李莉[1]2003年在《冻干羊胎免疫调节因子及其稳定性初步研究》文中研究说明羊胎免疫调节因子(goat embryo immunoregulatory factor, GEIF)，是以羊胎为原料经超滤等工艺制成的生物活性物质。利用羊胎免疫调节因子超滤液作为原料研发保健品符合现代食品科学的发展趋势，但羊胎免疫调节因子的稳定性是其应用中存在的问题。因此，如何提高其活性物质的稳定性、改进质量，使产品利于质量控制，已成为亟待解决的问题。 本文利用添加保护剂和真空冷冻干燥技术，将GEIF超滤液(分子量＜3000道尔顿)制成冻干GEIF，以期增加产品稳定性、提高质量、延长货架期，并在一定程度上解决贮存和运输条件较为严格的问题，使产品利于质量控制。本试验筛选了最优冻干配方和冻干工艺参数，并将冻干GEIF与GEIF超滤液比较分析，进而对冻干GEIF的稳定性作了初步研究。本试验研究为冻干羊胎免疫调节因子保健品的研发提供了一定的实验依据，也可为相关的以多肽类为功效成分的保健食品的研发提供一定参考。试验结果表明： 1．甘露醇、蔗糖均可赋予冻干GEIF一定的外观性状，但因各自理化性质的不同，使得冻干GEIF的外观性状存在差异，主要表现为粗糙度不同。 2．甘露醇、蔗糖对GEIF的免疫活性具有不同冻干保护作用和贮存稳定性作用。作为缓冲剂的柠檬酸钠表现出相对较差的稳定性作用。从冻干保护效果和冻干稳定性效果综合考虑，选取4％(g／ml)甘露醇配比1％(g／ml)蔗糖的配方为最优配方。 3．以外观性状、免疫活性、水分含量为主要指标，从冻干和稳定效果考察，通过正交试验选得真空冷冻干燥的最佳工艺参数为第一阶段干燥温度-10℃、干燥时间25h；第二阶段干燥温度20℃、干燥时间10h。保护剂的配比为影响冻干效果的主要因素，对稳定效果则保护剂的配比和第一阶段干燥时间同为主要因素。根据最优组合得到的冻干曲线可作为放大生产的有效参考。 4．用紫外扫描和高效液相色谱对GEIF超滤液和冻干GEIF进行分析比较。两者的最大紫外吸收波长为250±1nm，紫外吸收峰值＜1.5；GEIF超滤液和冻干GEIF均分离出20个峰，两者图谱的相对峰面积在2％以上的峰，其保留时间和各组分相对百分含量这两个特征指标无显着性差异(P＞0.05)，图谱有相当好的吻合性。这初步表明GEIF超滤液经添加保护剂和真空冷冻干燥后，其主要成分没有发生显着性改变，保护剂的选择在理论和实际上均符合原则，添加的保护剂不影响冻干GEIF质量标准冻于羊胎免疫调节因子及其稳定性初步研究中紫外扫描和色谱指标的检测。 5．在4’C、20’C、37C下，经30天留样考察，GEIF超滤液受温度影响较大，而冻干GEIF受温度影响较小。4℃、30天，两者均能保持良好活性；20℃、30天，GEIF超滤液的免疫活性较冻干GEIF有所降低；37oC、30天，冻干GEIF的免疫活性极显着高于GE F超滤液的免疫活性0功＊人＊mF超滤液应在2～8℃保存。 6．在相对湿度900土50和75O土50下，经30天留样考察，冻干GEIF因其特有的多孔疏松结构极易吸潮，导致外观性状的改变和活性的丧失。若采用优质包村并包装良好，可明显减轻在贮存和运输中环境相对湿度对产品的影响。 7．对冻干GEIF稳定性的初步研究表明，添加保护剂和采用真空冷冻干燥能在一定程度上提高GEIF的稳定性。
刘宇[2]2003年在《低分子量羊胎免疫调节因子质量标准的初步研究》文中进行了进一步梳理本课题围绕3000Da以下低分子量羊胎免疫调节因子(goat embryo immunoregulatory factor，GEIF)的质量标准进行了初步的研究，着重对其指纹图谱指标进行色谱条件的确定和方法的建立，并在此基础上对主要成分峰及其稳定性进行了初步分析。 1、原料羊胎标准：根据山羊各期特征的比较确定了二月龄左右的山羊胚胎，胎长为5.0-10.0cm，胎重8-40g，头长1.5-3cm，颈长0.5-2.0cm，尾长1-2.5cm，前肢长1.5-3cm，耳廓长0.2-0.5cm。 2、主要工艺标准：通过初步比较透析和超滤工艺，选择获取成分较多且活性相对较高的超滤作为主要工艺。 3、鉴别和检查指标标准：通过理化性质、紫外光谱、分子量指标、指纹图谱、水解氨基酸指标五部分进行确定。 (1)理化性质指标：按照《中华人民共和国药典》(2000版)附录和《生物制品规程》(2000版)所载方法对连续10批低分子量羊胎免疫调节因子的颜色、澄明度、pH值、多肽含量及核酸含量、蛋白定性反应进行鉴定。 结果表明：低分子量羊胎免疫调节因子为微黄色澄明液体，具有可透析性，可超滤性：pH值位于6.5～7.0之间；其中所含多肽含量＞600ug／ml；核酸含量＞600ug／ml；蛋白质定性反应确定低分子量羊胎免疫调节因子呈现蛋白阴性特征。 (2)紫外光谱指标：在230nm～330nm之间作紫外扫描分析，发现10批次低分子量羊胎免疫调节因子的特征吸收峰均在251±2nm处，而且A_(260nm)／A_(280nm)＞2.0。 (3)分子量指标：利用凝胶色谱法确定低分子量羊胎免疫调节因子分子量范围，10批次低分子量羊胎免疫调节因子中均检测不到3000Da以上的物质。 (4)指纹图谱指标：通过反相高效液相色谱(Reversed-Phase High-performance Liquid Chromatography，RP-HPLC)多种参数的比较，探讨 理学硕士学位论文：低分子公羊胎免疫调节因子质量标准的初步研究了流动相、梯度、流速、温度、波长各种条件对未知混合成分分离的影响，建立了最佳色谱测定方法；并对连续10批样品进行指纹图谱分析；在此前提下，对主要成分峰进行进一步分析：用二极管阵列检测器检测到各峰不同时间段的光谱扫描图，同时结合部叁酮反应的结果，对各主要成分峰的纯度和性质作了初步判断；另外，通过指纹图谱，初步分析温度及放置时间对样品稳定性的影响。 获得的 17个主要成分峰中，其中大于总面积 5％的峰有 7个，方法精密度实验说明各峰保留时间的相对标准偏差均可控制在0．3％以下，峰面积和峰高则在5．0％和生0％以内：并且10批次样品指纹图谱相似度都与1接近；进一步的主要成分峰分析发现17个分高峰中有8个是纯峰，其中可初步辨别8种成分为多肽类，9种为核酸类；稳定性研究发现七0oC及20eC下放置2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时的样品在相同色谱条件下指纹图谱相似度均高于0．995，出峰没有显着变化。 ，（5）水解氨基酸指标：利用氨基酸自动分析仪对水解氨基酸进行分析，证实了低分子量羊胎免疫调节因子中含十七种水解氨基酸。 4、免疫活性试验：通过活E玫瑰花结和淋巴转化实验初步验证了低分子量羊胎免疫调节因子具有细胞免疫调节功能。 5、安全性标准：选择无菌试验、过敏试验、异常毒性试验和热原质反应对其进行评价，说明低分子量羊胎免疫调节因子对实验动物并无任何毒副作用，。 综上所述，通过原料、工艺的选择和一系列定性定量指标的确定，为制定完整低分子量羊胎免疫调节因子的质量标准提供了必要的实验数据；同时建立了控制质量标准较精确的定性定量指标——指纹图谱，也能为类似动物生化药物提供质量控制的方法学参考：另外，实验显示出低分子量羊胎免疫调节因子是安全、有效、可控的，为其开发为一种新型生物制品提供了必要的依据。
高利臣[3]2004年在《羊胎盘免疫调节因子免疫生物活性评价的初步研究》文中提出本课题以Mr10 000的羊胎盘免疫调节因子GPIF(goat plancenta immunoregulatory factor，GPIF)为免疫生物活性评价样品材料，对GPIF免疫生物活性进行了评价方法的比较筛选、免疫生物活性评价方法的优化，并在此基础上对GPIF进行了免疫生物活性评价，确立了GPIF免疫生物活性剂量效应曲线，探讨了不同工艺方法及处理因素对GPIF免疫生物活性的影响，与同类药品免疫生物活性进行了对比。 1、GPIF免疫生物活性评价实验样品材料的准备 通过对GPIF免疫生物活性评价实验样品材料的一般理化指标鉴定，光谱、指纹图谱检测和安全性评价，显示由该工艺制备的实验样品材料理化性质稳定，活性成分含量充足，安全可靠，可以用来作为GPIF免疫生物活性的评价。 2、GPIF免疫生物活性评价方法的比较筛选 初步比较筛选了两种形态学免疫生物活性评价方法，E玫瑰花环实验和淋巴细胞转化实验及两种光学比色免疫生物活性评价方法，淋巴细胞增殖实验MTT法和淋巴细胞增殖实验BrdU-ELISA法。并对初步筛选的E玫瑰花环实验和淋巴细胞增殖BrdU-ELISA实验进行了进一步筛选。最终确定GPIF免疫生物活性评价方法为：T细胞来源于胸腺的E玫瑰花环实验和PHA诱导的淋巴细胞增殖BrdU-ELISA实验。 3、GPIF免疫生物活性评价方法的优化 对GPIF E玫瑰花环实验在不影响SRBC活性的基础上用神经氨酸酶处理，经此法处理后E玫瑰花环形成率明显提高；对传统的ConA诱导的人外周血淋巴细胞增殖BrdU-ELISA实验，进行了方法学改进。采用PHA诱导的人外周血淋巴细胞增殖BrdU-ELISA实验效果远远优于ConA诱导增殖效果。 4、GPIF免疫生物活性的评价理学硕d匕论文:羊胎丈免痰调节因子免痰生物翎亏性公卜价的初步研究 无论是E玫瑰花环实验，还是细胞增殖BrdU一ELISA实验，GPIF免疫生物活性都呈现了稳定的剂量效应关系。表现为低浓度(0 .125mg/m1)免疫生物活性较低，随着GPIF浓度升高而活性逐渐增强，到0.smg/m1浓度附近时免疫生物活性达到最高，之后逐渐减弱。