导读:本文包含了细胞内玻璃化保存论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:低温,细胞,玻璃化,纳米,速率,凋亡,光热。
细胞内玻璃化保存论文文献综述
Fazil,Hussain,Panhwar[1]（2018）在《基于近红外激光介导的二维纳米片及其在细胞玻璃化保存中的应用》一文中研究指出二维(2D)氧化石墨烯(GO)和二硫化钼(MoS2)纳米片作为良好的光热剂而作为抗肿瘤药物的潜在载体,已被广泛地研究和应用。这两种纳米材料的发展大大促进了诊断治疗、能源转换和水清洁等方面研究的发展。对于它们的空间热效应,已经在生理温度和热疗温度范围内(37-46℃)展开了较为深入的探索。调控这些纳米片的空间热分布,对低温下(-196至37 ℃)的生物材料的微结构控制则有更深远的应用,这些应用包括仿生的冷冻微铸造、食品和药品的冻干和生物材料的低温保存等。然而,GO和MoS2纳米片的热效应在低温下的应用还未被充分探索过。在本研究中,我们利用GO和MoS2纳米片的近红外激光诱导光热效应,来研究其对生物样品在复温过程中抑制冰核形成和冰晶生长的影响。采用此方法,快速的降温到-196 ℃深低温的细胞被成功的回收,有着高存活率和完整的生物学功能。这些纳米片的光热效应从来没有被应用到低温保存中从而获得足够快的升温速度来减少复温过程中的再结晶。为了解决低温保存中的再结晶问题,我们利用了纳米片的光热效应。在研究过程中,我们采用化学合成和水热法分别合成了 GO和MoS2纳米片,利用他们的光热效应成功的实现了人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的复温。针对所采用的808 nm近红外激光,我们自主搭建了一套激光辐射装置来更好地实现激光能量脉冲对实验样品的作用。同时,为了提供对样品冷冻和复温过程的更全面的评估,我们使用有限元方法来研究在水浴复温和激光照射下塑料麦管内细胞样品的传热。实验和模拟结果都表明,细胞悬液中的GO和MoS2纳米片可以显着提高冷冻速率并有效地降低复温过程中的反玻璃化和再结晶。此外,我们还研究了两种纳米片在不同浓度和不同激光辐射能量下对细胞悬液样品保存效果的影响。结果表明,808 nm激光分别作用在0.03%(w/v)的GO和0.06%(w/v)的MoS2浓度下,对细胞玻璃化冷冻保存具有最佳的效果。GO和MoS2纳米片作为光热剂来实现空间上均匀加热是一个有前景的方法来提高很多细胞系的低温保存效果。因此,我们提供了一种基于纳米片光热效应的有效方法来控制玻璃化生物样品在复温过程中的结晶行为,这可能在材料科学和生物工程中具有广泛的应用。(本文来源于《中国科学技术大学》期刊2018-05-03）
朱凯旋[2]（2018）在《基于水凝胶封装的干细胞玻璃化保存和3D培养》一文中研究指出干细胞在生物医学工程中的应用越来越广泛,应对日渐增大的干细胞需求,低温保存干细胞显得尤为重要。传统的慢速冷冻会造成细胞不可避免的损伤,常规的玻璃化保存细胞往往需要高浓度的渗透性低温保护剂,使样品在冷冻过程中完全玻璃化,降复温过程中没有冰晶形成,这样才能确保细胞冷冻复温后有较高的存活率。人们通常为了减少玻璃化保存过程中胞内冰的形成一方面加高渗透性低温保护剂的浓度,另外一方面减小玻璃化保存样品的体积,增加降温和复温过程中的温度变化速率。高浓度(≈8M)、有毒的低温保护剂往往会对细胞造成不可逆的损伤,减小冷冻样品体积往往使冷冻过程变得复杂,增加操作人员的工作量,细胞在冷冻过程的损失率增加。