导读:本文包含了粘附耐药论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:多发性骨髓瘤,DTX3L,粘附,药物抵抗
粘附耐药论文文献综述
沈耀东[1]（2018）在《DTX3L对多发性骨髓瘤细胞增殖，粘附和耐药的影响》一文中研究指出目的揭示DTX3L在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞粘附过程中的作用机制,并探索DTX3L在MM细胞对蛋白酶体抑制剂(Proteasome inhibitor,PI)硼替佐米(Bortezomib,Bort)的耐药过程中发挥的作用。为提高多发性骨髓瘤治疗疗效、改善预后方面提供新的理论依据。方法1.使用无血清培养液养多发性骨髓瘤细胞72h后,换用含血清培养液培养骨髓瘤细胞48h。细胞增殖过程中,蛋白免疫印迹检测DTX3L,增殖相关蛋白PCNA,CDK2及细胞周期蛋白cyclinE的表达。同时,通过流式检测细胞周期的改变。2.在骨髓瘤细胞中干扰DTX3L的表达,Western Blot检测增殖相关蛋白PCNA,CDK2及细胞周期蛋白cyclinE的表达,CCK-8检测细胞活力,流式检测细胞周期的分布。3.将骨髓瘤细胞RPMI 8226和NCI-H929与骨髓基质细胞HS-5或者纤连蛋白(Fibronection,FN)共培养构建粘附模型。Western Blot检测DTX3L在骨髓瘤细胞悬浮及黏附两种状态下的表达情况;在骨髓瘤细胞中干扰DTX3L的表达,钙黄绿素实验检测DTX3L表达降低后对骨髓瘤细胞粘附率的影响。4.在粘附的骨髓瘤细胞中干扰DTX3L的表达,用化疗药物硼替佐米处理后,通过Western Blot检测凋亡相关蛋白caspase3和PARP的表达,并用流式检测细胞的凋亡情况。5.干扰骨髓瘤细胞DTX3L的表达,Western Blot检测ERK,p-AKT,FAK,AKT和p-ERK的表达。结果1.DTX3L,PCNA,CDK2,cyclinE的表达在细胞增殖过程中不断增高;细胞周期G1期分布逐渐降低,S期分布逐渐增加。2.在骨髓瘤细胞中干扰DTX3L的表达后,PCNA,CDK2,cyclinE的表达减少。同时,流式检测细胞周期中G1期增加。并且CCK8检测表明,干扰DTX3L表达后,细胞生长缓慢。3.骨髓瘤细胞粘附培养后,DTX3L表达增高。钙黄绿素实验显示,干扰DTX3L的表达后,骨髓瘤细胞的粘附率降低。4.硼替佐米刺激干扰DTX3L表达后的粘附的骨髓瘤细胞,凋亡相关蛋白caspase3和PARP的表达增加。流式检测细胞的凋亡比例增高。5.骨髓瘤细胞粘附后,FAK和AKT信号通路的表达增高。用硼替佐米刺激后:干扰DTX3L表达后,FAK和AKT信号通路的表达均减少。结论1.DTX3L的高表达与多发性骨髓瘤细胞增殖密切相关。2.干扰DTX3L的表达可以抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖。3.DTX3L的高表达能够促进多发性骨髓瘤细胞的粘附。4.干扰DTX3L的表达可以降低细胞粘附介导的药物抵抗。5.DTX3L在多发性骨髓瘤细胞发生CAM-DR的过程中的表达被FAK信号通路上调,并可以通过上调AKT信号通路来发挥作用。(本文来源于《南通大学》期刊2018-03-15）
