Sh-PLCε提高IL-2治疗肾癌疗效的研究

Sh-PLCε提高IL-2治疗肾癌疗效的研究

论文摘要

该实验旨在探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cε(phospholipase Cε, PLCε)是否在白介素2(interleukin 2, IL-2)治疗肾癌的过程中发挥一定的作用。采用sh-PLCε慢病毒转染肾癌细胞株786-o。MTT法检测IL-2处理肾癌细胞最适浓度,使用最适浓度IL-2处理细胞。流式细胞术检测细胞凋亡。DAPI染色观察细胞中凋亡小体。q-PCR、Western blot检测Fas/FasL以及Fas下游相关分子在基因水平以及蛋白水平的表达变化。将肿瘤细胞与淋巴细胞进行共培养,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显示,敲低PLCε后, Fas/FasL表达降低,而IL-2处理后,会逆转这种效果。检测Fas下游相关通路后发现, IL-2处理阴性对照(negative control, NC)组后, Fas下游凋亡抑制信号通路FADD/cFlip/Traf2启动, IL-2处理sh-PLCε组后, Fas下游凋亡信号通路FADD/Caspase8/Caspase3启动。共培养实验后流式细胞术结果显示, IL-2处理与sh-PLCε联用组细胞凋亡比例最高。该实验证明, sh-PLCε可以通过启动Fas下游凋亡信号通路,抑制凋亡抑制信号通路来提高IL-2治疗肾癌的疗效。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 细胞株
  •   1.2 慢病毒
  •   1.3 主要试剂
  •   1.4 实验方法
  •     1.4.1 细胞培养
  •     1.4.2 转染sh-PLCε,筛选稳定细胞株
  •     1.4.3 MTT检测IL-2处理细胞的最适浓度
  •     1.4.4实时定量PCR(q-PCR)
  •     1.4.5 Western blot检测细胞中相关蛋白质水平
  •     1.4.6 肿瘤细胞与淋巴细胞共培养
  •     1.4.7 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 肾癌细胞株786-o中PLCε呈现高表达状态
  •   2.2 转染sh-PLCε慢病毒下调786-o细胞中PLCε的表达
  •   2.3 转染sh-PLCε慢病毒后细胞凋亡水平增加
  •   2.4 敲减PLCε后,Fas/FasL表达水平下降
  •   2.5 敲减PLCε后,细胞凋亡信号增强,凋亡抑制信号减弱
  •   2.6 MTT法检测IL-2处理细胞的最适条件
  •   2.7 加入IL-2后Fas、Fasl表达增高
  •   2.8 加入IL-2后,影响Fas/FasL下游分子的表达
  •   2.9 淋巴细胞与786-o细胞共培养后,细胞凋亡比例增加
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 杨锦潇,段李梅,范佳鑫,李婷,范砚茹,袁鸿玲,吴小侯,罗春丽

    关键词: 肾癌,细胞凋亡,免疫逃逸

    来源: 中国细胞生物学学报 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 泌尿科学,肿瘤学

    单位: 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆医科大学附属第一医院泌尿外科

    基金: 国家自然科学基金(批准号:81072086)资助的课题~~

    分类号: R737.11

    页码: 2351-2359

    总页数: 9

    文件大小: 3226K

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