利用CRISPR/Cas9技术构建FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株

利用CRISPR/Cas9技术构建FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株

论文摘要

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除SiHa细胞中的卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)基因,构建FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株。方法构建sgRNA-FSTL1重组质粒并包装成慢病毒。收集病毒液并感染SiHa细胞,使用嘌呤霉素筛选FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株;采用RT-qPCR和Western blot检测SiHa细胞稳定株FSTL1 mRNA和蛋白的表达情况。结果 FSTL1-sgRNA慢病毒构建成功并筛选出FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株;FSTL1的mRNA和蛋白表达水平在SiHa细胞稳定株中的表达量均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 细胞及细胞培养
  •   1.2 试剂
  •   1.3 方法
  •     1.3.1 sgRNA-FSTL1慢病毒质粒构建
  •     1.3.2 sgRNA-FSTL1慢病毒包装
  •     1.3.3 Cas9-sgRNA-FSTL1慢病毒感染SiHa细胞及稳定株筛选
  •     1.3.4 FSTL1 mRNA表达的检测
  •     1.3.5 阳性克隆筛选
  •     1.3.6 FSTL1蛋白表达的检测
  •   1.4 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 sgRNA-FSTL1慢病毒的构建及测序结果
  •   2.2 FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株的检测及筛选结果
  •   2.3 SiHa细胞稳定株的FSTL1mRNA和蛋白的表达情况
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张红,胡晓霞,洛若愚,陈欢,李梦如,杨琅

    关键词: 卵泡抑素样蛋白,基因敲除,细胞

    来源: 中国临床新医学 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 武汉大学人民医院妇科,广西壮族自治区人民医院妇科

    基金: 国家自然科学基金资助项目(编号:81660434)

    分类号: R329.2

    页码: 842-846

    总页数: 5

    文件大小: 1506K

    下载量: 310

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