导读:本文包含了成纤维细胞感染论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,纤维,病毒,幽门,胃癌,螺杆,凋亡。
成纤维细胞感染论文文献综述
高畅,翟杰,党盛源,郑世民[1]（2019）在《网状内皮组织增生病病毒感染对鸡胚成纤维细胞可变剪接的影响》一文中研究指出本实验旨在研究网状内皮组织增生病病毒(REV)感染鸡胚成纤维细胞(CEFs)可变剪接的模式及其对细胞生物进程影响的机制。采用高通量测序技术对REV感染的CEFs(VB组)和正常的CEFs(C组)发生的可变剪接事件进行比较分析,并通过PCR和凝胶电泳对实验结果进行验证。共检测到6 939个基因发生可变剪接,其中外显子跳跃(SE)是最普遍的剪接模式。此外,5 607个可变剪接基因是显着差异表达的,其中2 825个基因的表达与C组相比是显着上调的,2 782个基因的表达是显着下调的。这些差异表达的可变剪接基因参与了细胞中许多重要的生物学过程,验证结果也显示高通量测序的结果是真实可靠的。结果提示,由REV感染引起的可变剪接基因差异表达与CEFs中凋亡和肿瘤发生密切相关,为REV感染的防治提供了新的视角。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
李焕影,梁东生,胡乃明,戴杏竹,何佳宁[2]（2019）在《幽门螺杆菌感染人牙周膜成纤维细胞后对细胞增殖的影响及其机制》一文中研究指出目的探究幽门螺杆菌感染人牙周膜成纤维细胞后对细胞增殖的影响及其机制,探讨其在牙周组织的病理损伤机制的可能性。方法体外培养幽门螺杆菌SS1及人牙周膜成纤维细胞,通过庆大霉素保护实验建立幽门螺杆菌侵袭人牙周膜成纤维细胞高浓度(MOI=100:1)及低浓度(MOI=10:1)的侵袭模型模型,分别共培养6h后,检测核增殖抗原Ki-67的表达情况,并用CCK8法检测细胞连续7 d的增殖情况。流式细胞仪检测细胞周期变化情况及周期相关调节蛋白表达的变化。结果幽门螺杆菌标准株SS1侵袭细胞后可导致细胞的增殖受到抑制,并且幽门螺杆菌标准株SS1感染的浓度越高,抑制细胞增殖的情况越明显。通过流式细胞术检测可见,G2期DNA含量随感染浓度增加而升高,细胞G2期发生阻滞。幽门螺杆菌标准株SS1感染后可导致人牙周膜成纤维细胞的G2期的相关调节蛋白cyclinB1、CDK1、Cdc25C表达失常,并且CDK1-Y15和Cdc25C-S216磷酸化蛋白增加,导致G2期阻滞。结论说明幽门螺杆菌标准株SS1对正常牙周膜成纤维细胞有损伤作用。幽门螺杆菌标准株SS1通过影响Cdc25C/CDK1/cyclinB1通路的调节导致G2期阻滞,有丝分裂受阻,抑制细胞增殖。(本文来源于《2019年中华口腔医学会口腔预防医学专业委员会第十九次全国学术年会资料汇编》期刊2019-07-24）
王文广,匡德宣,李娜,陆彩霞,罕园园[3]（2019）在《CA16感染树鼩肺成纤维细胞模型的建立及其受体SCARB2的表达》一文中研究指出目的探讨建立CA16感染树鼩肺成纤维细胞(tree shrew lung fibroblasts,TSLF)实验模型的可行性。方法用肠道病毒CA16感染TSLF,以人肺成纤维细胞(KMB-17)作对照,镜下观察细胞病变情况,间接免疫荧光实验观察病毒蛋白和感染相关受体SCARB2蛋白的表达情况,探针法实时荧光定量PCR检测病毒载量,以β-Actin作内参染料法实时荧光定量PCR检测受体SCARB2基因的相对表达量,结合基因序列比对,分析其与感染的相关性。结果 CA16感染TSLF,可引起明显的细胞病变,免疫荧光实验可见病毒和受体SCARB2蛋白,以100TCID_(50)/10~5 cells的比例感染TSLF可在48 h左右病毒载量达到最高,SCARB2基因有与感染相关的高表达,而其基因序列也与人有较高同源性。结论 CA16可感染TSLF,树鼩SCARB2可参与感染。(本文来源于《中国实验动物学报》期刊2019年04期）