欧阳玉[2]（2017）在《整合素β1与TUBA1A的相互作用在非霍奇金淋巴瘤细胞粘附介导耐药中的作用机制研究》一文中研究指出目的研究探讨整合素β1与微管蛋白alpha 1A(tubulin alpha 1A,TUBA1A)的相互作用在非霍奇金淋巴瘤细胞粘附介导的耐药(Cell adhesion mediated drug resistance,CAM-DR)中的机制及意义。方法1、构建人淋巴瘤细胞OCI-Ly8及Raji与人骨髓基质细胞HS-5或纤连蛋白(Fibronectin,FN)粘附模型,钙黄绿素实验检测细胞的粘附情况蛋白免疫印迹(Western Blot)检测整合素β1蛋白及TUBA1A的表达。利用干扰质粒沉默整合素β1的表达,CCK-8细胞活力实验、流式细胞术等实验检测其表达水平改变对淋巴瘤细胞活性、细胞周期、细胞凋亡的影响。2、在工具细胞HEK 293T中分别转染HA标签的整合素β1和Flag标签的TUBA1A的真核表达质粒,细胞免疫共沉淀实验明确整合素β1与TUBA1A的相互作用。构建整合素β1截短突变体,免疫共沉淀实验明确整合素β1与TUBA1A相互作用的结构域。在人淋巴瘤细胞OCI-Ly8及Raji内验证两者相互作用。3、过表达整合素β1后,沉默TUBA1A的表达,检测其相互作用变化。干扰两者相互作用,钙黄绿素实验分析整合素β1与TUBA1A相互作用对淋巴瘤细胞粘附能力的影响。同时,流式细胞术、细胞活力实验及Western Blot等实验进一步明确相互作用对淋巴瘤细胞CAM-DR的影响。4、干扰TUBA1A的表达,检测整合素β1与TUBA1A的相互作用变化,并检测其对整合素β1下游通路活性的影响;钙黄绿素实验检测其对整合素β1胞膜表达水平、及细胞粘附的影响。结果1、利用FN或HS-5构建淋巴瘤细胞黏附培养模型,实验结果显示微管蛋白TUBA1A及整合素β1蛋白在淋巴瘤细胞粘附培养时表达较悬浮培养增加。在淋巴瘤细胞中干扰整合素β1表达,钙黄绿素实验结果显示淋巴瘤细胞与基质细胞发生粘附的数量下降;利用多柔比星诱导淋巴瘤细胞凋亡,整合素β1的表达下降可以增加粘附状态下淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性,并使其细胞活力降低。2、免疫共沉淀实验结果显示,在工具细胞HEK-293T细胞中,整合素β1和TUBA1A存在明显的相互作用;并且,在淋巴瘤细胞中也发现了整合素β1和TUBA1A明显的相互作用,粘附培养的淋巴瘤细胞中两者相互作用有所增加。结构域分析实验发现,整合素β1通过其胞膜内段结构域与TUBA1A发生相互作用。3、在淋巴瘤细胞中过表达整合素β1,实验结果显示其与TUBA1A相互作用增加。沉默TUBA1A的表达后,发现其相互作用水平也随之下降。干扰整合素β1与TUBA1A的相互作用,细胞活性实验结果显示淋巴瘤细胞粘附能力下降,流式细胞术实验结果显示细胞凋亡数量增加,淋巴瘤细胞对化疗药物敏感性增加。4、在淋巴瘤细胞中干扰TUBA1A表达,整合素β1的胞膜表达下降,并且整合素β1下游通路活性降低。淋巴瘤细胞粘附能力及耐药能力均发生显着下降。TUBA1A表达下降可通过调节整合素β1下游通路活性抑制淋巴瘤细胞粘附及耐药。结论1、整合素β1和微管蛋白TUBA1A均可促进非霍奇金淋巴瘤细胞与基质细胞粘附、诱导淋巴瘤细胞粘附介导的耐药形成;2、在非霍奇金淋巴瘤细胞中,整合素β1和微管蛋白TUBA1A能够发生相互作用;3、整合素β1促进淋巴瘤细胞粘附及粘附介导的耐药进程,其可通过干预微管蛋白TUBA1A的表达抑制其生物学效应;4、微管蛋白TUBA1A促进整合素β1的胞膜聚集,并通过调节整合素β1下游信号通路影响非霍奇金淋巴瘤细胞微环境介导的耐药形成的。(本文来源于《南通大学》期刊2017-03-15）