针对目前玻璃化保存存在的问题,本文在损伤机理的研究中,通过冷热台实现5℃/min、10℃/min和15℃/min叁种不同的降温速率,再通过显微镜上摄像机记录下细胞在不同降温速率下体积变化,得到实验数据通过数学公式拟合得到间充质干细胞在冷冻过程中细胞膜对水输运两个重要参数,渗透性系数Lpg和水输运的活化能ELp,并用它设计更好的冷冻方案,从机理上了解冷冻过程中减少细胞的溶液损伤和胞内冰损伤。同时采用20℃/min、30℃/min和60℃/min叁种不同的降温速率测试间充质干细胞在冷冻过程中胞内冰形成的概率,找到合适降温速率,减少冷冻过程中胞内冰对细胞的损伤。本文在玻璃化保存辅助材料上,采用水凝胶来抑制玻璃化冷冻和复温过程中胞内冰的形成,以往水凝胶封装玻璃化保存要求完全玻璃化,因此要求微胶囊直径足够小(直径<250μm)和低温保护剂浓度足够高(≈8M),本文采用核壳结构的大体积水凝胶微胶囊(直径>500μm)装载猪的脂肪干细胞部分玻璃化保存(微胶囊外边有冰晶形成,微胶囊内部由于水凝胶对冰晶抑制作用,无冰晶形成,因此,避免了胞内冰对细胞的损伤),大大提高了封装效率,本研究中的大体积微胶囊可以实现对大体积(十几到几百毫升的样品)细胞悬浮液(在细胞治疗和移植中使用频繁)的快速封装。并使用超低浓度的低温保护剂(≈2 M渗透性低温保护剂加0.5M非渗透性低温保护剂),直接投入到液氮中进行冷冻,冷冻复苏后得到的细胞存活率较高(代替完全玻璃化或者带有可见冰的部分玻璃化)。使用不同组份四组的低温保护剂条件下,水凝胶封装后能够大大提高细胞冷冻后的存活率(四种不同配方的低温保护剂封装后冷冻保存得到的细胞存活率依次为:24%到73%,25%到71%,25%到63%和21%到56%)。本研究表明水凝胶微胶囊在细胞的冷冻和复温过程中能够有效地抑制冰晶的形成和传播。大体积的微胶囊在干细胞的治疗方面存在着很大的潜在的应用价值。本文同时对微胶囊的产生方法上进行改进,与传统的微液滴是通过油相和水相或者水相和油相两相剪切形成的相比,本研究采用叁相全水生物相容性较好的溶剂快速生成海藻酸钠微胶囊的方法,有效的保护细胞活性。本文中的方法相比传统水-水相生成微胶囊的方法,能够灵活对微胶囊的良径、壳核相对厚度进行调节,使用的外围溶液是与细胞相容性较好的水溶性溶液,这使得在交联生成水凝胶微胶囊的过程中细胞或其他生物样品的活性不会受到损伤。封装猪的脂肪干细胞,用于3D培养,由于整个封装和交联过程中,细胞都处于生物相容性较好的溶液中,细胞受到损伤较小,细胞的生长状况良好,细胞在第七天已经生长成团并且没有出现明显的细胞死亡。本文还在大体积微胶囊封装保存干细胞的基础上,把最外层溶液用氯化钙溶液替换油相,生成具有壳核结构的微纤维,进一步提高封装效率,同时微纤维的形状与生物的血管、肌腱和神经比较类似,对更进一步3D培养仿生学有重要的意义。采用微纤维状水凝胶封装猪的脂肪干细胞(pADSCs)悬浮液,且用纱布包裹后直接投入液氮中,实现超低浓度低温保护剂条件下的玻璃化保存。尤其在1M渗透性(0.5M丙二醇和0.5乙二醇)低温保护剂条件下玻璃化保存后存活率超过70%,本方法外层连续相使用了 CaCl2溶液代替以往的油相,避免了从油相中把微纤维分离出来的操作。该研究用微纤维封装细胞,封装效率远远大于微胶囊封装细胞。因为微纤维和微胶囊相比,易于盛放,不需要特殊的冷冻容器盛放,可以直接投入液氮或者液氮蒸汽中玻璃化保存,且直接投放液氮或者液氮蒸汽中,降温速率要远大于用容器盛放的样品的降温速率。(本文来源于《中国科学技术大学》期刊2018-03-01）
