克隆和定位论文_齐彤辉,高萌,袁阳阳,李明军,马锋旺

导读:本文包含了克隆和定位论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,激酶,细胞,信息学,醛酸,沧江,植物。

克隆和定位论文文献综述

齐彤辉,高萌,袁阳阳,李明军,马锋旺^[1]（2019）在《苹果酸度相关基因MdPH1的克隆、表达及亚细胞定位分析》一文中研究指出以苹果属(Malus)植物沧江海棠(M. ombrophila Hand.-Mazz)的果实为材料,对其发育过程中苹果酸的含量进行测定,并结合转录组测序的方法筛选控制果实酸度的候选基因。结果显示:MdPH1候选基因的编码区包含2829 bp,编码942个氨基酸;基因组序列全长为4269 bp,包含8个外显子和7个内含子。对10份苹果种质资源中PH1基因序列的分析结果表明,该基因序列中存在22个单核苷酸多态性(SNP),其中13个位于内含子区,9个位于外显子区;位于最后一个外显子上SNP(G/A)的变异导致了编码氨基酸从缬氨酸变为异亮氨酸。MdPH1蛋白包含8个跨膜结构域,其中蛋白N端包含3个跨膜结构域,C端包含5个跨膜结构域。系统进化分析结果显示,苹果中的PH家族成员与梨(Pyrus communis L.)中的PH家族成员聚集成一簇。组织特异性表达结果发现,MdPH1基因在苹果果实中的表达量最高,其次是叶、花和根,茎中表达量最低。亚细胞定位分析表明MdPH1蛋白定位于液泡膜上。(本文来源于《植物科学学报》期刊2019年06期）

欧阳梦真,朱磊,孙治强,李胜利,吴帼秀^[2]（2019）在《西瓜ClWRKY54基因的克隆、亚细胞定位及表达分析》一文中研究指出WRKY转录因子是植物中所特有的一类转录因子,以基因家族形式存在,并在植物的生长发育和逆境响应等过程中发挥重要的作用。采用RT-PCR的方法从西瓜中分离得到一条西瓜CIRKY54基因。序列分析表明,该基因开放阅读框全长1 428 bp,编码475个氨基酸。其编码蛋白分子量约为51.82 KD,等电点为6.17。该基因蛋白序列中包含2个WRKY保守结构域,锌指结构为C2H2型,属于典型的1类WRKY基因。进化树分析显示,该基因蛋白序列同葫芦科作物中的甜瓜、黄瓜、西葫芦等的WRKY26具有较高的同源性,处于同一分支上。亚细胞定位分析显示,该基因编码蛋白定位于细胞核中。对该基因进行荧光定量PCR分析研究其表达特性,结果显示该基因在西瓜根、茎、叶中均有表达,但是在叶片中表达量最高;H_2O_2可以诱导该基因的表达,而乙烯处理可以抑制该基因的表达,这说明该基因可能参与逆境下H_2O_2和乙烯所介导的信号途径。在模拟干旱下,该基因表达无变化,说明该基因同干旱胁迫抗性不相关。本研究的结果将为进一步的解析ClWRKY54的功能奠定基础。(本文来源于《中国瓜菜》期刊2019年12期）

胡东杰,张欣欣^[3]（2019）在《水稻转录因子OsNAC52、OsMYB340和OsSNAC3基因克隆、表达与定位分析》一文中研究指出转录因子对于植物抵抗逆境胁迫具有重要的作用。为了研究水稻(Oryza sativa)转录因子Os NAC52、Os MYB340和Os SNAC3对逆境胁迫的应答反应,本研究从水稻日本晴cDNA文库中PCR扩增得到OsNAC52、OsMYB340和OsSNAC3基因。利用Real-time PCR技术分析OsNAC52、OsMYB340和OsSNAC3基因250 mmol/L NaCl和42℃胁迫下的表达特性。通过构建瞬时表达载体并利用基因枪转化技术将重组的OsNAC52、OsMYB340和OsSNAC3基因导入洋葱表皮细胞中,分析3个转录因子在细胞内的定位,为后续研究Os NAC52、Os MYB340和Os SNAC3蛋白提供理论依据。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年10期）