焦玲帅,陈一波,杨铭,董书维,代解杰[4]（2019）在《人类巨细胞病毒感染树鼩原代真皮成纤维细胞诱导凋亡特性》一文中研究指出人类巨细胞病毒(HCMV)流行广泛,危害严重,由于其严格的物种特异性限制,动物模型缺乏,严重阻碍了对其致病机制的研究及药物、疫苗的研发。本研究对树鼩(Tupaia belangeri)来源的原代真皮成纤维细胞感染HCMV后的细胞死亡现象进行了初步探索。首先,观察了感染后细胞病变和死亡情况,使用细胞增殖检测试剂盒测定了细胞活力;其次,对凋亡相关因子bax、bcl-2和未折迭蛋白反应相关因子chop、atf4、xbp1s转录水平的差异进行了逆转录荧光定量PCR检测与分析;然后利用免疫蛋白印迹技术检测并分析了主要病毒蛋白IE1、UL44和凋亡相关因子Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP的表达水平;最后结合膜联蛋白-V和碘化丙啶双染色法从生物化学角度对细胞死亡类型进行了鉴定。结果显示,细胞病变和死亡情况随着感染进程逐渐严重,细胞活力下降明显(P <0.001)。感染上调bax、bcl-2、chop、atf4、xbp1s转录水平并且使bax与bcl-2转录水平呈明显拮抗趋势;感染同时上调Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表达和逐级剪切激活;病毒蛋白IE1、UL44可以上调至一个完整的病毒复制周期结束。综上,本研究指出HCMV跨物种感染树鼩原代真皮成纤维细胞可诱导细胞凋亡,并且与内质网和线粒体密切相关。(本文来源于《动物学杂志》期刊2019年03期）
李如月[5]（2019）在《MDA5在IBDV感染鸡胚成纤维细胞自噬发生过程中的作用研究》一文中研究指出传染性法氏囊病病毒(IBDV)是属于Birnaviridae家族的双链RNA病毒。自噬是真核细胞的死亡方式之一。有研究表明,IBDV可以引起DF-1细胞自噬,但其具体机制仍有待研究。MDA5为模式识别受体家族中的一员,能够特异性识别双链RNA病毒。课题组前期研究显示,IBDV能够激活雏鸡法氏囊内鸡MDA5(chMDA5)信号通路,参与IBDV感染雏鸡过程。因此,本试验以IBDV为致病原,鸡胚成纤维细胞(CEF)为研究对象,对MDA5与IBDV引起的自噬之间的关系进行研究,进一步揭示IBDV致病机制。首先,将双链RNA病毒模拟物poly(I:C)转染至CEF,采用Western blot方法对CEF内chMDA5蛋白表达进行检测,结果发现poly(I:C)转染能够引起CEF内chMDA5的表达升高。之后将CEF分为对照组、poly(I:C)组、chMDA5 siRNA+poly(I:C)组、Rapa+poly(I:C)组、3-MA+poly(I:C)组,采用Western blot方法对细胞内自噬标志蛋白LC3表达进行检测,结果显示chMDA5介导poly(I:C)引起CEF的自噬,并且自噬激活剂Rapa能够增加poly(I:C)引起的自噬,而自噬抑制剂3-MA能够抑制poly(I:C)引起的自噬。在此基础上,为研究chMDA5在IBDV感染致CEF自噬中的作用,将CEF分为正常对照组、IBDV感染组、chMDA5 siRNA+IBDV组、Rapa+IBDV组、3-MA+IBDV组,通过Western blot法、间接ELISA法、实时荧光定量PCR法及透射电镜技术检测细胞自噬的发生、MDA5及其信号通路的活化、IBDV的复制及CEF的损伤。结果发现:(1)与正常组相比较,IBDV组chMDA5及其信号通路关键分子chIPS-1、chNF-κB、chIRF3和下游产物chIL-1β、chIL-6、chTNF-α、chIFN-β的表达量极显著升高(P<0.01)。与IBDV组相比较,随着chMDA5的沉默,chIPS-1、chNF-κB、chIRF3及chIL-1β、chIL-6、chTNF-α、chIFN-β的表达量也显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);Rapa+IBDV组chIL-1β、chTNF-α表达显著性降低(P<0.05),3-MA+IBDV组chMDA5及chIPS-1、chIRF3、chIL-1β、chIL-6、chTNF-α、chIFN-β表达均显著性降低(P<0.05)。(2)与正常组相比较,IBDV组自噬蛋白LC3与Beclin1的表达均极显着地升高(P<0.01),AKT与mTOR磷酸化水平显着性降低(P<0.05)。与IBDV组相比较,将chMDA5特异性沉默后LC3与Beclin1的表达均差异显着地升高(P<0.05),AKT与mTOR的磷酸化水平差异显着性降低(P<0.05);Rapa+IBDV组LC3表达水平、AKT和mTOR的磷酸化水平差异显着或极显着的上升(P<0.05或P<0.01);3-MA+IBDV组与IBDV组相比较,LC3与Beclin1的表达差异显着或极显着的降低(P<0.05或P<0.01)。