牛丹[3]（2016）在《人脐静脉内皮细胞的水凝胶封装玻璃化保存》一文中研究指出低温保存对细胞、组织、器官的长期保存是一种有效的方法,因此被广泛应用于组织工程、再生医学、辅助生殖医学等领域。低温保存主要通过两种方法来实现：慢速降温法和玻璃化保存法。到目前为止,慢速降温法已经相当成熟,并实现了多种生物材料的保存,但是慢速降温法存在一些缺点,比如在降温过程中细胞会遭受溶液损伤、包内冰损伤；在复温过程中,细胞内会出现再结晶现象等。玻璃化保存通过使用较高浓度的低温保护剂和快速降温让溶液形成玻璃态,从而避免细胞内外冰晶的形成。玻璃化保存方法简单、方便、省时,但是高浓度的低温保护剂会对细胞造成渗透损伤和毒性损伤。尽管许多学者采用分步添加和去除保护剂的方法,但是过高浓度的保护剂仍然会对细胞造成损伤。有时低温保护剂在降温的过程中实现了玻璃化,但是如果保护剂浓度不是足够的高,在复温的过程中就会出现反玻璃化现象,这对细胞是致命的损伤,会大大降低细胞的存活率。本文以人脐静脉内皮细胞为研究对象,首先测定细胞的渗透忍受极限和细胞膜的渗透系数。本文利用自行设计的微灌流装置测定了细胞在25、14、5和-20C四个温度下在高渗盐溶液和低温保护剂中细胞的渗透响应,然后利用两参数模型拟合得到细胞膜的渗透系数,再运用Arrhenius关系求出细胞在参考温度下(273.15 K)的渗透系数和活化能。最终结果表明当溶液的渗透压值是155-921 mOsm/kg或归一化细胞体积是0.53-1.39时,细胞体积变化是在安全范围内的。在参考温度下,水的渗透系数和二甲基亚砜的渗透系数分别是0.32×10-14m/Pa/s和0.30 x 10-8 m/s,对应的活化能分别是40.15 kJ/mol和82.47 kJ/mol。最终细胞的渗透忍受极限和细胞膜的渗透系数被用于优化低温保护剂的添加和去除过程。为了解决慢速降温和传统玻璃化保存中的问题,本文使用水凝胶封装玻璃化保存方法,与传统的玻璃化保存方法的实验结果相比,这种方法大大降低了低温保护剂的浓度,尽管在复温的过程中出现了反玻璃化现象,但是它并没有影响细胞的活性,因此水凝胶封装玻璃化保存方法是可行的。(本文来源于《中国科学技术大学》期刊2016-04-13）
李维杰,周新丽,戴建军,张德福,刘宝林[4]（2013）在《羟基磷灰石纳米颗粒对猪MⅡ期卵母细胞玻璃化保存的影响及其机理初探》一文中研究指出纳米低温保存技术很可能是新一代低温保存技术的发展方向,但未见将纳米颗粒应用于卵母细胞玻璃化保存的报道。本文将不同粒径的羟基磷灰石纳米颗粒添加到冷冻保护剂中,使用Cryotop法对第二次减数分裂中期(MⅡ期)的猪卵母细胞进行玻璃化保存,结果表明纳米颗粒的添加提高了猪MⅡ期的卵母细胞的低温保存存活率,但纳米颗粒的粒径影响不显着。采用超快速测温装置测量低温保护剂的降温速率,并采用差示扫描量热仪(DSC)测量冷冻保护剂的熔融焓,发现纳米颗粒的添加并不能加速溶液的降温速率,而是降低了冷冻过程及复温过程中反玻璃化产生的冰晶量,由于冰晶量减少,从而可能降低了细胞内外冰晶对细胞的机械损伤。(本文来源于《生物医学工程学杂志》期刊2013年04期）
李维杰,周新丽,吕福扣,刘宝林[5]（2014）在《纳米低温保护剂提高卵母细胞玻璃化保存效果的机理初探》一文中研究指出纳米颗粒添加到低温保护剂中可能是未来低温保存的重要手段。采用添加了羟基磷灰石(HA)纳米颗粒的低温保护剂冷冻卵母细胞,使用低温显微镜观察了结晶、再结晶和融化时冰晶的形态和细胞的变化,同时记录各现象发生的温度。发现添加0.05%HA组在升温过程中再结晶不明显,且再结晶危险区较小,对细胞无损伤;而未添加HA组细胞在复温过程中受伤几率很高。结果表明纳米颗粒减少了复温过程中的再结晶可能是纳米低温保护剂提高细胞存活率的主要机理之一。(本文来源于《制冷学报》期刊2014年01期）