GPIF免疫生物活性剂量效应曲线呈正态分布。GPIF是一种细胞免疫增强剂。 5、GPIF免疫生物活性影响因素的探讨 分别对GPIF病毒灭活、冻干工艺及赋形剂的选择、分子截留和制备工艺方法等影响因素进行了对比分析。研究结果显示，病毒灭活、冻干工艺及赋形剂的选择和分子截留对GPIF免疫生物活性没有任何影响，但因制备工艺方法的不同，免疫生物活性也会有改变。免疫生物活性实验证实超滤法提取的GPIF免疫生物活性优于透析法。 6、GPIF与同类药品免疫生物活性比较研究 我们在对比GPIF与所有重庆市制药企业生产的以及在重庆市销售的同类药品胸腺肤注射液、胸腺肤肠溶片(胶囊)和转移因子注射液免疫生物活性时发现，采用此标准制备的GP工F免疫生物活性高于同类产品免疫生物活性。 综上所述，通过对GPIF免疫生物活性评价实验样品材料的准备，显示由该工艺制备的实验样品材料理化性质稳定，活性成分含量充足，安全可靠，可以用来作为GPIF免疫生物活性的评价;通过对GPIF免疫生物活性评价方法的比较筛选及评价方法的优化，为GPIF质量标准建立了较优免疫生物活性评价手段;同时GPIF免疫生物活性剂量效应的发现，为该产品的免疫生物活性深入研究奠定了基础，也为GPIF药效学研究提供了理论资料;对GPIF免疫生物活性影响因素的探讨及与同类药品免疫生物活性的对比，证实GPIF是一种免疫生物活性稳定、且具有高免疫生物活性的细胞免疫增强剂;同时，本研究也为同类产品免疫生物活性评价提供了方法学参考。
马兴亮[4]2008年在《奶山羊胎盘肽的分离提纯及其对小白鼠免疫功能的影响》文中提出自1985年,刘月新首次采用“匀浆-透析法”提取胎盘肽以来,广大科研工作者对胎盘肽进行了大量的理化分析与生物活性测定的研究,发现其在临床用于治疗病毒性肝炎、白细胞减少症、重症肌无力等免疫性疾病以及恶性肿瘤等,有较为理想的疗效。奶山羊胎盘的结构和功能与人的胎盘有许多相似之处,近几年来已有报道,从羊的胎盘中也可以提取出羊胎盘肽并且具有与人胎盘肽类似的生物学活性。但是对奶山羊胎盘肽的研究还没有,测定其理化性质和生物活性,看其与人胎盘肽的活性是否一致。可以为奶山羊胎盘肽的研究和将其用于治疗动物或人疾病方面提供一定的依据。以前的报道多集中于经透析或超滤制的的混合小肽的活性的研究。本试验将经过超滤和superdex75层析对混合小肽进行分离,通过检测各个组分的生物学活性来筛选有活性的组分,为下一步的生物合成或化学合成提供一定的依据。整个研究包括两大部分:一奶山羊胎盘肽的分离提纯和含量测定将冷冻的奶山羊胎盘常温解冻,洗净血液后用生理盐水冲洗胎盘,取胎盘的子叶,将子叶剪碎,经过反复冻融,经高速组织捣碎匀浆机匀浆,高速冷冻离心机离心沉淀,取上清液分别用0.45μm、0.22μm的滤器进行微滤,以除去不溶物质;微滤液经Millopor YM-10型超过滤器过滤得到粗样品,粗样品是无色透明液体,具有可透析性,可超滤性,无热原的小分子多肽,pH值为6.6～6.9;粗样品经superdex75层析得到四个组分肽类,分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,冷冻干燥后均为白色的粉末;四组分经加脲和甘油Tricine-SDS-PAGE电泳法电泳。结果显示组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的分子量分别为10.139KDa、8.166KDa、7.447KDa和6.761KDa;由考马斯亮蓝G-250法测定组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的含量分别为:0.96mg/g、1.2mg/g、1.32mg/g、1.8mg/g。二奶山羊胎盘肽对小白鼠免疫功能的影响本实验将小白鼠随机分为6大组,其中5组为实验组(分别腹腔注射组分:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和粗提物);每个实验组又分为高中低叁种剂量小组(分别为0.1mL、0.2mL、0.4mL),每小组5只;对照组5只,仅注射生理盐水。每天注射一次,连续注射一周。通过对小鼠外周血血清白介素2含量、脾脏T淋巴细胞增殖反应、脾脏NK细胞活性和腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响来考察奶山羊胎盘肽的免疫活性作用。1.通过放射性免疫法测定小鼠外周血中IL-2的含量,结果显示,组分Ⅲ、Ⅳ和粗提物可以显着提高小鼠外周血中IL-2的含量,比对照组提高了15.3%～30.1%(p<0.05)。2.通过MTT法测定脾脏T淋巴细胞增殖反应,结果显示,组分Ⅲ、Ⅳ和粗提物可以在体内能极显着协同ConA刺激脾脏淋巴细胞增殖(p<0.01)。3.通过MTT法测定脾脏NK细胞的杀伤活性,结果显示,组分Ⅲ、Ⅳ和粗提物可以极显着提高小白鼠脾脏NK细胞的杀伤活性(p<0.01)。4.通过腹腔巨噬细胞吞噬中性红实验可知,组分Ⅲ、Ⅳ和粗提物可以极显着提高小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能(p<0.01)。由以上奶山羊胎盘肽对小鼠免疫功能影响的4个实验结果中,发现存在剂量关系,随着浓度的能加而增强,但是差异不显着;在奶山羊胎盘肽中有免疫活性的是组分Ⅲ和Ⅳ。