IBDV组细胞线粒体及内质网肿胀,可见有自噬体。chMDA5 siRNA+IBDV组细胞内线粒体嵴断裂、溶解,内质网肿胀,核周间隙变宽,自噬体结构增多。(3)chMDA5 siRNA+IBDV组及Rapa+IBDV组的病毒滴度、载量及VP2表达显着高于IBDV感染组,3-MA+IBDV组病毒的滴度及VP2表达则极显着降低(P<0.01)。上述结果表明,IBDV感染CEF后,不仅可以激活细胞内MDA5信号通路,还可能通过AKT/mTOR途径失活引起CEF发生自噬;同时,自噬能够促进IBDV的增殖,而MDA5可减弱IBDV所引起的CEF自噬,对CEF产生保护作用。本研究为进一步探讨病毒与自噬的关系以及MDA5通路参与IBDV致病机制奠定基础,为防治病毒性疾病提供了新思路。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
陈学书[6]（2019）在《幽门螺杆菌感染促进胃癌相关成纤维细胞的活化及其与胃癌细胞的互作研究》一文中研究指出目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori或HP)感染在胃癌癌周正常成纤维细胞(Normal fibroblasts,NFs)活化成肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAFs)中的作用,以及CAFs与胃癌细胞之间的互作及其分子基础,从肿瘤微环境的角度探讨H.pylori感染与胃癌发生的分子机制。方法:(1)用H.pylori 1004以感染复数(Multiplicity of infection,MOI)为50(H.pylori与细胞比为50:1)感染NFs、CAFs及肿瘤细胞AGS 7 d,免疫荧光染色(Immunofluorescence,IF)检测H.pylori 1004的生长状态;Western blot检测H.pylori特异性性蛋白尿素酶B(Urease B)的表达。(2)NFs活化实验:分为直接感染和间接感染。直接感染分3组:(1)H.pylori 1004直接感染NFs 7d;(2)AGS与NFs共培养7 d;(3)H.pylori 1004、AGS及NFs共培养7 d。间接感染用0.4μm孔径的Transwell小室将H.pylori 1004与NFs隔离培养,分为3组:(1)H.pylori 1004(上室)/NF(下室),培养7 d;(2)AGS(上室)/NF(下室),培养7 d;(3)AGS+HP1004(上室)/NF(下室),培养7 d。用Western blot检测各组NFs中纤维细胞活化蛋白(Fibroblast-activating protein,FAP)和基底膜糖蛋白(Lumican,LUM)蛋白质的表达,评价NFs的活化状态;最后用Transwell实验检测NFs活化后对AGS迁移和侵袭的影响。(3)CAFs与AGS互作实验:用8μm孔径Transwell小室构建实验模型,分为4组:(1)AGS(上室)/CAF(下室)组,作为对照组;(2)AGS(上室)/CAF+HP1004(下室)组,用H.pylori 1004感染CAFs 7 d;(3)AGS+HP1004(上室)/CAF(下室)组,用H.pylori 1004感染AGS 7 d;(4)AGS+HP1004(上室)/CAF+HP1004(下室)组,用H.pylori 1004同时感染AGS和CAFs 7 d;分别培养24 h(迁移)和72 h(侵袭),结晶紫染色并计数下室膜上迁移或侵袭的AGS细胞数。(4)细胞因子检测及ELISA验证:分别收集NFs活化实验中细胞培养液或CAFs与AGS互作实验中Transwell下室培养液,用细胞因子芯片检测培养液中细胞因子,选择其中的白细胞介素8(Interleukin-8,IL-8)及纤溶酶原激活物抑制剂E1(Serpin family E member 1,Serpin E1)用ELISA进行验证。(5)利用人类蛋白图谱(The Human Protein Atlas,HPA)数据库及GEPIA在线工具分析Serpin E1与胃癌的关系。