Neuritin条件性基因打靶载体的构建和同源重组胚胎干细胞克隆鉴定

论文摘要

Neuritin（Nrn1）是神经营养因子家族的成员,能够维持神经元的存活和突起的生长,在神经系统发育和再生中起重要作用。为了解Neuritin基因在整体动物水平的系统生物学功能,通过PCR扩增Neuritin基因片段,将该片段用In-fusion无缝克隆技术连接至用限制性内切酶Asc1酶切后线性化的CTVIRES-EGFP质粒,转化至Stellar感受态细胞后,对酶切和测序鉴定正确的阳性克隆子进行大量提取质粒,酶切使之线性化后将其电转导入小鼠胚胎干细胞细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,用PCR方法鉴定出同源重组的ES细胞DNA。结果表明,成功构建了CTV-Nrn1-IRES-EGFP基因打靶载体载体并筛选出阳性同源重组胚胎干细胞,为制备Neuritin条件性基因打靶小鼠模型奠定了实验基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孙筱品,董玉梅,汪海燕,谌容,桂飞,宋晓明,汪朦,杨怡,谭晓华,洪玉,宋杨,黄瑾,杨磊

关键词: 载体构建,基因打靶,胚胎干细胞

来源: 动物医学进展 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 石河子大学,杭州师范大学

基金: 杭州市重大科技创新项目(20152013A01)

分类号: Q78

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.04.003

页码: 16-21

总页数: 6

文件大小: 5507K

下载量: 124

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