首页> 正文

HIF-1α在生发中心反应中的作用

2020-12-02阅读(804)

HIF-1α在生发中心反应中的作用

论文摘要

免疫学是一门研究机体免疫现象的基础学科,近年来该领域发展迅猛,已成为生命科学前沿研究的热点。在基础研究的水平,当受到外物入侵,机体主要通过免疫系统来发挥效应清除异已。高等动物的免疫系统比较复杂,包括天然免疫以及适应性免疫两部分。在本文研究中我们主要关注适应性免疫这一方向。在体液免疫中,活化的B细胞在生发中心发生一系列反应最终分化为效应的浆细胞以及记忆细胞,而在这个过程中滤泡辅助性T细胞扮演不可或缺的作用。同时前人的研究已证实生发中心微环境是处于低氧的状态,那么作为低氧调控的关键因子Hif1a在生发中心反应中是否影响B细胞分化为浆细胞或者是影响滤泡辅助性T细胞的分化及功能呢?关于这方面的研究,目前还没有查阅到相关文献的报道。因此,我们就此问题展开相关的实验工作。本文引入基因型为Hif1afl/fl Mb1Cree以及Hif1 afl/fl CD4Cre条件性敲除的小鼠,并构建出Hif1afl/fl Mb1Cre小鼠与野生型小鼠骨髓细胞1:1混合的嵌合体小鼠,分别从T细胞以及B细胞两个方面展开工作。虽然在嵌合体小鼠体内,基因敲除B细胞数量竞争性增加并且在急性病毒LCMV感染后,发现基因敲除B细胞分化为GCB和浆细胞的数量和比例明显提高,但是在Hifla fl/fl Mb1Cre基因型的个体水平,不论是OVA蛋白免疫模型还是LCMV病毒感染模型中,基因缺陷小鼠B细胞分化为GCB以及浆细胞的比例和数量没有明显差异。另外,我们在个体水平用同样的模型分析了Hif1afl/fl CD4Cr 条件性敲除小鼠中滤泡性辅助T细胞分化和功能均不受Hifla基因敲除的影响。因此,我们认为Hif1a基因缺失不影响B细胞分化为生发中心B细胞和浆细胞,也不影响滤泡辅助性T细胞的分化和功能。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 前言
  •   1.1 免疫学概述
  •     1.1.1 免疫系统简介
  •     1.1.2 B淋巴细胞的分化
  •     1.1.3 T淋巴细胞的分化
  •   1.2 生发中心反应
  •     1.2.1 生发中心形成
  • FH细胞与B细胞的相互作用'>    1.2.2 TFH细胞与B细胞的相互作用
  • FH细胞的分化与功能'>    1.2.3 TFH细胞的分化与功能
  •   1.3 HIF-1α的研究进展
  •     1.3.1 HIF-1的结构
  •     1.3.2 HIF的信号通路
  •     1.3.3 HIF的信号通路与固有免疫
  •     1.3.4 HIF的信号通路与细胞代谢
  •     1.3.5 HIF的信号通路与适应性免疫
  • 第二章 材料与方法
  •   2.1 常用相关试剂和药品
  •     2.1.1 流式相关以及细胞纯化相关的试剂
  •     2.1.2 分子生化实验相关试剂
  •     2.1.3 基因型鉴定PCR引物
  •   2.2 常用实验仪器
  •   2.3 小鼠的基因型鉴定方法
  •     2.3.1 基因组DNA的提取
  •     2.3.2 聚合酶链式反应
  •     2.3.3 琼脂糖凝胶电泳分离目的DNA
  •   2.4 体内小鼠B细胞的富集和刺激实验
  •     2.4.1 初始B细胞的纯化
  •     2.4.2 初始B细胞的活化
  •     2.4.3 初始B细胞的增殖
  •     2.4.4 初始B细胞的凋亡
  •   2.5 体外分化实验
