞬时转染HT22细胞,通过荧光显微镜观察转染效率。结果:经酶切及测序结果显示突变后结构域插入的位置和序列正确,成功构建Cdc42蛋白GEF结构域突变质粒;荧光结果表明,重组质粒顺利转染HT22细胞。结论:成功构建的Cdc42结构域突变质粒为Cdc42蛋白的功能研究提供有效的操作工具。(本文来源于《解剖学杂志》期刊2019年03期）
李莎莎,贺虹,崔冠一,欧丽娜,邓博[7]（2019）在《人Smurf1基因真核表达质粒的构建和表达》一文中研究指出[目的]构建人Smurf1基因的真核表达载体并检测其表达和细胞亚定位。[方法]PCR法从人胚肾细胞HEK-293T中扩增Smurf1基因的ORF序列,将其插入到带Flag标签的p CMV5真核表达载体,插入位点为限制性内切酶SalⅠ和XbaⅠ之间。酶切并测序鉴定该质粒的正确性。将成功构建的质粒Flag-Smurf1转染HEK-293T细胞和Hela细胞,Western Blotting检测Smurf1蛋白的表达情况;转染Mv. 1. Lu细胞,免疫荧光检测Smurf1蛋白在细胞中的亚定位。[结果]成功扩增出Smurf1基因的ORF序列;连入p CMV5中获得了质粒Flag-Smurf1;酶切鉴定得到2. 2 kb大小的片段,测序结果显示连入的是Smurf1基因的c DNA序列正确。Western Blotting结果显示该质粒可在HEK-293T细胞和Hela细胞中表达,表达大小约为80 k Da,符合预期。免疫荧光实验结果显示过表达的Smurf1主要定位在细胞膜上。[结论]成功构建了带Flag标签的人Smurf1基因的真核表达质粒,该质粒可在细胞中顺利表达。(本文来源于《生物技术》期刊2019年03期）
钱林,李婷,鲜思美,曹熠,张友[8]（2019）在《SOE-PCR技术在羊口疮病毒真核表达质粒构建中的应用》一文中研究指出为了构建羊口疮病毒B2L和F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L,探讨制备安全可靠羊口疮病毒核酸双基因疫苗的可行性,试验通过Primer Premier 5.0软件设计B2L和F1L融合基因2对引物,应用SOE-PCR技术将B2L和F1L连接起来,用限制性内切酶消化后插入pVAX1真核表达载体中,构建B2L-F1L融合基因表达质粒,再转入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,对真核表达质粒进行PCR鉴定、双酶切鉴定及序列测定。结果表明:利用SOE-PCR技术成功扩增出B2L-F1L融合基因;对真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L进行PCR鉴定和双酶切鉴定后,均可得到与预期大小一致的DNA片段;测序发现,真核表达质粒目的基因序列与预期设计一致。说明真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L构建成功。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年09期）
邹琳,兰建云,宋曙,邵伟伟,陈海涛[9]（2019）在《人类野生型及突变型PPARγ基因真核表达质粒的构建和鉴定》一文中研究指出目的构建人类野生型过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)及其突变型PPARγMut基因的真核表达质粒。方法采用RT-PCR和重迭延伸PCR技术扩增人类野生型及功能区缺失的突变型PPARγ全长序列,通过DNA重组技术分别将其重组于pcDNA3.1-Myc载体,构建myc标记的PPARγWT及PPARγMut融合蛋白表达质粒,通过酶切电泳分析和DNA测序的方法对重组表达质粒进行鉴定。结果通过酶切电泳和测序结果证实,构建的重组表达质粒目的基因片段为人类野生型PPARγ及突变型PPARγMut的cDNA。结论成功构建野生型及其功能区缺失的突变型PPARγ质粒,为进一步探讨PPARγ基因在乳腺癌发生和发展中的作用奠定了基础。(本文来源于《江苏医药》期刊2019年03期）
栗永华,车路平,仇旭升,谭磊,孙英杰[10]（2019）在《鸡TIGAR基因真核表达质粒的构建及其抗凋亡功能评价》一文中研究指出【背景】TP53诱导的糖酵解和凋亡调节因子(TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator,TIGAR)是p53下游的靶基因,具有调节糖酵解水平和去除活性氧(Reactive oxygen species,ROS)并降低由活性氧诱发的细胞凋亡水平。【目的】构建鸡源TIGAR基因的真核表达质粒,并检测TIGAR基因在DF1细胞中的抗凋亡作用,为建立稳定表达鸡TIGAR基因的细胞系做准备。【方法】根据GenBank(登录号:XM_417232.6)中预测基因设计引物,利用RT-PCR的方法从SPF鸡脾脏中扩增鸡TIGAR基因,将扩增产物克隆至载体(Flag-CMV14)后送公司测序验证;随后构建进化树对鸡TIGAR基因与其他哺乳动物及水生动物的TIGAR基因进行同源性分析。