邵盈,张艳芳,赵令敏,敖兰吉亚,霍秀文^[4]（2019）在《山药V-ATPase B2亚基基因的克隆、表达分析及亚细胞定位》一文中研究指出ATP合成酶(V-ATPase)催化能源物质ATP的合成,从而保证细胞各项生命活动的能量供应。目前对山药(Dioscoreaopposita)生长发育相关差异表达基因的研究鲜有报道。本研究中通过分析ATP酶、V-ATPaseB2亚基基因对山药块茎膨大的影响,为进一步解析山药生长发育的分子调节机制提供试验依据与线索,并为山药块茎膨大提供候选基因。试验材料为毕克齐山药和大和长芋山药。在呼和浩特地区山药块茎在播后90 d左右开始膨大。在块茎膨大期间,每隔15d取1次样,即播后的105、120、135、150和165d进行取样,分别采集叶、茎和块茎。两个品种各选取3株作为生物学重复。使用RACE技术克隆了V-ATPase B2亚基基因的cDNA全长;对其开放阅读框进行了生物信息学分析;克隆其gDNA;使用农杆菌介导法注射烟草叶片进行V-ATPase B2蛋白的亚细胞定位;对ATPase活性和V-ATPase B2亚基基因进行表达模式分析。通过全长克隆得到山药V-ATPase B2亚基基因的cDNA全长为1 874 bp,编码488个氨基酸,基因登录号为MK858181。该基因编码蛋白的理论分子量为54289.76,等电点为5.08;分子式为C2404H3824N654O741S17,总原子数为7640,亲水性的平均值为–0.268。通过gDNA的克隆,得到V-ATPase B2的编码区分为14个外显子,15个内含子。同源序列进化分析表明,山药与凤梨的亲缘关系最近。亚细胞定位表明山药V-ATPase B2蛋白定位于细胞质。通过ATP酶活性的测定与实时荧光定量PCR分析,得到两品种山药的ATPase活性和V-ATPaseB2相对表达量同时达到最高值。在山药块茎膨大中前期二者极显着正相关,而在成熟收获时则为极显着负相关,相关系数为–0.963(P<0.01)。说明V-ATPaseB2的表达水平影响着ATPase的活性。ATPase活性在叶中最高,而V-ATPase B2在块茎中表达量最高。从广义上讲,V-ATPase B2在山药块茎膨大过程中发挥着一定的作用,可进一步为山药生长发育提供候选基因。(本文来源于《中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集》期刊2019-10-21）

王冕,张朝昕,陈娜,陈明娜,禹山林^[5]（2019）在《花生AhMKK4基因的克隆、表达分析和亚细胞定位研究》一文中研究指出为挖掘花生抗逆相关基因,本研究以花生品种花育20号为试验材料,根据cDNA文库中已知的促丝裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)基因EST序列设计引物,通过RACE-PCR克隆得到AhMKK4基因。结果表明,AhMKK4基因序列全长1 434 bp,含有3′非编码区151 bp,5′非编码区317 bp,开放阅读框全长966 bp,编码一条含有322个氨基酸的蛋白序列。预测其分子量为36.74 kDa,属于MAPKK基因家族D组成员。亚细胞定位显示AhMKK4基因定位于细胞质和细胞核中。RT-qPCR分析发现,AhMKK4基因在根中表达量高于其他组织,说明该基因具有组织表达特异性;AhMKK4基因受JA和IAA诱导时表达量上调,受SA和ABA诱导时表达量下调,说明该基因可能参与到JA和IAA介导的信号转导途径;AhMKK4在盐胁迫下表达量上调,说明该基因可能参与花生对盐胁迫的适应性调控。本研究结果为花生抗逆育种研究提供了新的基因资源。(本文来源于《核农学报》期刊2019年12期）