李维杰[6]（2013）在《卵母细胞玻璃化保存的冷冻及复温过程研究》一文中研究指出卵母细胞的低温保存是指在低温条件下抑制卵母细胞的新陈代谢活动，并使卵母细胞长期保存而不丧失活性的一种保存技术。该技术对于人类的辅助生殖以及动植物优良品种的保存，具有非常重要的作用。但是，目前卵母细胞玻璃化保存的存活率和发育率依然不高，距离临床应用还有一定的距离。本文对卵母细胞玻璃化保存的冷冻和复温过程进行了深入地研究，紧紧抓住提高冷冻过程的冷冻速率和减少复温过程中的再结晶两条主线开展研究，旨在最大限度地减少低温保存过程中冰晶对细胞的伤害，提高卵母细胞的存活率和发育潜能。Cryotop为目前卵母细胞玻璃化保存效果最好的方法，但是其冷冻过程的冷冻速率和复温过程的再结晶都有进一步改进的空间，本文以Cryotop法玻璃化保存卵母细胞，开展了以下研究工作：（1）首先利用数值模拟方法，分析了Cryotop在冷冻过程中的冷冻速率的影响因素。结果发现随着载体厚度的降低，液滴体积减少，冷源温度降低，换热系数增加，Cryotop在冷冻过程中的冷冻速率逐渐增加。当载体厚度为60μm，溶液体底面圆半径为120μm，冷源温度66K，换热系数为15,000W/(m2k)时，冷冻速率最高可以达到172,000K/min。其次使用数字示波器和单根线径25μm的T型热电偶搭建了快速测温系统，实测了液滴为0.5μL时不同厚度塑料（PVC）Cryotop载体的冷冻速率，发现冷冻速率随载体厚度降低而增高，60μm时最高，可达16,000±1,100K/min；100μmPVC在浆态氮中冷冻速率为17,000±1,200K/min，比在普通液氮中高41.7%，100μm铜片载体在普通液氮中冷冻速率可达16,000±1,200K/min，较100μmPVC载体提升33.3%。测量值和模拟值有较大出入，主要是由于液滴大小和换热系数取值不同造成。（2）使用不同厚度的Cryotop载体玻璃化保存猪MⅡ期卵母细胞，60μm和80μm的Cryotop载体得到卵母细胞的存活率分别为71.7±3.5％，69.3±6.5％，与厚度为100μm的标准Cryotop（存活率70.7±4.9％）没有显着性差异；使用标准Cryotop载体分别在-201℃和-207℃的浆态氮条件下冷冻猪MⅡ期卵母细胞，发现两实验组的存活率分别为68.6±8.2%和68.8±2.6%，同在普通液氮的冷冻的对照组（实验结果为69.2±4.0%）没有显着性差异；使用厚度为100μm厚度铜质载体保存GV期小鼠卵母细胞时发现，其存活率仅为15.6±5.0％，远低于相同厚度的标准Cryotop对照组（83.3±3.3%）。（3）使用低温显微镜研究实现了玻璃化的低温保护剂在升温过程中的结晶性质，结果发现升温速率的提高可以减少升温过程中的重结晶现象，缩小危险结晶区域。同时发现，较高浓度的保护剂的结晶形态对于细胞较为安全。将不同浓度的HA纳米颗粒加入到低温保护剂中，使用低温显微镜研究其在升温过程中的结晶性质，结果发现0.05%HA纳米颗粒的低温保护剂在复温过程中可以减少冰晶的重结晶，对细胞不构成威胁，而不添加HA颗粒的低温保护复温过程中会造成重结晶，有较高的几率对细胞构成威胁，添加过量的HA（0.5%），降温过程中就能形成大量冰晶，可能危害细胞安全。使用DSC测量含有0.1%不同粒径的HA纳米颗粒的低温保护剂的结晶量发现， HA颗粒可以使得低温保护剂总结晶量显着降低。