  •     2.5.1 细胞系的复苏与传代培养
  •     2.5.2 GCB细胞的体外分化
  •     2.5.3 浆细胞的体外分化
  •   2.6 骨髓重构实验
  •     2.6.1 嵌合体小鼠的骨髓构建实验
  •     2.6.2 骨髓重构实验的采血鉴定
  •     2.6.3 骨髓重构实验的流式检测
  •   2.7 OVA/Alum/LPS免疫小鼠的流式分析实验
  •     2.7.1 免疫试剂的配制和小鼠的免疫
  •     2.7.2 染色方案的设计
  •     2.7.3 制备单细胞悬液
  •     2.7.4 细胞流式抗体染色实验
  •   2.8 NP-OVA免疫小鼠检测抗体滴度
  •     2.8.1 NP-OVA免疫小鼠采血
  •     2.8.2 NP-OVA免疫小鼠采血提取血清
  •     2.8.3 酶联免疫吸附实验（ELISA）具体流程
  •   2.9 LCMV病毒感染并流式分析
  •   2.10 蛋白相关实验方法
  •     2.10.1 细胞蛋白样品的制备
  •     2.10.2 测定蛋白浓度（BCA法）
  •     2.10.3 蛋白免疫印迹
  • 第三章 结果与分析
  •   3.1 条件性敲除小鼠的基因型鉴定
  •   3.2 HIF-1α在B细胞中表达情况
  • fl/fl Mb1Cre与WT骨髓重建嵌合体小鼠'>  3.3 构建Hif1afl/flMb1Cre与WT骨髓重建嵌合体小鼠
  •     3.3.1 骨髓重建所需小鼠采血鉴定
  •     3.3.2 嵌合体小鼠外周血中Hif1a基因缺失B细胞比例上升
  •     3.3.3 嵌合体小鼠中Hif1a基因缺失不影响B细胞活化
  •     3.3.4 嵌合体小鼠中Hif1a基因缺失不影响B细胞增殖
  •     3.3.5 嵌合体小鼠中Hif1a基因在一定条件下可能影响B细胞凋亡
  •     3.3.6 嵌合体小鼠中Hif1a基因敲除影响GCB的形成和浆细胞的分化
  •   3.4 体外分化实验
  •   3.5 Hif1a基因缺失对于B发育的影响
  •   3.6 Hif1a基因缺失不影响GCB形成和浆细胞分化
  • fl/flMb1Cre小鼠不影响GCB形成'>    3.6.1 OVA免疫Hif1afl/flMb1Cre小鼠不影响GCB形成
  • fl/flMb1Cre小鼠不影响浆细胞分化'>    3.6.2 OVA免疫Hif1afl/flMb1Cre小鼠不影响浆细胞分化
  • fl/flMb1Cre小鼠不影响GCB形成和浆细胞分化'>    3.6.3 LCMV感染Hif1afl/flMb1Cre小鼠不影响GCB形成和浆细胞分化
  • FH细胞的影响'>  3.7 Hif1a基因缺失对于TFH细胞的影响
  • fl/flCD4Cre小鼠不影响CD4+T细胞活化'>    3.7.1 OVA免疫Hif1afl/flCD4Cre小鼠不影响CD4+T细胞活化
  • fl/flCD4Cre小鼠不影响TFH细胞分化'>    3.7.2 OVA免疫Hif1afl/flCD4Cre小鼠不影响TFH细胞分化
  • fl/flCD4Cre小鼠不影响TFH细胞功能'>    3.7.3 OVA免疫Hif1afl/flCD4Cre小鼠不影响TFH细胞功能
  • fl/flCD4Cre小鼠不影响抗体应答'>    3.7.4 OVA免疫Hif1afl/flCD4Cre小鼠不影响抗体应答
  •   3.8 总结与讨论
  • 附录1 图表索引
  • 参考文献
  • 致谢