王炳祥[5]2011年在《山羊胎盘肽的分离和初步鉴定及营养、免疫、抗氧化作用的研究》文中研究说明自1985年刘月新首次采用“匀浆-透析法”提取人胎盘肽以来,广大科研工作者对胎盘肽进行了大量的理化分析与生物活性测定的研究,发现其在临床用于治疗病毒性肝炎、白细胞减少症、重症肌无力等免疫性疾病以及恶性肿瘤等,有较为理想的疗效。山羊胎盘的结构和功能与人的胎盘有许多相似之处,近几年来已有报道,从羊的胎盘中也可以提取出羊胎盘肽,并且具有与人胎盘肽类似的生物学活性,但是目前对于羊胎盘肽生物活性的研究还不全面,胎盘肽中活性组分的具体研究更是非常缺乏,而山羊胎盘来源有限,如用于临床,规模化生产胎盘肽需通过基因工程,活性组分的研究是基因工程的前提。本试验通过超滤制得胎盘肽,通过层析和电泳对其进行了初步分离和鉴定,对胎盘肽粗提物从营养学方面进行了分析,对胎盘肽粗提物和各分离出的组分从免疫和抗氧化方面进行了研究,旨在揭示羊胎盘肽在营养、免疫和抗氧化方面的作用,以及为活性组分的进一步研究提供参考。整个研究包括以下部分:一、山羊胎盘肽的分离提纯和初步鉴定取冷冻的山羊胎盘子叶,解冻后生理盐水冲洗,然后剪碎,经过反复冻融叁次、高速组织匀浆机匀浆(12000r,3min,10次)、冷冻离心(4℃,8000r,20min)、取上清液微滤(0.22μm)、超滤(10KD)得到胎盘肽粗提物,粗提物为无色透明液体,为具有可透析可超滤性无热原的小分子多肽,PH6.6-6.9。粗提物经Superdex75层析得到四个组分,分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,冷冻干燥均为白色粉末,四组分经加脲和甘油Tricine-SDS-PAGE电泳显示分子量分别为10.139KDa、8.166KDa、7.447KDa、6.761KDa。二、胎盘肽提取液的氨基酸分析和矿物元素测定山羊胎盘肽提取液中,共检出17种氨基酸,其中必需氨基酸7种,含量占总氨基酸的34.56%,对于儿童而言(儿童另需要精氨酸和组氨酸),含必需氨基酸9种,占总含量的42.59%,含有Fe、Zn、Cu等微量元素,重金属种类很少且含量非常低,不存在临床使用中重金属中毒的威胁。由此可见,山羊胎盘肽提取液具有极高的营养价值,是安全理想的氨基酸补充营养品。叁、山羊胎盘肽对小鼠免疫功能的影响将小鼠随机分成6组,其中5组为试验组(分别腹腔注射组分:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、和粗提物);每个试验组又分为高中低叁种剂量小组(分别为18mg/kg、9mg/kg、4.5mg/kg),每小组10只;对照组10只,仅注射生理盐水。每天注射一次,连续注射一周。通过对各组分试验组小鼠外周血血清中IL-2含量同对照组相比可见,各组分均具有提高小鼠血液中IL-2含量的作用,其中组分Ⅲ、Ⅳ及粗提物试验组IL-2含量比对照组提高了15.3%～30.1%,差异达到显着(p<0.05),组分Ⅳ的活性较强,但与组分Ⅲ和粗提物相比差异并不显着(p>0.05)。通过对各组分试验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能同对照组相比可见,组分Ⅲ、Ⅳ及粗提物有促进小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的作用,同对照组相比,差异极显着(p<0.01)。本实验结果提示组分Ⅲ、Ⅳ及粗提物可显着提高小白鼠的免疫功能,在胎盘小肽这类混合小肽中有免疫活性的主要成分是组分Ⅲ、Ⅳ。四、山羊胎盘肽对小鼠抗氧化能力的影响通过对各组分试验组小鼠SOD、MDA含量及SOD/MDA值同对照组相比显示,中高剂量的胎盘肽Ⅳ和粗提物能显着提高小鼠血清SOD含量(P<0.05),显着降低MDA含量(P<0.05),显着提高SOD/MDA值(P<0.05),提高小鼠的抗氧化能力,高剂量组比中剂量组更明显,但没有出现差异极显着的情况(P>0.01),说明山羊胎盘肽和粗提物提高小鼠的抗氧化能力具有剂量相关性且在一定的限度内。粗提物的活性最高,与组分Ⅳ相比差异不显着(p>0.05)。组分Ⅳ的作用不及粗提物可能与分离过程胎盘肽活性的丧失有关,在胎盘肽粗提物中起增强小鼠抗氧化能力作用的是组分Ⅳ。