将重组质粒(Flag-TIGAR)转染入DF1细胞24 h后,使用新城疫病毒诱导细胞凋亡,利用Western Blot检测重组质粒表达情况以及Poly ADP-Ribose Polymerase(PARP)裂解情况。此外还将重组质粒(Flag-TIGAR)转染入DF1细胞,并于收样前2 h使用Staurosporine刺激细胞发生凋亡,分别在转染后24、48 h收集样品,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。【结果】RT-PCR扩增TIGAR基因,在843 bp处出现目的条带与预测相符,构建的TIGAR真核表达质粒(Flag-TIGAR)经测序,结果显示其序列与GenBank上预测的基本一致。Western Blot结果显示在30 h、36 h收集的样品中PARP均被裂解且转染重组质粒(Flag-TIGAR)的实验组与未转染质粒(MOCK)组或转染空载体(Flag-CMV14)组的样品相比,裂解的PARP表达量明显降低,且差异极显着(P<0.01)。流式结果显示:24 h检测转染Flag-CMV14后细胞总凋亡率为11%(早期凋亡7.8%,晚期凋亡3.2%),而转染Flag-TIGAR后细胞总凋亡率仅为4%(早期凋亡3.7%,晚期凋亡0.3%),转染Flag-CMV14的早期凋亡率和晚期凋亡率均高于转染Flag-TIGAR组,且差异显着(P<0.05)。48 h转染Flag-CMV14后细胞总凋亡率为20.3%(早期凋亡14.3%,晚期凋亡6.0%),而转染Flag-TIGAR后细胞总凋亡率为6.4%(早期凋亡4.8%,晚期凋亡1.6%),转染Flag-CMV14组的细胞早期凋亡和晚期凋亡率均高于转染Flag-TIGAR的组,且差异极显着(P<0.01)。【结论】成功扩增出鸡TIGAR基因,并构建了其真核表达质粒,通过Western Blot和流式实验均证实过表达TIGAR后可降低细胞的凋亡程度并有利于细胞存活。(本文来源于《中国农业科学》期刊2019年06期）
真核表达质粒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为构建气肿疽NanA基因真核表达质粒,根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列,设计合成了1对特异性引物,以气肿疽梭菌基因组DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD 18-T simple载体,将连接后的pMD 18-T-NanA进行鉴定分析。将克隆质粒pMD 18-T-NanA进行双酶切后,与pVAX1真核表达质粒连接。结果表明:构建的重组克隆质粒pMD 18-T-NanA和重组表达质粒pVAX1-NanA经PCR鉴定和酶切鉴定正确。该试验成功构建了气肿疽NanA基因真核表达质粒,为气肿疽核酸疫苗的制备奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
真核表达质粒论文参考文献
[1].王孜恒,周敬伟,侯筱宇.Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察[J].山东医药.2019
[2].马玉腾,罗永仁,姜永越,于成东,张皓.气肿疽NanA基因真核表达质粒的构建与鉴定[J].延边大学农学学报.2019
[3].蔡辉,黄文利,孙朝辉.PcDNA3.1(+)/CYP11B2真核表达质粒的构建及其在NCI-H295R细胞中的表达[J].中国现代医药杂志.2019
[4].刘新峰,陈明明,张俊星,李燕,苏君.牛FSHβ基因真核表达质粒的构建及表达分析[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[5].王晓娟,张洁,杨惠,刘淑英.靶向enJSRVenv基因shRNA真核表达质粒的构建及其干扰效率的测定[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[6].李振玲,王帝,宋远见,王玉兰.细胞分裂周期蛋白42结构域突变真核表达质粒的构建与鉴定[J].解剖学杂志.2019
[7].李莎莎,贺虹,崔冠一,欧丽娜,邓博.人Smurf1基因真核表达质粒的构建和表达[J].生物技术.2019
[8].钱林,李婷,鲜思美,曹熠,张友.SOE-PCR技术在羊口疮病毒真核表达质粒构建中的应用[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[9].邹琳,兰建云,宋曙,邵伟伟,陈海涛.人类野生型及突变型PPARγ基因真核表达质粒的构建和鉴定[J].江苏医药.2019
[10].栗永华,车路平,仇旭升,谭磊,孙英杰.鸡TIGAR基因真核表达质粒的构建及其抗凋亡功能评价[J].中国农业科学.2019
论文知识图