（4）采用超声波使二氧化硅（SiO2），羟基磷灰石（HA），叁氧化二铝（Al2O3），二氧化钛（TiO2）纳米颗粒在低温保护剂中分散，分析影响纳米颗粒在低温保护剂中分散效果的影响因素。结果表明:TiO2和Al2O3分散效果较好，HA和SiO2分散效果略差； HA和Al2O3稳定性较差，只能随制随用，SiO2和TiO2稳定性相对较好，适合长期贮存；HA分散性随pH值增大而增大，而TiO2和Al2O3在中性pH条件下分散性最好，SiO2分散性受pH影响不大；HA在低温保护剂浓度为40%时分散效果最好， SiO2、Al2O3在低温保护剂浓度高时分散效果好，TiO2分散性在低温保护剂浓度为80%时最强。（5）将纳米低温保护剂用于卵母细胞的玻璃化保存，分析纳米颗粒的毒性、以及纳米颗粒的种类、粒径、浓度对猪卵母细胞玻璃化保存的存活率和发育潜能的影响。结果表明不同种类的纳米颗粒对细胞的毒性阈值不同，HA浓度低于0.5%时对细胞没有毒性，而SiO2、Al2O3、TiO2在0.1%以下没有毒性；HA纳米颗粒能显着促进玻璃化保存，当浓度为0.1%时，猪GV期卵母细胞发育率可以达到22%；20nm、40mm、60nmHA纳米颗粒均可以提高猪GV期卵母细胞发育率，分别为26.7%、28.7%、28.7%，不同粒径的纳米颗粒保存效果没有显着差异；添加0.01%~0.5%HA均能提高猪GV期卵母细胞发育率，其中添加0.05%HA玻璃化保存效果最好，发育率为30.4%；添加0.1%20nm、40nm、60nm HA纳米颗粒的低温保护剂均能促进猪MⅡ期卵母细胞存活率，结果均高于80%，不同纳米颗粒的保存效果差异不显着。(本文来源于《上海理工大学》期刊2013-04-01）
刘建文,欧云生,蒋电明,赵增辉[7]（2012）在《不同浓度川芎嗪的玻璃化保存液对施万细胞凋亡的作用》一文中研究指出目的探讨不同浓度川芎嗪(TMP)的玻璃化保存液对大鼠施万细胞凋亡及调控基因表达的影响,以便获得川芎嗪的最佳浓度。方法 20只SD大鼠,切取双侧坐骨神经(共40条),将其随机分成A、B、C、D、E组,每组8条,分别用含不同浓度川芎嗪的玻璃化保存液在-20℃保存3周(A组:0mg/L、B组:80mg/L、C组:160mg/L、D组:320mg/L、E组:640mg/L)。3周后取神经进行苏木素-伊红(HE)染色光镜检查;免疫组化法检测Bcl-2、Bax;末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果 D组神经施万细胞凋亡数量明显少于其余各组施万细胞凋亡数量,A组神经施万细胞凋亡数量明显多于其余各组施万细胞凋亡数量;D组Bcl-2的阳性表达率最高,且明显高于其余各组,A组Bcl-2的阳性表达率最低,且明显低于其余各组;D组Bax阳性表达率明显低于其余各组,A组Bax阳性表达率明显高于其余各组。结论川芎嗪能通过调节Bcl-2和Bax的表达而有效抑制施万细胞的凋亡,在-20℃含川芎嗪的玻璃化液保存大鼠坐骨神经,川芎嗪的浓度以320mg/L最佳。(本文来源于《重庆医学》期刊2012年10期）
郝保同,刘宝林,王伯春,戎森杰[8]（2010）在《玻璃化保存后老鼠黏附成骨细胞形态及存活率的实验观测》一文中研究指出利用玻璃化保存方法,在自行设计的细胞渗透性实验台上,实时观察了黏附成骨细胞在高浓度玻璃化保护液中的形态变化.经过七步添加和七步去除95%的VEG玻璃化保护液后,黏附的成骨细胞的形态由细长的纺锤形变为粗短的圆柱形,说明黏附细胞的两端及边缘的黏附点已脱落,但经过3~4 h的培养后,黏附细胞逐渐恢复了原来的形态,表明玻璃化保护液的处理只是改变了细胞的形态,没有造成黏附细胞的脱落和严重损伤.(本文来源于《上海理工大学学报》期刊2010年06期）