葛廷,黄雪,谢让金^[6]（2019）在《柑橘CitPG34的克隆、定位与表达分析》一文中研究指出【目的】多聚半乳糖醛酸酶是一类参与细胞壁降解的水解酶,在植物生长发育和器官脱落过程中发挥着重要作用。本研究克隆柑橘CitPG34及其启动子(CitPG34-P)并进行表达分析,为深入研究柑橘PG在幼果脱落过程的生物功能奠定基础。【方法】以‘塔罗科’血橙(Citrus sinensis L. Osbeck)为材料,克隆CitPG34及其启动子,利用ProtParam、Cello、CLUSTALX、MEGA5.2、PlantCARE等软件对其蛋白特性及启动子顺式作用元件进行分析预测;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析CitPG34在不同组织以及柑橘幼果脱落过程中的表达水平。采用同源重组的方法构建pCAMBIA1302-CitPG34-GFP融合蛋白表达载体和CitPG34启动子表达载体(CitPG34-P::gus),分别用于亚细胞定位和启动子活性分析。【结果】从‘塔罗科’血橙幼果离层中克隆获得CitPG34,其ORF为1 194 bp,编码397个氨基酸,预测蛋白分子量为41.47 kD,理论等电点为5.19,其不稳定系数为30.23,表明CitPG34属于稳定蛋白;通过在线软件TMHMM分析发现:CitPG34为跨膜蛋白,具有一个跨膜结构,位于第7—29位氨基酸之间。在CitPG34二级结构中,α-螺旋结构约占15.37%,扩展链约占29.72%,无规则卷曲约占54.91%,与其叁级结构预测基本一致。NJ树分析显示CitPG34与西洋梨PcPG3(BAF42034)亲缘关系最近,表明CitPG34可能与果实脱落和软化相关。qRT-PCR分析表明,CitPG34在花中表达量最高,在根、叶、离层A、离层C中表达量较低,在幼果中几乎不表达。1-氨基环丙烷羧酸(ACC)处理果梗后能显着提高离层A中CitPG34的表达水平,相反IAA抑制其转录。此外,在柑橘幼果正常脱落过程中,CitPG34表达明显升高。亚细胞定位发现,CitPG34主要位于细胞壁。克隆获取CitPG34起始密码子(ATG)前2 075 bp启动子序列(CitPG34-P),PlantCare预测发现,在CitPG34-P序列上存在多种顺式调控元件,如核心启动元件TATA-box、增强子元件CAAT-box以及脱落酸响应元件ABRE等。将CitPG34-P::gus转入烟草,通过GUS组织化学染色发现,该启动子受乙烯诱导,主要在叶脉和毛状体中表达。【结论】CitPG34的ORF长度为1 194 bp,可编码397个氨基酸,其蛋白主要位于细胞壁;该基因具有明显的组织特异性,在花中表达最高;CitPG34表达量与柑橘幼果脱落显着相关。上述结果表明,CitPG34在柑橘幼果脱落和花发育过程中可能发挥着重要的生物功能。(本文来源于《中国农业科学》期刊2019年19期）

王俊皓,谢五洋,徐华祥,袁学顺,周莹^[7]（2019）在《大豆GmAAP基因的克隆、生物信息学分析及亚细胞定位》一文中研究指出本研究以大豆Williams 82为实验材料,采用RT-PCR技术克隆到了GmAAP基因,其开放阅读框长度为1440 bp,编码479个氨基酸。生物信息学分析表明,GmAAP蛋白分子量为53.286 kD,理论等电点为8.93,不稳定指数为34.04,属于稳定的蛋白结构;其二级结构中α-螺旋、β-折迭、β-转角、无规卷曲分别占据47.18%、15.66%、2.71%、34.45%;跨膜区与疏水性分析显示其含有10个跨膜区,且构成跨膜区的氨基酸多为疏水性氨基酸;GmAAP与野生大豆AAP6亲缘关系最为相近,且序列比对的一致性为100%,可能为大豆AAP6基因。构建融合表达载体,利用PEG-Ca~(2+)介导法转化拟南芥原生质体进行亚细胞定位分析,结果显示GmAAP定位在质膜上。AAP能提高豆科植物对外源氮的吸收与利用率,进而增加种子内贮藏蛋白含量,提升大豆品质。本研究的结果可为GmAAP功能的进一步研究奠定基础,同时也为氮素的高效利用提供候选基因。(本文来源于《中国油料作物学报》期刊2019年05期）

