猪流行性腹泻病毒IgA抗体间接ELISA方法的建立

论文摘要

为建立检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）血清特异性IgA抗体的间接ELISA方法,本研究利用融合PCR的方法,将PEDV G2型LNct2a株S蛋白的S1基因片段与人源IgG分子的Fc基因片段融合,克隆于真核表达质粒pAAV-IRES-hr GFP中,构建真核表达质粒pAAV-LNCT2-S1-Fc并转染293T细胞,表达并纯化了S1蛋白。以纯化的S1蛋白作为包被抗原,以羊抗猪IgA-HRP为二抗,通过优化反应条件,建立了检测PEDV G2型特异性IgA抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行了特异性、敏感性及重复性试验。特异性试验结果显示该方法对猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、猪德尔塔冠状病毒和圆环病毒的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示该方法能够检测出400倍稀释的阳性血清;批内和批间重复性变异系数均小于10%。利用该间接ELISA方法和间接免疫荧光方法（IFA）同时对临床样品检测,结果显示二者总符合率为98.6%。本研究建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,能够用于检测及评价血清中PEDV特异性IgA抗体的水平,为PEDV流行情况及免疫效果评价提供了有效的手段。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘烨,张家林,王潇博,石达,时洪艳,陈建飞,张鑫,冯力

关键词: 间接,蛋白,抗体

来源: 中国预防兽医学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

基金: 国家重点研发计划(2016YFD0500103),中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(Y2017CG13),国家自然科学基金(31602072,31572541),黑龙江省自然科学基金(C2017079),中国博士后科学基金(2017M610136)

分类号: S852.651

页码: 918-923

总页数: 6

文件大小: 1535K

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