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 李琼

    导师: 刘文贤

    关键词: 生发中心细胞,细胞

    来源: 厦门大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 厦门大学

    分类号: Q25

    总页数: 81

    文件大小: 4806K

    下载量: 7

    相关论文文献

    • [1].细胞因子风暴可阻止免疫系统形成生发中心[J]. 科学世界 2020(10)
    • [2].生理和病理条件下的生发中心研究进展[J]. 现代免疫学 2011(03)
    • [3].生发中心的发生与发展[J]. 中国生物化学与分子生物学报 2018(06)
    • [4].PDK1对生发中心的生成、发育及功能的影响[J]. 现代生物医学进展 2018(03)
    • [5].T-B细胞纠缠互作与ICOSL驱动的对生发中心反应的前馈调节[J]. 中国基础科学 2015(01)
    • [6].CD200可表达于生发中心内辅助性T淋巴细胞和血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤[J]. 临床与实验病理学杂志 2011(03)
    • [7].CD81蛋白在正常生发中心B细胞及B细胞淋巴瘤中高表达[J]. 临床与实验病理学杂志 2010(02)
    • [8].异位生发中心在干燥综合征靶器官损害中的作用[J]. 中华临床免疫和变态反应杂志 2017(02)
    • [9].口腔颌面部淋巴结生发中心进行性转化:附3例报告[J]. 上海口腔医学 2013(05)
    • [10].生发中心与非生发中心弥漫大B细胞淋巴瘤化疗效果及影响因素分析[J]. 山东医药 2015(17)
    • [11].脊髓C6-7弥漫大B细胞淋巴瘤(非生发中心亚型)1例[J]. 临床与实验病理学杂志 2020(07)
    • [12].协同刺激分子配体ICOSL参与高亲和力抗体筛选生成的新机制[J]. 中国细胞生物学学报 2015(03)
    • [13].人生发中心激酶基因克隆及其转基因细胞的构建[J]. 苏州大学学报(医学版) 2011(02)
    • [14].伯基特淋巴瘤发病机制的研究进展[J]. 临床与实验病理学杂志 2015(01)
    • [15].伴有生发中心增生的血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤的临床病理研究[J]. 临床和实验医学杂志 2014(14)
    • [16].类风湿关节炎与关节滑膜异位生发中心形成的机制[J]. 医学综述 2018(13)
    • [17].成人肠道淋巴样息肉病临床病理分析及文献复习[J]. 临床与病理杂志 2015(05)
    • [18].辅助T细胞的粘连作用[J]. 自然杂志 2009(04)
    • [19].滤泡性辅助性T细胞的研究进展[J]. 医学综述 2016(10)
    • [20].Oct-2、Bob.1在肺结核组织B细胞中的表达及其意义[J]. 临床肺科杂志 2012(06)
    • [21].75例弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床特点和免疫表型分析[J]. 亚太传统医药 2012(10)
    • [22].鸡盲肠扁桃体中B淋巴细胞的发育[J]. 中国兽医科学 2009(11)
    • [23].c-Fos参与羊驼小肠黏膜淋巴细胞生发中心的调控[J]. 中国农业科学 2008(10)
    • [24].Castleman病45例临床病理学分析[J]. 安徽医药 2017(09)
    • [25].成人肠道淋巴样息肉病临床病理学特征分析[J]. 中华诊断学电子杂志 2016(01)
    • [26].鸡脾脏中B淋巴细胞的发育及其定位分布[J]. 中国兽医学报 2010(03)
    • [27].趋化因子及其受体在干燥综合征中的作用[J]. 中华临床免疫和变态反应杂志 2012(02)
    • [28].滤泡树突状细胞肉瘤的研究进展[J]. 现代生物医学进展 2009(19)
    • [29].滤泡性淋巴瘤合并脾梗死一例[J]. 中国临床新医学 2020(03)
    • [30].滤泡性淋巴瘤预后因素的研究[J]. 中国癌症杂志 2020(05)

    标签：;  ;  

    HIF-1α在生发中心反应中的作用
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕论降 版权所有 鄂ICP备12018319号-6