王志刚,刘士力,李贤露,吕卓云,毛丽盈^[8]（2019）在《翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALDO-C)基因定位、克隆及表达分析》一文中研究指出翘嘴红鲌(Erythroculterilishaeformis)是大型淡水鱼类鳊鲌亚科(Abramidinae)中最大的一种鱼,具有较高的经济价值。但其饲料转化率及抗病性研究相对较少,相关基因信息缺乏。本研究以翘嘴红鲌为对象,利用RACE技术克隆翘嘴红鲌果糖-1.6-二磷酸醛缩酶(ALDO-C)基因,该基因cDNA全长1945bp,其中ORF区975bp,编码325个氨基酸.5′非编码区933bp.3′非编码区37bp。通过实时荧光定量PCR检测了ALDO-C在不同组织中相对表达水平。发现ALDO-C基因在翘嘴红鲌的肾、肝、肌肉、性腺中均有表达,且在肾中表达量最高,显着高于其他组织。同时采用石蜡切片、H.E染色和原位杂交染色,观察分析翘嘴红鲌的肾组织显微结构和ALDO-C基因的表达定位,结果表明,ALDO-C在鱼类肾单位和集合管结构、调节肾组织水平衡及抗病性方面有重要作用。可以考虑将翘嘴红鲌醛缩酶C基因作为生长发育及抗病性相关的候选基因,用于翘嘴红鲌鱼的分子辅助育种,以期为今后的研究提供理论基础。(本文来源于《海洋与湖沼》期刊2019年05期）

卢瑶,胡金雪,金鑫,陈越,陈勤^[9]（2019）在《马铃薯StPSKRs基因的克隆及其亚细胞定位分析》一文中研究指出该研究采用同源克隆与PCR扩增方法,从马铃薯品种‘Desiree’中克隆植物磺肽素受体基因StPSKR1和StPSKR2的全长cDNA,并对其进行生物信息学分析及亚细胞定位分析,为深入研究StPSKR1和StPSKR2基因在马铃薯生长发育和生物胁迫中的作用提供理论依据。结果发现:(1)通过同源克隆与PCR扩增获得StPSKR1和StPSKR2的全长cDNA片段,并将其克隆到pGWB5-GFP载体;测序结果显示这2个基因编码的蛋白质与数据库给定的蛋白质序列保持一致,表明成功克隆到StPSKR1和StPSKR2基因。(2)StPSKR1位于马铃薯1号染色体上,cDNA全长3 042 bp,编码1 013个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为112.16 kD,理论等电点6.27;StPSKR2位于7号染色体,cDNA全长3 135 bp,编码1 044个氨基酸,相对分子量为114.99 kD,理论等电点6.19。(3)生物信息学分析显示,StPSKR1和StPSKR2都属于跨膜蛋白。(4)亚细胞定位结果显示,StPSKR1和StPSKR2均定位于细胞膜上。(本文来源于《西北植物学报》期刊2019年09期）

岳茂兰,江雷雨,刘怡,李栎,刘勇强^[10]（2019）在《草莓FaWRKY31的克隆、亚细胞定位及表达特性分析》一文中研究指出为明确草莓FaWRKY31的序列特征、表达特性和亚细胞定位情况,通过同源克隆的方法从八倍体草莓‘红颜’中得到3条长度为1 644 bp、1条长度为1 669 bp的cDNA序列和两条长度约为2 000bp的启动子序列。生物信息学分析表明:长度为1669bp的FaWRKY31-like因插入了一段25bp的短序列导致开放阅读框提前终止,缺失了WRKY结构域和C2H2锌指结构。启动子的序列分析结果表明:FaWRKY31与森林草莓FvWRKY31的启动子序列存在较大差异,相似性仅为70%,FaWRKY31的启动子序列发生了多个片段的缺失和插入,可能导致其与森林草莓FvWRKY31有不同的诱导特性。qRT-PCR结果表明:FaWRKY31在草莓的根、茎、叶、花及果实中均有表达,根中的表达量最高,全红期果实中的最低。FaWRKY31能同时响应红光和蓝光的调控,抑制其在草莓果实中的表达。此外,FaWRKY31能在不同程度上响应低钾、低磷、低温、ABA、盐害、干旱这6种非生物胁迫,且低温、ABA及干旱都显着抑制FaWRKY31的表达。亚细胞定位结果显示FaWRKY31蛋白定位于细胞核内。(本文来源于《园艺学报》期刊2019年10期）