谷玉[6]2007年在《羊胎盘保健品的制备及主要功效研究》文中研究表明本文以羊胎盘为原料,按照匀浆、冻融、酶解、提取、冻干等现代工艺进行提取,并将提取物与其他辅配原料按两种不同的配方制备成羊胎盘保健品胶囊Ⅰ号(GPHPⅠ)和羊胎盘保健健品Ⅱ号(GPHPⅡ),其中GPHPⅠ每粒胶囊的羊胎盘含量相当于鲜胎盘15g,GPHPⅡ每粒胶囊的羊胎盘含量相当于鲜胎盘30g。以小白鼠为试验动物,对这两种不同配方的保健品进行毒性试验检测(包括急性毒性试验、精子畸形试验和30天饲喂观察试验)、免疫功能测定(包括免疫器官指数测定、巨噬细胞吞噬能力测定、炭廓清能力、迟发性变态反应和血清溶血素测定)和部分的延缓衰老、抗疲劳的动物试验(包括负重游泳、血清尿素氮含量测定、红细胞SOD活性和MDA含量测定),为产品的商品性开发提供相关理论依据。GPHPⅠ和GPHPⅡ每个项目试验分别设四个组,即低、中、高叁个不同剂量组和对照组,每组10只小白鼠,不同剂量组均采取人工灌胃方法投喂,低、中和高剂量组的灌胃量分别为相当于人体推荐摄人量的1倍、5倍和10倍剂量。毒性试验结果表明,两种配方的羊胎盘保健品均无毒,给小白鼠灌胃的各剂量组中,急性和30天饲喂观察,小白鼠均无死亡;采食及排便均无异常,且精神状态良好,被毛光滑,无寒战、躁动等异常现象;GPHPⅠ各剂量小白鼠精子畸形率分别(分别为3.90%,3.85%和3.65%)与对照组(3.80%)相比差异不显着(p＞0.05)。GPHPⅡ各剂量小白鼠精子畸形率分别(分别为3.95%,3.85%和4.15%),与对照组(3.80%)相比差异不显着(p＞0.05)。免疫功能检测结果表明,GPHPⅠ免疫功能试验中的低、中和高剂量组小白鼠的胸腺指数与对照组无明显差异(p＞0.05),但高剂量组小白鼠的脾脏指数显着高于对照组(p＜0.05),分别为8.342和6.104;二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验结果表明,GPHPⅠ的低剂量和中剂量试验组小白鼠细胞免疫功能(分别为2.49和2.51)与对照组(1.88)比较,都有显着增强(p＜0.05),而高剂量组(3.00)则有极显着增强(p＜0.01);血清溶血素试验测定结果表明,GPHPⅠ的低剂量试验组小白鼠体液免疫功能(49.2)显着高于对照组(35.3)(p＜0.05),而中、高组(分别为58.1和80.6)则极显着高于对照组(p＜0.01);碳廓清试验结果表明,GPHPⅠ的各剂量组小鼠单核巨噬细胞吞噬功能与对照组差异不显着(p＞0.05);腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验结果表明,低剂量组小鼠巨噬细胞的吞噬率(0.294)与对照组(0.254)比较有显着增强(p＜0.05),而中、高组(分别为0.327和0.352)则得到极显着增强(p＜0.01);低剂量组小鼠巨噬细胞的吞噬指数(1.175)与对照组(1.152)比较差异不显着(p＞0.05),中剂量组(1.211)差异显着(p＜0.05),高剂量组(1.241)差异极显着(p＜0.01)。以上结果表明,GPHPⅠ具有增强免疫力功能的作用。免疫功能检测结果表明,GPHPⅡ免疫功能试验中的低、中和高剂量组小白鼠的胸腺指数与对照组无明显差异(p＞0.05),但高剂量组小白鼠的脾脏指数显着高于对照组(p＜0.05),分别为7.734和6.104;二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验结果表明,高剂量组的GPHPⅡ能显着增强小白鼠细胞免疫功能的作用(p＜0.01),分别为2.85和1.88;血清溶血素试验测定结果表明,GPHPⅠ的低剂量试验组小白鼠体液免疫功能(42.4)显着高于对照组(35.3)(p＜0.05),而中、高组(分别为59.1和71.0)则极显着高于对照组(p＜0.01);碳廓清试验结果表明,中剂量组的GPHPⅡ能使小鼠单核巨噬细胞吞噬功能显着提高(p＜0.05);腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验结果表明,低剂量组小鼠巨噬细胞的吞噬率(0.269)与对照组(0.254)比较差异不显着(p＞0.05),而中、高组(分别为0.305和0.324)则分别达到显着(p＜0.05)和极显着(p＜0.01);低剂量组小鼠巨噬细胞的吞噬指数(1.175)与对照组(1.152)比较差异不显着(p＞0.05),中剂量组(1.197)和高剂量(1.230)组差异显着(p＜0.05)。