(6)用Matrigel和I型鼠尾胶原蛋白构建叁维培养模型,将CAFs或NFs与胃癌细胞SGC-7901混合接种在胶上,培养10 d,取下基质胶,福尔马林固定,石蜡包埋切片,进行HE染色。结果:(1)鉴定结果显示,H.pylori 1004感染NFs、CAFs及AGS 7d后仍然可以黏附细胞生长,且高表达其特征性蛋白Urease B。(2)NFs活化实验结果:(1)无论直接感染还是间接感染,H.pylori 1004感染NFs组、AGS与NFs共培养组及H.pylori1004、AGS和NFs共培养组,NFs中FAP及LUM表达均显着增强(P<0.05),且H.pylori 1004感染NFs能促进AGS细胞的迁移和侵袭(P<0.05),提示H.pylori及AGS均能促进NFs的活化。(2)细胞因子芯片结果显示,H.pylori 1004感染NFs后,细胞因子CCL2、Serpin E1含量显着增加,且新出现了IL-6及CXCL12;而AGS与NFs共培养,培养液中IL-8、IL-6等10个细胞因子含量增加,推测这些细胞因子参与了H.pylori和AGS诱导的NFs活化。(3)ELISA结果显示,H.pylori 1004感染NFs、H.pylori 1004感染AGS、及H.pylori 1004、AGS与NFs共培养中Serpin E1含量显着增高(P<0.001),IL-8含量显着降低(P<0.01)。(3)CAFs与AGS互作实验结果:(1)H.pylori 1004单独感染CAFs或AGS细胞,均可促进AGS细胞迁移侵袭,但是H.pylori 1004同时感染CAFs和AGS细胞,促进AGS细胞迁移侵袭作用最强,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)细胞因子芯片结果显示,H.pylori 1004感染AGS,细胞因子Serpin E1含量显着增加;H.pylori 1004感染CAFs或同时感染CAFs和AGS,细胞因子CXCL1、CXCL10、CCL5增加,提示这些因子均参与了CAFs和AGS的互作,且Serpin E1与IL-8的ELISA验证结果与细胞因子芯片结果一致。(3)数据分析结果显示:Serpin E1在胃癌组织中的表达高于癌周组织,且主要在胃癌组织的纤维细胞中高表达,其高表达与患者10年生存率负相关。结论:(1)H.pylori感染或AGS与NFs共培养均能促进NFs活化,且两者共同直接作用于NFs细胞时,其活化作用最强;(2)H.pylori感染能增强CAFs和AGS的互作,促进胃癌细胞AGS的迁移、侵袭能力;(3)H.pylori感染诱导细胞分泌Serpin E1等细胞因子在NFs活化及CAFs与AGS的互作中起重要作用。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2019-05-15）
王璐[7]（2019）在《柔嫩艾美耳球虫感染鸡胚成纤维细胞差异蛋白的筛选及特性研究》一文中研究指出柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是7种鸡艾美耳球虫中的一员,具有很强的致病力。E.tenella属于严格的细胞内专性寄生虫,有着复杂的生活史,必须依靠宿主细胞才能完成其生活周期。阻止虫体入侵细胞和在细胞内的发育可能是预防和控制球虫病的有效方法。因此,鉴定与虫体入侵相关的关键分子对于开发新的抗球虫药物和疫苗具有重大作用。目前,对艾美耳球虫入侵宿主细胞机制的研究主要集中在虫体蛋白上,而与艾美耳球虫相关的宿主蛋白鲜有报道。本研究首次采用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术结合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术来筛选感染与未感染E.tenella子孢子72h的鸡胚成纤维(CEF)细胞中差异表达蛋白,并研究了其中的叁个差异表达蛋白—脂肪酸结合蛋白4(proteins fatty acid binding protein 4,FABP4)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、原钙黏蛋白10(protocadherin 10,PCDH10)对E.tenella入侵细胞的影响,研究结果为阐明球虫与宿主相互作用的机制提供理论基础。