克隆和定位论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

WRKY转录因子是植物中所特有的一类转录因子,以基因家族形式存在,并在植物的生长发育和逆境响应等过程中发挥重要的作用。采用RT-PCR的方法从西瓜中分离得到一条西瓜CIRKY54基因。序列分析表明,该基因开放阅读框全长1 428 bp,编码475个氨基酸。其编码蛋白分子量约为51.82 KD,等电点为6.17。该基因蛋白序列中包含2个WRKY保守结构域,锌指结构为C2H2型,属于典型的1类WRKY基因。进化树分析显示,该基因蛋白序列同葫芦科作物中的甜瓜、黄瓜、西葫芦等的WRKY26具有较高的同源性,处于同一分支上。亚细胞定位分析显示,该基因编码蛋白定位于细胞核中。对该基因进行荧光定量PCR分析研究其表达特性,结果显示该基因在西瓜根、茎、叶中均有表达,但是在叶片中表达量最高;H_2O_2可以诱导该基因的表达,而乙烯处理可以抑制该基因的表达,这说明该基因可能参与逆境下H_2O_2和乙烯所介导的信号途径。在模拟干旱下,该基因表达无变化,说明该基因同干旱胁迫抗性不相关。本研究的结果将为进一步的解析ClWRKY54的功能奠定基础。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

克隆和定位论文参考文献

[1].齐彤辉,高萌,袁阳阳,李明军,马锋旺.苹果酸度相关基因MdPH1的克隆、表达及亚细胞定位分析[J].植物科学学报.2019

[2].欧阳梦真,朱磊,孙治强,李胜利,吴帼秀.西瓜ClWRKY54基因的克隆、亚细胞定位及表达分析[J].中国瓜菜.2019

[3].胡东杰,张欣欣.水稻转录因子OsNAC52、OsMYB340和OsSNAC3基因克隆、表达与定位分析[J].基因组学与应用生物学.2019

[4].邵盈,张艳芳,赵令敏,敖兰吉亚,霍秀文.山药V-ATPaseB2亚基基因的克隆、表达分析及亚细胞定位[C].中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集.2019

[5].王冕,张朝昕,陈娜,陈明娜,禹山林.花生AhMKK4基因的克隆、表达分析和亚细胞定位研究[J].核农学报.2019

[6].葛廷,黄雪,谢让金.柑橘CitPG34的克隆、定位与表达分析[J].中国农业科学.2019

[7].王俊皓,谢五洋,徐华祥,袁学顺,周莹.大豆GmAAP基因的克隆、生物信息学分析及亚细胞定位[J].中国油料作物学报.2019

[8].王志刚,刘士力,李贤露,吕卓云,毛丽盈.翘嘴红鲌(Erythroculterilishaeformis)果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALDO-C)基因定位、克隆及表达分析[J].海洋与湖沼.2019

[9].卢瑶,胡金雪,金鑫,陈越,陈勤.马铃薯StPSKRs基因的克隆及其亚细胞定位分析[J].西北植物学报.2019

[10].岳茂兰,江雷雨,刘怡,李栎,刘勇强.草莓FaWRKY31的克隆、亚细胞定位及表达特性分析[J].园艺学报.2019

论文知识图

标签：基因论文;  激酶论文;  细胞论文;  信息学论文;  醛酸论文;  沧江论文;  植物论文;