徐海峰,刘宝林,高志新[9]（2010）在《细胞及组织的玻璃化保存研究进展》一文中研究指出介绍了玻璃化保存的基础理论及影响玻璃化保存的因素。综述了卵细胞、胚胎、卵巢、组织工程化骨玻璃化保存的研究进展,并提出了玻璃化冻存细胞、组织所存在问题与展望。(本文来源于《低温工程》期刊2010年05期）
蒋电明,刘建文[10]（2009）在《不同温度含川芎嗪的玻璃化保存液对雪旺细胞凋亡及调控基因表达影响的初步实验研究》一文中研究指出目的探讨在不同温度下含川芎嗪的玻璃化保存液对大鼠雪旺细胞凋亡及调控基因表达的影响。方法24只SD大鼠,切取双侧坐骨神经(共48条),将其随机分成2组(每组24条):实验组(含川芎嗪)和对照组(不含川芎嗪)。实验组分为A、B、C、D亚组,对照组分为A′、B′、C′、(本文来源于《第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编》期刊2009-09-25）
细胞内玻璃化保存论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
干细胞在生物医学工程中的应用越来越广泛,应对日渐增大的干细胞需求,低温保存干细胞显得尤为重要。传统的慢速冷冻会造成细胞不可避免的损伤,常规的玻璃化保存细胞往往需要高浓度的渗透性低温保护剂,使样品在冷冻过程中完全玻璃化,降复温过程中没有冰晶形成,这样才能确保细胞冷冻复温后有较高的存活率。人们通常为了减少玻璃化保存过程中胞内冰的形成一方面加高渗透性低温保护剂的浓度,另外一方面减小玻璃化保存样品的体积,增加降温和复温过程中的温度变化速率。高浓度(≈8M)、有毒的低温保护剂往往会对细胞造成不可逆的损伤,减小冷冻样品体积往往使冷冻过程变得复杂,增加操作人员的工作量,细胞在冷冻过程的损失率增加。针对目前玻璃化保存存在的问题,本文在损伤机理的研究中,通过冷热台实现5℃/min、10℃/min和15℃/min叁种不同的降温速率,再通过显微镜上摄像机记录下细胞在不同降温速率下体积变化,得到实验数据通过数学公式拟合得到间充质干细胞在冷冻过程中细胞膜对水输运两个重要参数,渗透性系数Lpg和水输运的活化能ELp,并用它设计更好的冷冻方案,从机理上了解冷冻过程中减少细胞的溶液损伤和胞内冰损伤。同时采用20℃/min、30℃/min和60℃/min叁种不同的降温速率测试间充质干细胞在冷冻过程中胞内冰形成的概率,找到合适降温速率,减少冷冻过程中胞内冰对细胞的损伤。本文在玻璃化保存辅助材料上,采用水凝胶来抑制玻璃化冷冻和复温过程中胞内冰的形成,以往水凝胶封装玻璃化保存要求完全玻璃化,因此要求微胶囊直径足够小(直径<250μm)和低温保护剂浓度足够高(≈8M),本文采用核壳结构的大体积水凝胶微胶囊(直径>500μm)装载猪的脂肪干细胞部分玻璃化保存(微胶囊外边有冰晶形成,微胶囊内部由于水凝胶对冰晶抑制作用,无冰晶形成,因此,避免了胞内冰对细胞的损伤),大大提高了封装效率,本研究中的大体积微胶囊可以实现对大体积(十几到几百毫升的样品)细胞悬浮液(在细胞治疗和移植中使用频繁)的快速封装。并使用超低浓度的低温保护剂(≈2 M渗透性低温保护剂加0.5M非渗透性低温保护剂),直接投入到液氮中进行冷冻,冷冻复苏后得到的细胞存活率较高(代替完全玻璃化或者带有可见冰的部分玻璃化)。使用不同组份四组的低温保护剂条件下,水凝胶封装后能够大大提高细胞冷冻后的存活率(四种不同配方的低温保护剂封装后冷冻保存得到的细胞存活率依次为:24%到73%,25%到71%,25%到63%和21%到56%)。