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南极假丝酵母脂肪酶B在黑曲霉中的分泌表达及其硅藻土固定化应用

2020-12-02阅读(424)

南极假丝酵母脂肪酶B在黑曲霉中的分泌表达及其硅藻土固定化应用

论文摘要

为提高南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarctica lipase B,CALB）表达量,根据黑曲霉（Aspergillus niger）密码子偏好性设计合成CALB基因,以PnaII/tpi为启动子构建CALB表达载体并转化到黑曲霉HL-1中表达,摇瓶发酵120 h后上清液中重组CALB活力为171 U/mL。研究重组CALB的酶学性质,最适反应温度和pH值分别为50℃和8.0,在pH 6.0～9.0和45℃以下具有较高的稳定性,10 mmol/L Cu2+、Zn2+和0.1 g/100 mL十二烷基硫酸钠强烈抑制酶活力,而1 mmol/L Ca2+、0.1 g/100 mL山梨醇对酶活力具有非常明显的激活作用。此外,以硅藻土为载体固定CALB,固定化酶活力为187 U/g。将制备的硅藻土-CALB固定化酶用于生物合成己酸乙酯,经反应条件优化后在无溶剂体系中己酸乙酯产率达91%。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •     1.1.1 菌株与试剂
  •     1.1.2 培养基
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 方法?
  •     1.3.1 CALB基因的优化、合成与克隆
  •     1.3.2 表达载体pUEV-PnaII/tpi-CALB的构建及黑曲霉HL-1转化
  •     1.3.3 重组工程菌的筛选和表达
  •     1.3.4 酶活力和蛋白含量测定
  •     1.3.5 SDS-PAGE分析和蛋白纯化
  •     1.3.6 酶学性质分析
  •       1.3.6. 1 最适温度和温度稳定性
  •       1.3.6. 2 最适pH值和pH值稳定性
  •       1.3.6. 3 金属离子和表面活性剂对CALB活力的影响
  •     1.3.7 硅藻土固定化酶的制备
  •     1.3.8 固定化酶用于己酸乙酯的合成
  •   1.4 数据统计及图表绘制
  • 2 结果与分析
  •   2.1 表达载体pUEV-PnaII/tpi-CALB的构建
  •   2.2重组工程菌的筛选和表达
  •   2.3 SDS-PAGE分析和重组蛋白纯化
  •   2.4 酶学性质分析
  •     2.4.1 最适温度和热稳定性
  •     2.4.2 最适pH值和pH值稳定性
  •     2.4.3 金属离子和表面活性剂对CALB活力的影响
  •   2.5 硅藻土对CALB固定条件优化
  •   2.6 固定化酶合成己酸乙酯条件优化
  •   2.7 固定化酶的操作稳定性
  • 3 讨论与结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张玲敏,王斌,潘力

    关键词: 南极假丝酵母脂肪酶,黑曲霉,分泌表达,酶学性质,固定化,酯化

    来源: 食品科学 2019年14期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 一般化学工业

    单位: 华南理工大学生物科学与工程学院广东省发酵与酶工程重点实验室

    基金: 国家自然科学基金面上项目(31870024,31871736),广东省自然科学基金项目(2017A030313097),广东省科技计划项目(2016A050503016,2016A010105004)

    分类号: TQ925.6

    页码: 107-114

    总页数: 8

    文件大小: 1617K

    下载量: 308

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