1.基于iTRAQ技术分析柔嫩艾美耳球虫感染后CEF细胞的差异表达蛋白E.tenella是一种严格的细胞内专性寄生虫,当受到E.tenella感染时,宿主细胞会发生一系列变化以应对虫体感染。但目前,关于宿主细胞应对球虫感染机制的研究极其有限。本研究通过iTRAQ与LC-MS/MS联合技术分析了感染E.tenella子孢子72h后CEF细胞的蛋白质组表达变化,共鉴定出3967个非冗余蛋白质,与不感染组相比,感染组有259个蛋白质的表达量发生了明显变化,其中上调蛋白质145个,下调蛋白质114个。GO分析结果发现,这些差异表达蛋白主要具有结合活性、催化活性、转运子活性等分子功能。KEGG通路分析表明这些差异表达蛋白主要参与了细胞外基质受体互作、糖酵解/糖异生、粘着斑、氨基酸的生物合成、半胱氨酸和蛋氨酸代谢等通路。利用q-PCR对蛋白质组的数据进行验证,q-PCR结果显示7个基因的mRNA转录水平变化与iTRAQ结果一致,而1个基因的不一致。研究结果为探索寄生虫与宿主相互作用的机制提供了新的视角。2.FABP4对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响成功克隆了鸡FABP4基因(458-bp),并连接至pET-28c(+)载体构建了重组质粒pET-28c(+)-FABP4,诱导表达了大小为18.5kDa的重组蛋白,经Western blotting验证后确定了所获得的重组蛋白为FABP4。Western blotting和免疫组织化学结果均显示,FABP4在E.tenella子孢子感染细胞中的表达下调。而q-PCR结果显示,在E.tenella子孢子感染的DF-1细胞中FABP4的表达量上升。我们推测产生mRNA水平与蛋白水平不一致的现象,是由于存在转录后修饰或蛋白质降解等情况。抗体抑制实验表明,50、100、200、300和400μg/mL的抗FABP4抗体对子孢子入侵无明显影响。分别使用BMS-309403和转化生长因子-β3(TGF-β3)抑制和促进DF-1细胞中表达FABP4后,检测它们对子孢子入侵细胞的影响。BMS-309403处理组的入侵率未受到显着影响,而TGF-β3处理组的入侵率显着下降。结果表明宿主FABP4在E.tenella入侵中起负调控作用。3.GAPDH对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响成功克隆了鸡GAPDH基因(1123-bp),并构建了重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,表达了大小为61.7 kDa的GAPDH重组蛋白。q-PCR和免疫组织化学均显示,GAPDH在E.tenella子孢子感染的细胞中的表达显着升高。Western blotting结果显示,在E.tenella子孢子感染的细胞中GAPDH的表达量与未感染细胞无明显差异。抗体抑制实验表明,与相同浓度正常兔IgG相比,50、100、200、300和400μg/mL的抗GAPDH抗体均能明显抑制子孢子的入侵。结果表明宿主GAPDH在E.tenella入侵中起正调控作用。4.PCDH10对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响成功克隆了PCDH10基因(1631-bp),并构建了重组质粒pColdⅠ-PCDH10,表达了大小为63.2 kDa的PCDH10重组蛋白。Western blotting和免疫组织化学均显示,PCDH10在E.tenella子孢子感染的细胞中的表达量显着降低。抗体抑制实验表明,50、100、200、300和400μg/mL的抗PCDH10抗体对子孢子入侵无明显影响。需要更多的研究来发现PCDH10在E.tenella感染宿主细胞过程中的作用。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