本研究表明水凝胶微胶囊在细胞的冷冻和复温过程中能够有效地抑制冰晶的形成和传播。大体积的微胶囊在干细胞的治疗方面存在着很大的潜在的应用价值。本文同时对微胶囊的产生方法上进行改进,与传统的微液滴是通过油相和水相或者水相和油相两相剪切形成的相比,本研究采用叁相全水生物相容性较好的溶剂快速生成海藻酸钠微胶囊的方法,有效的保护细胞活性。本文中的方法相比传统水-水相生成微胶囊的方法,能够灵活对微胶囊的良径、壳核相对厚度进行调节,使用的外围溶液是与细胞相容性较好的水溶性溶液,这使得在交联生成水凝胶微胶囊的过程中细胞或其他生物样品的活性不会受到损伤。封装猪的脂肪干细胞,用于3D培养,由于整个封装和交联过程中,细胞都处于生物相容性较好的溶液中,细胞受到损伤较小,细胞的生长状况良好,细胞在第七天已经生长成团并且没有出现明显的细胞死亡。本文还在大体积微胶囊封装保存干细胞的基础上,把最外层溶液用氯化钙溶液替换油相,生成具有壳核结构的微纤维,进一步提高封装效率,同时微纤维的形状与生物的血管、肌腱和神经比较类似,对更进一步3D培养仿生学有重要的意义。采用微纤维状水凝胶封装猪的脂肪干细胞(pADSCs)悬浮液,且用纱布包裹后直接投入液氮中,实现超低浓度低温保护剂条件下的玻璃化保存。尤其在1M渗透性(0.5M丙二醇和0.5乙二醇)低温保护剂条件下玻璃化保存后存活率超过70%,本方法外层连续相使用了 CaCl2溶液代替以往的油相,避免了从油相中把微纤维分离出来的操作。该研究用微纤维封装细胞,封装效率远远大于微胶囊封装细胞。因为微纤维和微胶囊相比,易于盛放,不需要特殊的冷冻容器盛放,可以直接投入液氮或者液氮蒸汽中玻璃化保存,且直接投放液氮或者液氮蒸汽中,降温速率要远大于用容器盛放的样品的降温速率。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞内玻璃化保存论文参考文献
[1].Fazil,Hussain,Panhwar.基于近红外激光介导的二维纳米片及其在细胞玻璃化保存中的应用[D].中国科学技术大学.2018
[2].朱凯旋.基于水凝胶封装的干细胞玻璃化保存和3D培养[D].中国科学技术大学.2018
[3].牛丹.人脐静脉内皮细胞的水凝胶封装玻璃化保存[D].中国科学技术大学.2016
[4].李维杰,周新丽,戴建军,张德福,刘宝林.羟基磷灰石纳米颗粒对猪MⅡ期卵母细胞玻璃化保存的影响及其机理初探[J].生物医学工程学杂志.2013
[5].李维杰,周新丽,吕福扣,刘宝林.纳米低温保护剂提高卵母细胞玻璃化保存效果的机理初探[J].制冷学报.2014
[6].李维杰.卵母细胞玻璃化保存的冷冻及复温过程研究[D].上海理工大学.2013
[7].刘建文,欧云生,蒋电明,赵增辉.不同浓度川芎嗪的玻璃化保存液对施万细胞凋亡的作用[J].重庆医学.2012
[8].郝保同,刘宝林,王伯春,戎森杰.玻璃化保存后老鼠黏附成骨细胞形态及存活率的实验观测[J].上海理工大学学报.2010
[9].徐海峰,刘宝林,高志新.细胞及组织的玻璃化保存研究进展[J].低温工程.2010
[10].蒋电明,刘建文.不同温度含川芎嗪的玻璃化保存液对雪旺细胞凋亡及调控基因表达影响的初步实验研究[C].第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编.2009
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