以上结果表明,GPHPⅡ具有增强免疫力功能的作用。延缓衰老、抗疲劳试验结果表明,高剂量的GPHPⅠ能使小白鼠SOD活性(55120.60U/g Hb)显着高于对照组(48355.31U/g Hb)(p＜0.05),MDA含量(12.298nmol/ml)也显着低于对照组(14.340 nmol/ml)(p＜0.05),而低、中剂量组这两个指标与对照组差异均不显着(p＞0.05);小白鼠负重游泳试验表明,GPHPⅠ的各剂量组与对照组相比差异不显着(p＞0.05),而中(12.88 n mol/ml)、高剂量组(12.12nmol/ml)的小白鼠血清尿素氮含量和与对照组(14.61 n mol/ml)比较显着降低(p＜0.05)。以上结果表明,GPHPⅠ对延缓衰老、抗疲劳具有一定的作用。中(54006.42U/g Hb)、高剂量组(57643.10 U/g Hb)的GPHPⅡ能使小白鼠SOD活性显着高于对照组(48355.31 U/g Hb),且中(13.277 nmol/ml)、高剂量组(13.085 nmol/ml)的GPHPⅡ能显着降低MDA含量(p＜0.05)。小白鼠负重游泳试验表明,GPHPⅡ高剂量组能延长小白鼠游泳时间(p＜0.05),中(12.34 n mol/ml)、高剂量组(12.53n mol/ml)的小白鼠血清尿素氮含量和与对照组(14.61 n mol/ml)比较显着降低(p＜0.01)。以上结果表明,GPHPⅡ对延缓衰老、抗疲劳具有一定的作用。GPHPⅠ和GPHPⅡ均具有增强免疫力功能并且对延缓衰老、抗疲劳也具有一定的作用。其中GPHPⅡ的效果更好。
王晓然[7]2013年在《马胎盘水溶性蛋白提取工艺及其保健功能研究》文中研究说明目的：（1）确定马胎盘水溶性蛋白提取工艺；（2）研究马胎盘水溶性蛋白的免疫调节作用；（3）研究马胎盘水溶性蛋白的抗氧化作用。方法：（1）以马胎盘水溶性蛋白含量（%）为指标，采用单因素试验与正交试验相结合的方法筛选马胎盘水溶性蛋白提取工艺；（2）通过MTT法和ELISA法研究马胎盘水溶性蛋白对正常、ConA和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖活性以及NK细胞杀伤活性的影响；（3）通过电镜观察，MTT法，MDA、SOD、GPx试剂盒，流式细胞仪技术，DNALadder，苏木素-伊红染色法研究马胎盘水溶性蛋白对由H2O2造成的皮肤成纤维细胞氧化损伤的保护作用。结果：（1）经过提取工艺筛选，确定马胎盘水溶性蛋白提取工艺为取新鲜马胎盘按料液比1:3加入PBS（pH7.2）高速匀浆，30℃浸提1h，低温高速离心，取上清液透析，冷冻干燥，即得棕褐色絮状马胎盘水溶性蛋白冻干粉，略带腥味，其分子量大约在10-90kD的范围内；（2）适宜浓度的马胎盘水溶性蛋白能明显增强正常淋巴细胞的活性；明显抑制ConA和LPS诱导的T、B淋巴细胞增殖活性，且其对ConA诱导的T淋巴细胞增殖的抑制作用强于对LPS诱导的B淋巴细胞增殖的抑制作用；明显增强NK细胞对PC-3癌细胞的杀伤活性；（3）马胎盘水溶性蛋白预先作用皮肤成纤维细胞24h，对H2O2造成的细胞氧化损伤有明显的保护作用，明显提高细胞活力，降低细胞内MDA含量，提高SOD和GPx酶活力，降低细胞凋亡率，减少DNA损伤降解。结论：（1）通过提取验证试验表明马胎盘水溶性蛋白最佳提取工艺基本稳定、可行；（2）马胎盘水溶性蛋白可能具有一定的免疫调节作用；（3）马胎盘水溶性蛋白对皮肤成纤维细胞的氧化损伤具有一定的保护作用。
巴达马其其格[8]2008年在《鹿胎盘生物活性多肽的制备及其免疫活性研究》文中认为本研究的目的就是从鹿胎盘中提取出鹿胎盘生物活性肽,并测定其理化性质和免疫活性,看其与人胎盘肽的活性是否一致,从而可为鹿胎盘肽的深入研究,以及今后将鹿胎盘肽用于治疗人或动物疾病方面提供一定的依据。从而探索出一种新型的免疫调节剂,充分利用鹿胎盘等鹿副产品。结果如下:1.实验结果证明,利用低温酶解超滤法制备的鹿胎盘肽为无色或微带黄色的透明液体,具有可透析性,可超滤性。2.MALDI-TOF MS质谱分析和加脲Tricine-SDS-PAGE电泳结果显示,鹿胎盘混合多肽的相对分子量小于2763,与人胎盘肽的分子量范围相符合(人胎盘肽分子量范围为2500～5000Da)。3.利用MTT法淋巴细胞转化实验测定了所提取鹿胎盘肽的免疫调节作用,实验结果表明,鹿胎盘肽可使小鼠处于抑制状态的淋巴细胞的转化率提高,但不能使其恢复到正常水平。4.制备的鹿胎盘肽能显着促进大鼠神经原细胞的生长。