耿健[3]（2016）在《β-内酰胺类抗生素耐药对化脓隐秘杆菌NanH表达量及粘附性的影响》一文中研究指出化脓隐秘杆菌是一种革兰氏阳性棒状杆菌,可引起多种动物的化脓性感染,给养殖业带来严重的经济损失。目前,常使用抗菌药物来治疗化脓隐秘杆菌所致的感染,但是随着抗菌药物特别是β-内酰胺类抗生素的广泛应用,关于化脓隐秘杆菌分离株耐药性的报道也越来越多。细菌耐药性的产生不仅使抗菌药物的治疗效果下降,还可能引起细菌毒力因子及致病性的改变。化脓隐秘杆菌具有多种毒力因子,其中神经氨酸酶NanH是其重要毒力因子之一,主要在化脓隐秘杆菌感染动物的过程中起到粘附宿主细胞的作用。本文通过检测对β-内酰胺类抗生素不同耐药表型的化脓隐秘杆菌分离株之间NanH的表达量及对Hela细胞的粘附性的差异,分析β-内酰胺类抗生素的耐药对化脓隐秘杆菌NanH表达量、细胞粘附能力的影响,将为深入研究化脓隐秘杆菌的致病机理奠定基础。本试验构建了化脓隐秘杆菌nanH基因的原核表达质粒pEASY-E1-nanH,在大肠杆菌中获得可溶性表达；利用Ni-NTA方法将表达蛋白纯化,以纯化后的His-NanH重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗化脓隐秘杆菌NanH多克隆抗体。所制备的多克隆抗体与天然化脓隐秘杆菌NanH具有良好的反应性,抗体效价达到1：1280000。利用Western-blot技术检测化脓隐秘杆菌分离株NanH的表达量,并与标准株NanH表达量进行比对。结果表明,对p-内酰胺类抗生素耐药表型不同的12株化脓隐秘杆菌NanH表达量存在一定的差异,其中2株分离株NanH表达量极显着高于标准株,7株极显着低于标准株,1株显着低于标准株,2株差异性不显着。NanH表达量最高的分离株是RY04-2,表达量高达标准株的4.03倍。分离株TEW01的NanH表达量最低,仅为标准株的1/12.5。结合12株化脓隐秘杆菌分离株对β-内酰胺类抗生素耐药情况分析,结果显示,化脓隐秘杆菌分离株NanH表达量随着p-内酰胺类耐药性的增加呈增加趋势。细胞粘附试验表明,NanH表达水平极显着高于标准株的2株分离株对Hela细胞的粘附性也极显着高于标准株。在表达量较低的4株分离株中,对Hela细胞的粘附性也最低,说明化脓隐秘杆菌对Hela细胞的粘附性随着NanH表达量增加呈增强的趋势。并且结合12株化脓隐秘杆菌分离株对p-内酰胺类抗生素耐药情况分析,耐3种或4种药物的分离株,对Hela细胞的粘附性显着高于标准株,且高于大部分对2种或者2种以下药物耐药的分离株。表明化脓隐秘杆菌NanH的表达量和粘附性随化脓隐秘杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药性的增强而呈增加的趋势。本研究成功制备了兔抗化脓隐秘杆菌NanH多克隆抗体,并检测了化脓隐秘杆菌分离株NanH表达量及对Hela细胞的粘附作用,进一步揭示了化脓隐秘杆菌NanH的表达量和粘附性随化脓隐秘杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药性的增强而呈增加的趋势。本研究为深入探讨化脓隐秘杆菌的致病机理,有效防治化脓隐秘杆菌感染性疾病奠定了基础。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2016-06-01）
田鹏鹏,田甜,魏运梅,李琦,范文[4]（2013）在《凝固酶阴性葡萄球菌耐药基因和粘附基因检测及耐药性分析》一文中研究指出目的了解凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)耐药基因和粘附基因的分布及其耐药性情况。方法收集45株凝固酶阴性葡萄球菌临床分离株,采用PCR检测其耐药基因mecA和粘附基因clfA、fnbpB,并分析其耐药性。结果 (1)凝固酶阴性葡萄球菌中mecA、clfA、fnbpB的阳性率依次为86.7%(39/45)、11.1%(5/45)、71.1%(32/45)。(2)凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCoNS)的检出率为88.9%,对β-内酰胺类抗生素的耐药率都在80%以上,对利福平、左氧氟沙星、林可霉素的耐药率较低,未发现对万古霉素、利奈唑胺耐药菌株。结论 CoNS中MRCoNS检出率很高,对常用抗生素耐药率高,且有一定的粘附能力,临床上应该根据药敏试验结果慎重及合理的使用抗生素。(本文来源于《中国微生态学杂志》期刊2013年11期）
