基于qPCR和LAMP技术的马铃薯晚疫病菌快速检测方法

基于qPCR和LAMP技术的马铃薯晚疫病菌快速检测方法

论文摘要

马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)能侵染多种茄科植物,它引起的马铃薯晚疫病,是马铃薯生产中的第一大病害。为了开发能在田间快速检测马铃薯晚疫病病原的方法,利用P. infestans T30-4基因组测序数据的contig 1.18131,设计qPCR和LAMP引物,优化扩增条件后得到引物的特异性和灵敏度,最后通过检测田间收获薯块,比较形态学传统方法、qPCR及LAMP的差异。特异性检测结果发现,qPCR和LAMP仅在含有P. infestans DNA模板的体系有阳性扩增,在寄主和其他微生物DNA中均无扩增;在优化的条件下,qPCR和LAMP的检测下限可达1×10-6ng/μL,在有寄主和其他微生物DNA存在的条件下,引物的灵敏度没有显著差异。利用两种快速方法对在大理、丽江及昆明3个地区田间收获薯块上检测发现,qPCR和LAMP方法得到的检出率差异极为不显著(P=0.420),两种快速检测方法和形态学鉴定方法检出率差异极显著(P=0.009)。在大理、丽江及昆明3个地区的薯块中,两种分子检测方法检出率均比形态学方法高。其中,qPCR检测方法比形态学方法分别提高了12.00%、2.00%、8.70%;LAMP检测方法比形态学方法分别提高了11.30%、2.00%、8.70%。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试验材料
  •   1.2 试验方法
  •     1.2.1 引物设计
  •     1.2.2 DNA提取及病原物种类鉴定
  •     1.2.3 qPCR和LAMP条件的优化
  •     1.2.4 引物特异性检测
  •     1.2.5 引物灵敏度的测定
  •     1.2.6 薯块中P.infestans的检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 晚疫病菌和其他微生物的分离和鉴定
  •   2.2 qPCR引物的特异性和灵敏度
  •   2.3 LAMP引物的特异性和灵敏度
  •   2.4 利用qPCR和LAMP在寄主中检测P.infestans
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 祝菊澧,梁静思,张佩,王伟伟,林桐司骐,谢欣娱,苏瑞,唐唯

    关键词: 定量,环介导等温扩增,马铃薯晚疫病菌,潜伏侵染,检测

    来源: 作物杂志 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技

    专业: 植物保护

    单位: 云南师范大学生命科学学院,云南师范大学马铃薯科学研究院,云南省马铃薯生物学重点实验室

    基金: 国家自然科学基金(31660503),云南师范大学2019年度研究生科研创新基金(ysdy js2019132)

    分类号: S435.32

    DOI: 10.16035/j.issn.1001-7283.2019.06.027

    页码: 168-176

    总页数: 9

    文件大小: 6776K

    下载量: 261

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