李小梅[9]2016年在《猪胎盘肽冻干粉的制备及功效考察》文中研究指明猪胎盘(Pig Placenta)是富含多种生物活性成分的优质动物药资源,具有调节内分泌、增强免疫力、防治阿尔兹海默症、抗氧化、增强记忆力等功效,但目前常被废弃,有关猪胎盘的研究鲜见报道。本实验以猪胎盘为原料,利用组织匀浆、反复冻融相结合的方法提取猪胎盘肽,优化猪胎盘肽冻干粉制备工艺及功效评价,旨在为猪胎盘肽的充分合理利用提供科学依据。具体研究内容如下：1.猪胎盘肽的提取和分析利用组织匀浆、反复冻融相结合的方法提取猪胎盘成分,并鉴别其基本性质,采用SDS-PAGE电泳方法鉴别猪胎盘肽,建立RP-HPLC色谱条件分析猪胎盘提取物。实验结果为猪胎盘提取液为微黄色透明液体,其pH为6.70；电泳结果：猪胎盘提取液含有相对分子量为74.4 kDa,61.16 kDa,43.39 kDa,14.52 kDa分子肽；提取液多肽含量为6.050 mg.ml-1;在200-600 nm范围内在260.5 nm处有最大吸收峰。RP-HPLC色谱条件：色谱柱：Symmetry C18(5μm,4.6×250mm)；流动相：60%乙腈-水,梯度洗脱：乙腈：0-15min 10%～20%,15～20 min 20%～25%;柱温：25℃；流速：0.5 ml.min-l;检测波长：260.5 nm;进样量：10μl,RP-HPLC分析呈现12个峰,初步认定含有人血白蛋白、免疫球蛋白、免疫调节因子、羊胎盘肽等功效成分。2.猪胎盘肽冻干粉的制备及稳定性考察以外观、复水性、多肽含量为考察指标,通过单因素考察,确定最佳冻干保护剂为4%蔗糖,冻干时间为30 h,药液体积为3 m1。以多肽含量为考察指标,对冻干保护剂浓度、冻干时间、药液体积叁种因素进行星点设计-响应面法优化工艺,确定对猪胎盘肽多肽含量影响程度大小顺序为药液体积>蔗糖浓度>冻干时间,最佳工艺为4.35%蔗糖、冻干时间为30 h、药液体积为3.41 ml,此时多肽含量最大,为6.05016 mg.ml-1。经稳定性实验,猪胎盘肽冻干粉在高温高湿和光照条件下不稳定,所以要密封干燥低温避光保存。3.猪胎盘肽功效考察测定猪胎盘肽冻干粉体外清除DPPH·自由基、超氧阴离子自由基(O2-)、羟基自由基(·OH-)的活性,结果表明猪胎盘肽冻干粉具有清除DPPH·、O2-、·OH-活性,且清除自由基活性与维生素C清除自由基活性相当。猪胎盘肽冻干粉作用于经过D-半乳糖诱导的衰老小鼠,给药后每周末称量小鼠体重；停药前一周采用Morris水迷宫法检测小鼠学习记忆能力。第六周末处死小鼠,以皮肤含水率及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的含量为考察指标,并观察病理切片。结果表明：与正常组相比,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长,小鼠在平台象限内停留时间、停留时间百分比、穿越平台次数均减少(P<0.05)；小鼠体重、皮肤含水率、SOD含量、Hyp含量降低(P<0.01,P<0.05),MDA含量升高(P<0.01,P<0.05),病理检查结果为皮肤表皮不规则,真皮皱缩,胶原纤维排列紊乱；猪胎盘肽经皮给药后,与模型组相比,高、中剂量组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),高剂量组小鼠在平台象限内停留时间、停留时间百分比、穿越平台次数均增高(P<0.05)；高、中剂量组小鼠体重、皮肤含水率、SOD含量、Hyp含量均明显上升(P<0.01,P<0.05),MDA含量明显下降(P<0.01,P<0.05)；病理检查结果为猪胎盘肽高、中剂量组小鼠的皮肤结构较完整,表皮规则,真皮厚度增加,胶原纤维排列较整齐。
高垚垚[10]2018年在《猪胎盘抗衰老药效物质基础及相关作用机制研究》文中提出人胎盘是一种具有补肾益精、补血益气等功效的传统中药,但猪胎盘的相关研究却鲜有报道。猪为哺乳动物,猪胎盘容易获得,功效与人胎盘应具有相似和可比性。本实验对猪胎盘进行药效物质基础研究,以组织冻融法提取猪胎盘蛋白(Pig Placenta Protein,PPP)并制备其凝胶剂(Pig placenta protein gel,PPPG),考察其基本性质及功效,为猪胎盘的废物利用提供依据。主要研究内容及结果如下:1猪胎盘蛋白的提取及成分研究新鲜的猪胎盘组织先用机械粉碎法粉碎,再经冻融、匀浆、过滤得到PPP,冻干保存。测定其总蛋白含量,并采用薄层色谱(TLC)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)等分析方法对PPP的组成成分进行分析。