于观留[8]（2019）在《坦布苏病毒感染对鸭胚成纤维细胞生物学功能的影响及其机制研究》一文中研究指出坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)感染,是于2010年4月份发生在我国江浙地区的一种新发病毒性传染病,其主要引起产蛋鸭体温升高、食欲下降、卵泡变性出血、卵黄性腹膜炎、产蛋大幅下降以及雏鸭头颈震颤、共济失调和四肢麻痹等典型症状。该传染病具有传播范围广、传播速度快以及感染率高等特点。至今,已造成我国大多数省份的养鸭场发生感染,严重影响着我国水禽养殖业的健康发展。深入探究病毒感染所诱导宿主细胞的生物学功能改变及有关信号通路网络的调控机制,不仅有助于理解病毒在细胞内、外的信号传递,以及转录后的调节过程,自身与其他信号分子之间的关系及相互作用,还可对宿主细胞代谢及相关疫病的发生发展过程有较为全面的认识。然而,目前对于TMUV与其宿主细胞互作机制的研究甚少,对于该病毒所诱导宿主细胞生物学功能影响机制更是缺乏了解。为解决上述问题,本研究以鸭胚成纤维细胞(DEF)为研究对象,利用在流行病学调查中所分离的蚊源TMUV(TMUV-SDMS)作为国内该病毒优势株的代表株,运用转录组测序技术(RNA-Seq)、qRT-PCR和RNAi等分子生物学技术,在细胞及分子水平上深入探究TMUV感染对DEF细胞生物学功能的影响,筛选并验证该病毒感染与宿主细胞互作的关键基因或蛋白,探讨了TMUV-SDMS所诱导DEF凋亡与坏死的致死机理,为阐明该病毒逃逸宿主防御机制、探寻抗病毒新靶点等提供数据支持。研究内容主要分为以下五个方面:一、TMUV遗传演化分析本项研究在流行病学调查中所分离到的11株TMUV分离株(包括鸭源、鸡源、鹅源、麻雀源和蚊源)的基础上,对NCBI数据库67株TMUV代表株的同源性比对、进化树分析、蛋白质叁级结构和糖基化位点进行了分析。结果表明:当前我国已有17个省份出现了TMUV的感染,且该传染病的爆发具有秋季高发的季节性特点;由以上78株病毒代表株的同源性比对和进化树分析可知,该病毒NS1基因的核酸和氨基酸的同源性均明显低于其E基因、NS3基因和NS5基因的核酸和氨基酸的同源性,TMUV主要演化为马来西亚(1955)、马来西亚(2012)、泰国(2013)和中国分离株I和中国分类株II(TMUV优势株)五大分支;根据以上病毒代表株蛋白质高级结构和糖基化位点分析,该病毒E蛋白在148~151处氨基酸位点存在着由无规则卷曲到α螺旋的变异,在380~381处和393~397处存在着β折叠片段的延长的变异,在154处氨基酸糖基化位点存在着由NYSA到NYPV、NYSV和NYPA的突变;此外,该病毒NS1蛋白在180~182处氨基酸位点存在着由无规则卷曲到α螺旋的结构变异,在175处氨基酸糖基化位点存在由NTTD到NITD的突变。以上结果表明,当前我国TMUV优势株为中国分离株II,且总体变异程度较小;蚊源TMUV(TMUV-SDMS)可作为国内TMUV优势株的代表株。二、TMUV-SDMS在DEF中的感染及样品RNA-Seq分析本研究选用最早感染TMUV蚊源细胞(C6/36)对TMUV-SDMS进行增殖培养,随后将增殖培养后的TMUV-SDMS接种至生长密度为70%~80%的原代DEF中。将感染该病毒的DEF细胞和未感染该病毒的DEF细胞分别设为试验组和对照组,于感染后的12 h和24 h时分别提取总RNA,并对其进行质检(A260/A280>1.5,A260/A230>1.0,RIN>7)。运用Illumina HiSeq 2000~(TM)平台对以上样品进行转录组测序(RNA-Seq),采用RPKM(Reads Per Kilobase of exon model per million mapped sequence reads)方法对Unigene进行计算,按照表达量倍数变化(Fold Change)和表达量变化显着性(P value)筛选Unique(差异基因的筛选标准为差异倍数Fold change>2且P<0.05)。最后,在全基因组背景下,运用超几何运算将筛选出差异表达基因分别向GO功能分类和KEGG信号通路富集分析。结果显示,经过质控后的各组样品得到的clean data,Q20和Q30质控率均在94.0%以上,由此表明本研究中所获得的转录组测序数据质量较高。在病毒感染12 h时,共筛选出911个差异基因,其中83.96%(764/911)的差异基因上调表达,16.04%的差异基因下调表达(147/911);在病毒感染24 h时,共筛选出3008个差异基因,其中59.54%(1791/3008)的差异基因上调表达,40.46%的差异基因下调表达(1217/3008)。