汤静[5]（2012）在《白血病化疗耐药接触耐药模型和粘附耐药模型的建立及机制初步探讨》一文中研究指出【目的】收集骨髓标本，检测其中的Fn表达情况；以急性淋巴系白血病细胞系Jurkat为研究对象，部分模拟急性淋巴细胞白血病的骨髓微环境，观察Jurkat在与骨髓基质细胞MSCs作用后，对化疗药物吡柔比星药物敏感性的改变，研究白血病骨髓微环境介导化疗耐药的部分机制。【方法】收集骨髓标本，检测不同病例骨髓液标本上清中Fn水平的高低；使用CCK-8的方法检测单独培养的Jurkat细胞对化疗药物吡柔比星的药物敏感性；体外建立急性淋巴系白血病细胞系Jurkat与骨髓基质细胞MSCs共培养接触耐药模型；体外建立Jurkat细胞与Fn作用的粘附耐药模型；使用CCK-8和流式细胞仪的方法分别检测Jurkat细胞在MSCs共培养接触耐药模型、Fn粘附耐药模型、Jurkat细胞单独培养模型中的Jurkat细胞对化疗药物吡柔比星在相同药物浓度作用下细胞凋亡情况的改变；使用流式细胞仪检测Jurkat细胞在MSCs接触耐药模型和Fn粘附耐药模型中细胞周期阻滞的改变；使用ELISA检测在MSCs共培养接触耐药模型中Fn表达水平的高低。【结果】与正常人相比较，血液肿瘤患者的骨髓标本上清中所分泌的Fn水平明显的升高，其结果有统计学意义；ELISA检测在Jurkat细胞与MSCs共培养的接触耐药模型中收集的上清中存在Fn；在与骨髓基质细胞MSCs共培养接触耐药模型中，Jurkat细胞在相同浓度化疗药物吡柔比星作用下，在同一时间点上，细胞凋亡数目较单独培养组有明显下降，结果具有统计学意义；在Fn作用的粘附模型中，Jurkat细胞在同一时间点上，对化疗药物吡柔比星在相同药物浓度作用下细胞凋亡数目较单独培养组也有明显下降，结果具有统计学意义；Jurkat细胞在MSCs和Fn作用下，细胞出现明显的周期阻滞，有统计学意义。【结论】血液肿瘤病人与正常人相比，骨髓中可分泌更高水平的Fn；骨髓基质细胞MSCs能分泌Fn，并可能通过Fn的作用，使细胞凋亡减少，并诱导发生G1期阻滞。(本文来源于《华中科技大学》期刊2012-05-01）
陆春雷,吴国忠,尹天泉,同李平,丰帆[6]（2009）在《细胞粘附在结肠癌细胞系SW480多药耐药表型中的作用》一文中研究指出目的探讨细胞粘附在结肠癌细胞系SW 480多药耐药表型中的作用。方法通过细胞粘附实验、四甲基偶氮唑盐实验(MTT法)、细胞内阿霉素的蓄积和潴留及Annexin V/PI染色法检测凋亡等检测粘附于层粘连蛋白(LN)的结肠癌细胞系SW 480的多药耐药性的改变。结果粘附于LN的SW 480细胞对化疗药物敏感性显着下降,化疗药物的IC50均显着升高,化疗药物诱导的凋亡指数明显减少;细胞内阿霉素的蓄积和潴留均明显减少,药物泵出率显着增加(P<0.05)。结论结肠癌细胞SW 480与LN粘附后,可能提高了对药物转运的能力,导致化疗药物在肿瘤细胞内蓄积的减少;通过提高抗凋亡的能力,逃避化疗药物诱导的凋亡。(本文来源于《东南国防医药》期刊2009年06期）
