痰涂片检查结核分枝杆菌规范化操作研究

痰涂片检查结核分枝杆菌规范化操作研究

孔广珍

(新疆石河子第八师134团疾控中心832061)

【摘要】目的:对痰涂片检查结核分枝杆菌规范化操作的方式以及效果进行调查。方法:我疾控检验室在2012年1月-2014年12月间所有进行痰液检查的患者,所有患者均采用抗酸染色法进行涂片制作,对所有患者的检测结果进行调查。结果:14年,45人次痰检,3人初诊痰涂片阳性,片子共计118张。13年,67人次痰检,32人初诊,其中5人初诊阳性。涂片计111张。12年,29人次,初诊21人次,3人初诊阳性,后经临床证实,所有初见为阳性的患者均为结核类疾病患者,我疾控检验室涂片检测率为100%。结论:在操作过程中要注意加热操作,防止涂片干涸。

【关键词】痰涂片;结核分枝杆菌;规范化操作

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2015)10-0222-02

结核类疾病是一种具有传染性的疾病,最常见的就是肺结核。实验室检查是发现疾病传染源的主要途径,也是制定患者治疗方案的重要指标。实验室检查最常用的就是痰涂片检查,痰涂片镜检和检查也是世界卫生组织公认的诊断结核疾病的标准,但痰涂片的制作方式较多,对检查结果也有着不同的影响,我站主要采用了抗酸染色法做痰涂片,并对其检查结果进行了调查。

1.资料与方法

1.1一般资料

选择我疾控中心2012年1月-2014年12月间所有进行痰液检查的患者,12年29例;13年67例;14年45例,共141例。患者平均年龄为(46.2±17.5)岁,男性67例,女性74例,患者平均病程为(2.5±1.7)个月。

1.2试剂溶液

我疾控检验室采用抗酸染色法进行涂片制作(萋-尼(Z-N)抗酸染色法),染色液选用3%盐酸乙醇溶液;0.8%石炭酸复红溶液;0.1%亚甲蓝溶液;脱色液。

1.3涂片制作

根据痰标本采集时间,可将标本分为三类:

1.3.1即时痰

就诊时深呼吸后咳出的痰。

1.3.2患者晨起时立即用清水簌口后,咳出的第二口。第三口痰。

1.3.3送痰前一日,患者晚间咳出的痰。

进行AFB检查的医疗机构应提供符合要求的标本收集容器,医务人员在容器上应注明患者姓名,编号,检查项目,痰标本序号,然后交给患者。

患者留取的痰标本,应由检验人员或结核专干目视检查标本质量(特别用于初次诊断的痰标本):标本量一般在3~5毫升,标本性状属于干酪痰,褐色血痰,黏液痰者为合格的标本;痰标本不合格者,应予以进一步指导并要求重新送检。

用于AFB检查的载玻片要求:一张载玻片只能涂抹一份痰标本;每张玻片只能使用一次,不得清洗后再次使用于AFB涂片检查;应使用以95%的乙醇擦拭,经干燥,清洁,无油污无划痕的新载玻片制备涂片,在玻片1/3处注明实验序号及标本序号,如使用的载玻片一端有磨砂面,可用2B铅笔在磨砂面上直接书写。

1.3.3.1直接涂片法

在玻璃瓶背面进行样本标记,采用专用标本采集竹签采集痰液,痰液量在0.05~0.1ml之间,在玻璃瓶正面右侧三分之二处涂抹均匀,面积平均为10mm*20mm。涂片自然干燥,而后采用紫外线照射,时间为30min,可适当延长,而后采用微火烘烤,将涂片固定,染色后进行镜检。

所有图片制作均要在生物安全柜中进行,防止对环境造成污染。

1.4涂片染色

1.4.1将上述方式制作好的涂片按照要求进行固定。

1.4.2在图片上滴加附红染色液,而后进行微火加热,当图片出现蒸汽时移除涂片,保持染色5min。

1.4.3将载玻片稍微倾斜,采用细流水冲洗载玻片左侧三分之一处,洗去染色液,而后沥干剩余水分。

1.4.4自痰膜上端外缘开始滴加脱色液,直至痰膜红色完全清除。

1.4.5将载玻片稍微倾斜,采用细流水冲洗载玻片左侧三分之一处,洗去脱色液,而后沥干剩余水分。

1.4.5在痰膜上滴加亚甲蓝复染液,时间为30s。

1.4.6将载玻片稍微倾斜,采用细流水冲洗载玻片左侧三分之一处,洗去亚甲蓝复染液,而后沥干剩余水分[2]。

1.4.7待涂片自然干燥后进行镜检。

1.5效果观察

所有涂片均采用双目光学显微镜进行检查,在亮蓝色的背景下除了抗酸分枝杆菌以外的物质均为蓝色,抗酸分枝杆菌呈红色。

1.6评价指标

抗酸分枝杆菌阴性:镜检下连续300个不同的视野均未发现抗酸分枝杆菌存在。

抗酸分枝杆菌菌数:镜检下连续300个不同的视野中发现1-2条抗酸分枝杆菌存在。

抗酸分枝杆菌阳性:镜检下连续100个不同的视野中发现3-9条抗酸分枝杆菌为1+;镜检下连续不同的10个视野中发现1-9条抗酸分枝杆菌为2+;镜检下每个不同的视野中均发现1-9条抗酸分枝杆菌为3+;镜检下每个不同的视野均发现10条以上的抗酸分枝杆菌则为4+。

2.结果

我疾控检验室检测结果:14年,45人次痰检,3人初诊痰涂片阳性,片子共计118张。13年,67人次痰检,32人初诊,其中5人初诊阳性。涂片计111张。12年,29人次,初诊21人次,3人初诊阳性,后经临床证实,所有初见为阳性的患者均为结核类疾病患者,我疾控检验室涂片检测率为100%。

3.讨论

痰结核分枝杆菌的检测是诊断肺结核疾病的重要标准,同时也是最准确的标准。我院采用了抗酸染色法进行涂片染色,此种染色技术操作较为简便,医师在临床中容易掌握,且染色效果非常好[3]。但在实际操作过程中要对1.4.2中提到的微火加热操作格外注意,且不可过度加热,不可使染色剂沸腾,若染色剂沸腾则会导致涂片干涸无法进行脱色。而反复脱色也会导致试剂浪费、空气污染,且导致染色效果较差无法提供准确的检验结果。

总的来说,抗酸染色法在结核疾病的检查中具有非常高的检测结果,但要注意染色操作,提升涂片质量。

【参考文献】

[1]孙边成,王孝君,郭彦昌等.显微镜检查痰中结核分枝杆菌最低检测限的统计推断及方法改进[J].中国卫生检验杂志,2013,23(14):2909-2910.

[2]赵雁林,中国结核病防治规划-痰涂片显微镜检查标准化操作及质量保证手册[M].北京:中国协和医科大学出版社,2009:7.

[3]中国疾病预防控制中心.中国结核病防治规划痰涂片镜检标准操作及质量保证手册[M].北京:中国协和医科大学出版社,2009:7-14.

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