结果表明:得到的PPP为浅黄色的透明溶液,冻干粉为乳白色絮状粉末;TLC 检测出 7 个斑点,Rf值分别为 0.06、0.08、0.23、0.27、0.34、0.47、0.54;紫外波谱扫描图谱显示其最大吸收波长为260 nm;微量元素分析结果为:PPP溶液中含有丰富的Ca、P、K、Mg、Zn、Fe等人体不可缺少的营养元素;红外光谱扫描结果显示其在3400 cm-1和1630 cm-1附近都有明显的振动峰;SDS-PAGE得到7个电泳条带,经MALDI-TOF MS鉴定,按照分子量从大到小的顺序依次为:葡萄糖调节蛋白78、热休克蛋白8、蛋白质二硫键异构酶A3前体蛋白、脯氨酰4-羟化酶β多肽、β细胞骨架肌动蛋白片段、醛糖还原酶、β血红蛋白亚基。2猪胎盘蛋白对小鼠体内DA含量的影响将正常小鼠和D-半乳糖诱导衰老的小鼠按不同剂量的PPP(高浓度:1g·kg-1·d-1,中浓度:0.5g·kg-1·d-1,低浓度:0.25g·kg-1·d-1)灌胃给药,给药35天后,通过脑组织和血液同步采样的方法,结合酶联免疫分析(ELISA)法检测各组小鼠脑组织和血液中多巴胺(DA)含量,考察其对体内DA能神经元的影响。实验数据表明:正常小鼠阳性对照组、PPP高、中、低浓度组的脑组织内DA水平与正常小鼠空白组比较分别显着增加了 58.0%(p<0.01),59.0%(p><0.01),37.6%(p<0.01)和30.2%(p<0.05);衰老小鼠的体内DA含量明显降低,阳性对照组、PPP高、中、低浓度组的脑组织内DA水平与模型组比较分别显着升高了 95.5%(p<0.01),101.3%(p<0.01),79%(p<0.01)和 67.1%(p<0.01)。正常小鼠阳性对照组、PPP 高、中、低浓度组的血液中DA含量与正常小鼠空白组比较分别增加11.9%(p<0.05),10.5%(p<0.05),6.2%(p>0.05)和3.2%(p>0.05);衰老小鼠阳性对照组、PPP高、中、低浓度组小鼠的血液中DA含量与模型组比较分别增加了 30.1%(p<0.01),15.7%(p<0.05),8.8%(p<0.05)和 5.5%(p>0.05)。3猪胎盘蛋白凝胶剂的制备及其功效考察将12 g盐酸化壳聚糖加到25 mL纯化水中,溶胀溶解形成凝胶液;向132 g PPP冻干粉中加入25 mL纯化水形成溶解液;凝胶液和溶解液合并均质2 min,加入6g甘油再均质2 min即得PPP凝胶剂。测定PPP凝胶的粘度、pH、总蛋白浓度等指标,扫描电子显微镜(SEM)观察凝胶剂的结构。将PPP凝胶涂抹于D-半乳糖诱导衰老的小鼠和深Ⅱ度烫伤的大鼠皮肤,给药35天后,通过HE染色法考察PPP凝胶对各组动物皮肤组织中表皮形态和厚度的影响,同时采用RT-PCR检测皮肤组织中Ⅰ型前胶原mRNA的表达水平。结果表明:制备的PPP凝胶为均匀、细腻的黄色半固体物质,粘度为(4.5±0.1)Pa-s、pH为6.6～6.9,总蛋白含量为5%,易涂布、易清洗,符合凝胶制剂要求。皮肤组织切片表明PPP凝胶能使衰老和烫伤动物的整体及创伤处皮肤表皮厚度增加;RT-PCR显示PPP凝胶剂组的动物皮肤组织中I型前胶原mRNA表达均明显升高(p<0.05)。本实验提取和鉴定了猪胎盘中可增强细胞活力和人体免疫功能的蛋白类物质,确认其与猪胎盘提取物明显的抗氧化抗衰老作用相关,显示其在保健和医药领域的应用价值和应用前景,值得借鉴。
参考文献：
[1]. 冻干羊胎免疫调节因子及其稳定性初步研究[D]. 李莉. 西南农业大学. 2003
[2]. 低分子量羊胎免疫调节因子质量标准的初步研究[D]. 刘宇. 西南师范大学. 2003
[3]. 羊胎盘免疫调节因子免疫生物活性评价的初步研究[D]. 高利臣. 西南师范大学. 2004
[4]. 奶山羊胎盘肽的分离提纯及其对小白鼠免疫功能的影响[D]. 马兴亮. 山东农业大学. 2008
[5]. 山羊胎盘肽的分离和初步鉴定及营养、免疫、抗氧化作用的研究[D]. 王炳祥. 山东农业大学. 2011
[6]. 羊胎盘保健品的制备及主要功效研究[D]. 谷玉. 安徽农业大学. 2007
[7]. 马胎盘水溶性蛋白提取工艺及其保健功能研究[D]. 王晓然. 新疆医科大学. 2013
[8]. 鹿胎盘生物活性多肽的制备及其免疫活性研究[D]. 巴达马其其格. 内蒙古农业大学. 2008
[9]. 猪胎盘肽冻干粉的制备及功效考察[D]. 李小梅. 扬州大学. 2016
[10]. 猪胎盘抗衰老药效物质基础及相关作用机制研究[D]. 高垚垚. 扬州大学. 2018
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