通过对以上差异基因进行GO功能分类和KEGG信号通路富集分析可知,这些差异基因行使的生物学功能主要为免疫系统、细胞生长与坏死、信号转导和信号分子与交互等方面。以上结果表明,TMUV-SDMS可诱导DEF免疫系统、细胞生长与坏死、信号转导和信号分子与交互等生物学功能的改变。叁、TMUV-SDMS感染对DEF免疫系统的影响在本研究中,由RNA-Seq所提示的信息可知,免疫相关的差异基因主要富集在Toll样受体信号通路、RIG-I-样受体信号通路、趋化因子信号通路、NOD样受体信号通路、造血细胞系、细胞质DNA识别信号通路等。通过对以上信号通路中的差异基因按照表达量的高低进行进一步分类汇总可知,在TMUV-SDMS感染DEF早期和中期时,宿主细胞内与免疫相关信号通路中的模式识别受体(如RIG-I、MDA5和TMEM173)被激活,导致细胞因子(如IFNα、IL-6、IL-12、CCL19和CCL20),转录因子和信号分子(如IRF7、NF-kB和STAT1)和抗原呈递蛋白(如CD44和CD70)的大量产生,由此初步揭示了宿主细胞应对该病毒感染的天然免疫转录谱。四、TMUV-SDMS感染对DEF细胞凋亡与坏死影响结合RNA-Seq所提供的信息,本研究运用激光共聚焦显微镜、流式细胞术和JC-1探针等技术定性和定量检测了TMUV-SDMS感染对DEF细胞生长与坏死的影响。结果显示,TMUV-SDMS感染不仅可以导致DEF细胞在感染12 h和24 h后的细胞活性显着降低(P<0.01),还可以诱导DEF细胞显着的凋亡与坏死、S+G2M期的停滞以及线粒体膜电位的降低(P<0.05或P<0.01)。通过对本研究中细胞凋亡与坏死相关差异基因的汇总分析可知,这些差异基因主要定位于内源性的线粒体途径和外源性的死亡受体途径。以上结果表明,TMUV-SDMS感染可诱导DEF细胞S+G2/M期停滞,这可能是因CDC20B过表达所致;且该病毒感染主要是通过内源性的线粒体途径和外源性的死亡受体途径诱导DEF凋亡与坏死。五、DEF细胞生长与坏死关键基因的筛选与验证为了进一步确定TMUV-SDMS与DEF互作的关键基因,阐明其在调节该病毒感染所诱导DEF细胞生长与坏死过程中所行使生物学功能。本项研究根据RNA-Seq所提供的信息,选择在细胞凋亡信号通路中表达量最高且具有调节线粒体膜通透性、控制CytC和凋亡因子释放等作用的B淋巴细胞瘤2A1抗凋亡基因(BCL2A1)作为目的基因,运用RNAi等分子生物学技术探究其在调节细胞周期、细胞凋亡与坏死等细胞生长与坏死过程中的调节作用。研究结果表明,BCL2A1具有调控宿主细胞G2M期以及细胞凋亡和坏死作用;且该靶基因与BCL2、CDC20B和MCL1等还具有密切关系(即:与BCL2有拮抗作用,与CDC20B、CytC和MCL1等有协同关系),但具体作用机制还需今后进一步探究。本研究从分子水平探讨了TMUV感染对DEF细胞生物学功能的影响,深入揭示了该病毒所诱导DEF凋亡与坏死的具体机制,研究结果对于丰富TMUV感染宿主转录谱、阐明该病毒逃逸宿主防御机制和探寻靶向线粒体抗病毒药物研发等均具有重要意义。(本文来源于《山东农业大学》期刊2019-03-27）
李公英[9]（2019）在《外用重组人碱性成纤维细胞生长因子联合莫匹罗星治疗烧伤患者残余创面并MRSA感染临床研究》一文中研究指出目的探究外用重组人碱性成纤维细胞生长因子联合莫匹罗星治疗烧伤患者残余创面并耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染临床疗效。方法选取2016年2月～2017年5月我院52例烧伤残余创面并MRSA感染患者,依据随机数表法分组,各26例。对照组予以常规方法治疗,实验组予以莫匹罗星+重组人碱性成纤维细胞生长因子治疗。观察记录两组治疗效果及创面愈合时间。结果实验组治疗总有效率92.31%(24/26)较对照组61.54%(16/26)高,差异有统计学意义(P<0.05);两组创面愈合时间相比,实验组(18.06±3.56) d较对照组(31.18±5.47) d短,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对烧伤残余创面并MRSA感染患者联合采用外用重组人碱性成纤维细胞生长因子、莫匹罗星治疗,可有效杀灭MRSA,显着加速创面愈合,进一步提高治疗效果。(本文来源于《海峡药学》期刊2019年01期）