陆春雷[7]（2009）在《人67kDa层粘连蛋白受体（67LR）在粘附介导结肠癌细胞系SW480多药耐药中的作用及其分子机制》一文中研究指出肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)现象是导致化疗失败的主要原因。国内外已在细胞膜、细胞质和细胞核中发现了多种MDR相关分子并推测相应的分子机制,但是并不能完全解释肿瘤的MDR现象。肿瘤细胞与细胞外基质的粘附可以导致耐药,并将这种形式的耐药称为细胞粘附介导的耐药(cell adhesion mediated drug resistance,CAM-DR)。研究发现,人67kDa层粘连蛋白受体(human 67kDa laminin receptor,67LR)介导的结肠癌细胞与细胞外基质成分层粘连蛋白(laminin,LN)的粘附与肿瘤的多种生物学行为密切相关。本研究旨在研究67LR介导结肠癌细胞与细胞外基质成分LN粘附对于其药物敏感性的影响,并深入探讨67LR作为粘附分子参与结肠癌CAM-DR的分子机制,将有助于全面理解结肠癌MDR的发生和调节机制。目的:研究粘附状态下结肠癌细胞SW480对于多种化疗药物的耐受性,并初步探讨其耐药机制;以67LR表达下调的结肠癌细胞亚系为模型,在67LR与其特异性配体LN相互识别介导SW480细胞粘附的状态下,深入探讨67LR的功能及其介导结肠癌细胞CAM-DR的分子机制,将有助于全面理解结肠癌MDR的发生和调节机制。方法:第一部分:1.通过细胞粘附实验研究结肠癌细胞SW480与细胞外基质重要组分LN及阴性对照成分牛血清白蛋白(BSA)粘附能力的差别;2.通过MTT比色法检测粘附于LN以及BSA的结肠癌细胞SW480对于化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)和顺铂(DDP)的药物敏感性;3.借助流式细胞仪(FCM)检测粘附于LN以及BSA的SW480细胞内阿霉素的蓄积和潴留,并计算相应的药物泵出率;4.通过Annexin V/PI染色法检测粘附于LN以及BSA的结肠癌细胞SW480在化疗药物诱导下的凋亡,并计算相应凋亡指数。第二部分:构建67LR的siRNA载体并转染SW480细胞,筛选并建立67LR表达下调的SW480转染细胞亚系。第叁部分:1.通过细胞粘附实验检测结肠癌细胞稳定转染亚系SW480-si67LR及其对照细胞与LN以及BSA的粘附能力的差别;2.通过MTT比色法检测粘附于LN以及BSA的结肠癌细胞稳定转染亚系SW480-si67LR及其对照细胞对于化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)和顺铂(DDP)的药物敏感性;3.通过Annexin V/PI染色法检测粘附于LN以及BSA的结肠癌细胞稳定转染亚系SW480-si67LR及其对照细胞在化疗药物诱导下的凋亡,并计算相应凋亡指数;4.通过Western Blot检测粘附于LN以及BSA的结肠癌细胞稳定转染亚系SW480-si67LR及其对照细胞中凋亡信号途径相关蛋白FAK的总蛋白及磷酸化蛋白、Bcl-2和Bax的表达。结果:第一部分:1.在单位时间内,LN组中结肠癌细胞SW480的粘附细胞数均明显高于BSA组(p<0.05);2.与粘附于BSA的结肠癌细胞SW480相比,粘附于LN的SW480细胞的化疗药物敏感性显着下降,对于化疗药物的IC50均相应显着升高,化疗药物诱导的凋亡指数明显减少;细胞内阿霉素的蓄积和潴留均明显减少,药物泵出率显着增加(p<0.05)。第二部分:成功筛选并建立67LR表达下调的SW480转染细胞亚系。第叁部分:1.在单位时间内,LN组和BSA组内67LR表达水平下调的结肠癌转染细胞SW480-si67LR的粘附细胞数均明显低于其对照细胞(p<0.05);2.