嗜热芽胞杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草芽胞杆菌中的表达

论文摘要

【目的】构建分泌表达α-环糊精葡萄糖基转移酶（α-CGTase）的重组枯草芽胞杆菌,实现α-CGTase的安全高效表达。【方法】通过PCR法扩增嗜热地芽胞杆菌α-CGTase基因,运用EcoRI/Xho I分别对α-CGTase基因及pBES进行双酶切,然后将该基因片段插入到大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭载体pBES中,再电转化法转化枯草芽胞杆菌RIK1285;对重组枯草芽胞杆菌B.subtilis RIK1285/pBE-CGT发酵条件进行探索。【结果】（1）利用发酵培养基分泌表达α-CGTase,重组枯草芽胞杆菌工程菌B.subtilis RIK1285/pBE-CGT发酵上清液产酶达到2.9U·mL-1。（2）TB为最适发酵培养基（配方:甘油0.5%,蛋白胨1.2%,酵母粉2.4%,K2HPO41.64%,KH2PO40.23%）;在初始pH 6.5,温度为37℃下,摇瓶发酵培养24h后,α-环糊精酶的环化活性达到5.3U·mL-1,是野生菌株嗜热地芽胞杆菌(0.66U·mL-1)的8倍。【结论】成功构建了枯草芽胞杆菌B.subtilis RIK1285/pBE-CGT工程菌,并确定其最适发酵培养基和培养条件。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈龙军,林陈强,张慧,贾宪波,方宇,陈济琛

关键词: 枯草杆菌工程菌,环糊精葡萄糖基转移酶,表达,优化

来源: 福建农业学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,一般化学工业

单位: 福建省农业科学院土壤肥料研究所

基金: 福建省自然科学基金项目(2017J01056),福建省科技计划项目——省属公益类科研院所基本科研专项(2018R1022-7,2017R1022-2),国家重点研发计划项目(2018YFD0200706),福建省农业科学院探索创新项目(AA2018-13)

分类号: Q78;TQ920.6

DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.05.014

页码: 600-605

总页数: 6

文件大小: 227K

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