贾阳杰,吕亚丽,刘丽宏[10]（2018）在《姜黄素对人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞后细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染人胚肺成纤维细胞后细胞凋亡情况,以及姜黄素对HCMV感染细胞后细胞凋亡的影响。方法将细胞分为细胞对照组(细胞维持液),病毒模型组(细胞维持液+HCMV),姜黄素大(细胞维持液+HCMV+姜黄素0.8μg/mL)、中(细胞维持液+HCMV+姜黄素0.4μg/mL)、小(细胞维持液+HCMV+姜黄素0.2μg/mL)剂量组,更昔洛韦组(细胞维持液+HCMV+更昔洛韦50μg/mL),运用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)和荧光染料碘化丙啶(PI)法检测姜黄素对HCMV感染的细胞凋亡的影响。结果 JC-1法实验结果显示:HCMV感染早期,病毒模型组细胞凋亡情况与细胞对照组比较,差异无统计学意义(P> 0.05);与病毒模型组比较,更昔洛韦组和姜黄素大、中、小剂量组细胞凋亡显着增加(P <0.05)。HCMV感染晚期,与细胞对照组比较,病毒模型组细胞凋亡显着增加(P <0.05);与病毒模型组比较,姜黄素大、中、小剂量组细胞凋亡均有不同程度降低,其中姜黄素大剂量组与病毒模型组比较差异有统计学意义(P <0.05)。荧光染料PI法实验结果显示:在HCMV感染早期及晚期,与细胞对照组比较,病毒模型组S期细胞显着增多(P <0.01);与病毒模型组比较,姜黄素大、中、小剂量组S期细胞均明显减少(P <0.05)。结论姜黄素能够对抗HCMV感染引起的细胞凋亡作用,可使HCMV感染早期诱导的抗凋亡作用和HCMV感染晚期诱导的促凋亡作用减弱。(本文来源于《中国医药导报》期刊2018年34期）
成纤维细胞感染论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探究幽门螺杆菌感染人牙周膜成纤维细胞后对细胞增殖的影响及其机制,探讨其在牙周组织的病理损伤机制的可能性。方法体外培养幽门螺杆菌SS1及人牙周膜成纤维细胞,通过庆大霉素保护实验建立幽门螺杆菌侵袭人牙周膜成纤维细胞高浓度(MOI=100:1)及低浓度(MOI=10:1)的侵袭模型模型,分别共培养6h后,检测核增殖抗原Ki-67的表达情况,并用CCK8法检测细胞连续7 d的增殖情况。流式细胞仪检测细胞周期变化情况及周期相关调节蛋白表达的变化。结果幽门螺杆菌标准株SS1侵袭细胞后可导致细胞的增殖受到抑制,并且幽门螺杆菌标准株SS1感染的浓度越高,抑制细胞增殖的情况越明显。通过流式细胞术检测可见,G2期DNA含量随感染浓度增加而升高,细胞G2期发生阻滞。幽门螺杆菌标准株SS1感染后可导致人牙周膜成纤维细胞的G2期的相关调节蛋白cyclinB1、CDK1、Cdc25C表达失常,并且CDK1-Y15和Cdc25C-S216磷酸化蛋白增加,导致G2期阻滞。结论说明幽门螺杆菌标准株SS1对正常牙周膜成纤维细胞有损伤作用。幽门螺杆菌标准株SS1通过影响Cdc25C/CDK1/cyclinB1通路的调节导致G2期阻滞,有丝分裂受阻,抑制细胞增殖。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
成纤维细胞感染论文参考文献
[1].高畅,翟杰,党盛源,郑世民.网状内皮组织增生病病毒感染对鸡胚成纤维细胞可变剪接的影响[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[2].李焕影,梁东生,胡乃明,戴杏竹,何佳宁.幽门螺杆菌感染人牙周膜成纤维细胞后对细胞增殖的影响及其机制[C].2019年中华口腔医学会口腔预防医学专业委员会第十九次全国学术年会资料汇编.2019
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[10].贾阳杰,吕亚丽,刘丽宏.姜黄素对人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞后细胞凋亡的影响[J].中国医药导报.2018
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