与LN粘附后,在结肠癌转染细胞SW480-si67LR及其对照细胞中均检测到磷酸化FAK的不同程度的表达,其中SW480-si67LR中磷酸化FAK的表达水平表达明显下调,其相对表达率具有显着的统计学差异(p<0.05);3.与对照成分BSA粘附后,在结肠癌转染细胞SW480-si67LR及其对照细胞中均检测不到磷酸化FAK的不同程度的表达;4.与LN及其对照成分BSA粘附后,SW480-si67LR及其对照细胞中总FAK的表达无统计学差异(p<0.05);5.在与LN粘附条件下,与其对照细胞相比67LR表达水平下调的结肠癌转染细胞SW480-si67LR的化疗药物敏感性显着上升,对于化疗药物的IC50相应显着下降,化疗药物诱导的凋亡指数明显增加;细胞内Bcl-2的表达显着降低,Bax表达显着增强(p<0.05)。结论:1.与细胞外基质成分LN粘附后,结肠癌细胞可能通过以下两种途径增强自身的多药耐药性:i.提高肿瘤细胞对药物转运的能力,导致化疗药物在肿瘤细胞内蓄积的减少;ii.提高抗凋亡的能力,导致逃避对化疗药物诱导的凋亡;2. 67LR与结肠癌细胞的粘附能力密切相关,下调67LR的表达水平,结肠癌细胞的粘附能力显着减弱;3.当结肠癌细胞SW480膜表面的67LR与其特异性配体LN(细胞外基质成分)相互识别而介导细胞粘附后,可能通过诱导细胞内FAK的磷酸化而激活凋亡相关通路,从而能够上调Bcl-2及下调Bax的表达水平,从而抑制了化疗药物诱导的粘附状态下结肠癌细胞的凋亡。(本文来源于《第四军医大学》期刊2009-04-01）
潘春武,沈周俊,唐小莹,王旻,鲍坚强[8]（2008）在《纤维连接蛋白介导的膀胱癌粘附耐药传导通路的研究》一文中研究指出目的:阐明纤维连接蛋白(FN)介导的膀胱癌细胞粘附耐药机制中的AKT/PKB信号传导通路。方法:将膀胱移行细胞癌细胞株(T24)分别接种于无FN包被(A、B组)及FN包被(C、D组)的孔板中,A组为空白对照,B、C、D组分别与丝裂霉素(MMC)作用,其中D组在MMC作用予以整合素连接激酶(ILK)特异性阻断(本文来源于《第十五届全国泌尿外科学术会议论文集》期刊2008-09-01）
潘春武,沈周俊,唐小莹,王旻,鲍坚强[9]（2008）在《纤维连接蛋白介导的膀胱癌粘附耐药AKT/PKB信号传导通路的研究》一文中研究指出目的:阐明纤维连接蛋白(FN)介导的膀胱癌细胞粘附耐药机制中的AKT/PKB信号传导通路。方法:将膀胱移行细胞癌细胞株(T24)分别接种于无FN包被(A、B组)及FN包被(C、D组)的孔板中,A组为空白对照,B、C、D组分别与丝裂霉素(MMC)作用,其中D组在MMC作用予以整合素连接激酶(ILK)特异性阻断(本文来源于《第十五届全国泌尿外科学术会议论文集》期刊2008-09-01）
王琦侠,陈协群,潘耀柱,高广勋,顾宏涛[10]（2007）在《Velcade联用阿霉素对骨髓瘤细胞的体外协同作用及对细胞粘附诱导耐药的逆转》一文中研究指出目的：研究蛋白酶体抑制剂 Velcade 联合阿霉素(Adr)对骨髓瘤(MM)RPMI8226细胞的协同作用及 Velcade 对 MM 细胞粘附诱导的耐药 (CAM-DR)逆转作用及其机理。(本文来源于《第11次中国实验血液学会议论文汇编》期刊2007-11-01）
