Bst DNA聚合酶的纯化及等温扩增检测体系的构建

论文摘要

Bst DNA聚合酶是等温扩增反应中的一个关键酶,但由于专利限制,目前国内实验室所使用的Bst DNA聚合酶大多需要从国外进口,价格昂贵且长途运输影响酶活性,因此亟需自主生产出Bst DNA聚合酶应用于等温扩增检测技术.通过构建Bst Fragement的原核表达质粒,采用原核蛋白表达系统和His-Tag亲和纯化手段,制备成本低,活性高,特异性强的Bst DNA聚合酶.同时,针对特定的模板,对自制Bst DNA聚合酶的扩增反应进行了进一步优化,用不同的产物鉴定方法对扩增效果进行检测,并最终筛选出该酶最优的扩增反应条件为60 mM K+、30 mM（NH4）2SO4、pH为9.0.最后,验证了Bst DNA聚合酶能用于快速准确检测肺炎支原体、肺炎衣原体,降低了相关病原体核酸检测的成本,为之后核酸检测在基层医疗的更广泛应用提供了条件.

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类型: 期刊论文

作者: 谭拥军,吴莎莎,谭桂湘,向勤

关键词: 聚合酶,重组蛋白,扩增,核酸检测

来源: 湖南大学学报(自然科学版) 2019年12期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 湖南大学生物学院

基金: 国家自然科学基金资助项目(81472718)~~

分类号: Q78

DOI: 10.16339/j.cnki.hdxbzkb.2019.12.014

页码: 98-106

总页数: 9

文件大小: 2038K

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相关论文文献

• [1].Bst DNA聚合酶大片段在全基因组扩增中的应用[J]. 中国生物工程杂志 2016(07)
• [2].一种DNA扩增的新技术:利用热稳定的Bst DNA聚合酶驱动跨越式滚环等温扩增反应[J]. 中国生物化学与分子生物学报 2013(09)

标签：聚合酶论文;  重组蛋白论文;  扩增论文;  核酸检测论文;