粘附耐药论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究探讨整合素β1与微管蛋白alpha 1A(tubulin alpha 1A,TUBA1A)的相互作用在非霍奇金淋巴瘤细胞粘附介导的耐药(Cell adhesion mediated drug resistance,CAM-DR)中的机制及意义。方法1、构建人淋巴瘤细胞OCI-Ly8及Raji与人骨髓基质细胞HS-5或纤连蛋白(Fibronectin,FN)粘附模型,钙黄绿素实验检测细胞的粘附情况蛋白免疫印迹(Western Blot)检测整合素β1蛋白及TUBA1A的表达。利用干扰质粒沉默整合素β1的表达,CCK-8细胞活力实验、流式细胞术等实验检测其表达水平改变对淋巴瘤细胞活性、细胞周期、细胞凋亡的影响。2、在工具细胞HEK 293T中分别转染HA标签的整合素β1和Flag标签的TUBA1A的真核表达质粒,细胞免疫共沉淀实验明确整合素β1与TUBA1A的相互作用。构建整合素β1截短突变体,免疫共沉淀实验明确整合素β1与TUBA1A相互作用的结构域。在人淋巴瘤细胞OCI-Ly8及Raji内验证两者相互作用。3、过表达整合素β1后,沉默TUBA1A的表达,检测其相互作用变化。干扰两者相互作用,钙黄绿素实验分析整合素β1与TUBA1A相互作用对淋巴瘤细胞粘附能力的影响。同时,流式细胞术、细胞活力实验及Western Blot等实验进一步明确相互作用对淋巴瘤细胞CAM-DR的影响。4、干扰TUBA1A的表达,检测整合素β1与TUBA1A的相互作用变化,并检测其对整合素β1下游通路活性的影响;钙黄绿素实验检测其对整合素β1胞膜表达水平、及细胞粘附的影响。结果1、利用FN或HS-5构建淋巴瘤细胞黏附培养模型,实验结果显示微管蛋白TUBA1A及整合素β1蛋白在淋巴瘤细胞粘附培养时表达较悬浮培养增加。在淋巴瘤细胞中干扰整合素β1表达,钙黄绿素实验结果显示淋巴瘤细胞与基质细胞发生粘附的数量下降;利用多柔比星诱导淋巴瘤细胞凋亡,整合素β1的表达下降可以增加粘附状态下淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性,并使其细胞活力降低。2、免疫共沉淀实验结果显示,在工具细胞HEK-293T细胞中,整合素β1和TUBA1A存在明显的相互作用;并且,在淋巴瘤细胞中也发现了整合素β1和TUBA1A明显的相互作用,粘附培养的淋巴瘤细胞中两者相互作用有所增加。结构域分析实验发现,整合素β1通过其胞膜内段结构域与TUBA1A发生相互作用。3、在淋巴瘤细胞中过表达整合素β1,实验结果显示其与TUBA1A相互作用增加。沉默TUBA1A的表达后,发现其相互作用水平也随之下降。干扰整合素β1与TUBA1A的相互作用,细胞活性实验结果显示淋巴瘤细胞粘附能力下降,流式细胞术实验结果显示细胞凋亡数量增加,淋巴瘤细胞对化疗药物敏感性增加。4、在淋巴瘤细胞中干扰TUBA1A表达,整合素β1的胞膜表达下降,并且整合素β1下游通路活性降低。淋巴瘤细胞粘附能力及耐药能力均发生显着下降。TUBA1A表达下降可通过调节整合素β1下游通路活性抑制淋巴瘤细胞粘附及耐药。结论1、整合素β1和微管蛋白TUBA1A均可促进非霍奇金淋巴瘤细胞与基质细胞粘附、诱导淋巴瘤细胞粘附介导的耐药形成;2、在非霍奇金淋巴瘤细胞中,整合素β1和微管蛋白TUBA1A能够发生相互作用;3、整合素β1促进淋巴瘤细胞粘附及粘附介导的耐药进程,其可通过干预微管蛋白TUBA1A的表达抑制其生物学效应;4、微管蛋白TUBA1A促进整合素β1的胞膜聚集,并通过调节整合素β1下游信号通路影响非霍奇金淋巴瘤细胞微环境介导的耐药形成的。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
粘附耐药论文参考文献
[1].沈耀东.DTX3L对多发性骨髓瘤细胞增殖，粘附和耐药的影响[D].南通大学.2018
[2].欧阳玉.整合素β1与TUBA1A的相互作用在非霍奇金淋巴瘤细胞粘附介导耐药中的作用机制研究[D].南通大学.2017
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