孔广珍
（新疆石河子第八师134团疾控中心832061）
【摘要】目的：对痰涂片检查结核分枝杆菌规范化操作的方式以及效果进行调查。方法：我疾控检验室在2012年1月-2014年12月间所有进行痰液检查的患者，所有患者均采用抗酸染色法进行涂片制作，对所有患者的检测结果进行调查。结果：14年，45人次痰检，3人初诊痰涂片阳性，片子共计118张。13年，67人次痰检，32人初诊，其中5人初诊阳性。涂片计111张。12年，29人次，初诊21人次，3人初诊阳性，后经临床证实，所有初见为阳性的患者均为结核类疾病患者，我疾控检验室涂片检测率为100%。结论：在操作过程中要注意加热操作，防止涂片干涸。
【关键词】痰涂片；结核分枝杆菌；规范化操作
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）10-0222-02
结核类疾病是一种具有传染性的疾病，最常见的就是肺结核。实验室检查是发现疾病传染源的主要途径，也是制定患者治疗方案的重要指标。实验室检查最常用的就是痰涂片检查，痰涂片镜检和检查也是世界卫生组织公认的诊断结核疾病的标准，但痰涂片的制作方式较多，对检查结果也有着不同的影响，我站主要采用了抗酸染色法做痰涂片，并对其检查结果进行了调查。
1.资料与方法
1.1一般资料
选择我疾控中心2012年1月-2014年12月间所有进行痰液检查的患者，12年29例；13年67例；14年45例，共141例。患者平均年龄为（46.2±17.5）岁，男性67例，女性74例，患者平均病程为（2.5±1.7）个月。
1.2试剂溶液
我疾控检验室采用抗酸染色法进行涂片制作（萋-尼（Z-N）抗酸染色法），染色液选用3%盐酸乙醇溶液；0.8%石炭酸复红溶液；0.1%亚甲蓝溶液；脱色液。
1.3涂片制作
根据痰标本采集时间，可将标本分为三类：
1.3.1即时痰
就诊时深呼吸后咳出的痰。
1.3.2患者晨起时立即用清水簌口后，咳出的第二口。第三口痰。
1.3.3送痰前一日，患者晚间咳出的痰。
进行AFB检查的医疗机构应提供符合要求的标本收集容器，医务人员在容器上应注明患者姓名，编号，检查项目，痰标本序号，然后交给患者。
患者留取的痰标本，应由检验人员或结核专干目视检查标本质量（特别用于初次诊断的痰标本）：标本量一般在3～5毫升，标本性状属于干酪痰，褐色血痰，黏液痰者为合格的标本；痰标本不合格者，应予以进一步指导并要求重新送检。
用于AFB检查的载玻片要求：一张载玻片只能涂抹一份痰标本；每张玻片只能使用一次，不得清洗后再次使用于AFB涂片检查；应使用以95%的乙醇擦拭，经干燥，清洁，无油污无划痕的新载玻片制备涂片，在玻片1/3处注明实验序号及标本序号，如使用的载玻片一端有磨砂面，可用2B铅笔在磨砂面上直接书写。
1.3.3.1直接涂片法
在玻璃瓶背面进行样本标记，采用专用标本采集竹签采集痰液，痰液量在0.05～0.1ml之间，在玻璃瓶正面右侧三分之二处涂抹均匀，面积平均为10mm*20mm。涂片自然干燥，而后采用紫外线照射，时间为30min，可适当延长，而后采用微火烘烤，将涂片固定，染色后进行镜检。
所有图片制作均要在生物安全柜中进行，防止对环境造成污染。
1.4涂片染色
1.4.1将上述方式制作好的涂片按照要求进行固定。
1.4.2在图片上滴加附红染色液，而后进行微火加热，当图片出现蒸汽时移除涂片，保持染色5min。
1.4.3将载玻片稍微倾斜，采用细流水冲洗载玻片左侧三分之一处，洗去染色液，而后沥干剩余水分。
1.4.4自痰膜上端外缘开始滴加脱色液，直至痰膜红色完全清除。
1.4.5将载玻片稍微倾斜，采用细流水冲洗载玻片左侧三分之一处，洗去脱色液，而后沥干剩余水分。
1.4.5在痰膜上滴加亚甲蓝复染液，时间为30s。
1.4.6将载玻片稍微倾斜，采用细流水冲洗载玻片左侧三分之一处，洗去亚甲蓝复染液，而后沥干剩余水分[2]。
1.4.7待涂片自然干燥后进行镜检。
1.5效果观察
所有涂片均采用双目光学显微镜进行检查，在亮蓝色的背景下除了抗酸分枝杆菌以外的物质均为蓝色，抗酸分枝杆菌呈红色。
1.6评价指标
抗酸分枝杆菌阴性：镜检下连续300个不同的视野均未发现抗酸分枝杆菌存在。
抗酸分枝杆菌菌数：镜检下连续300个不同的视野中发现1-2条抗酸分枝杆菌存在。
抗酸分枝杆菌阳性：镜检下连续100个不同的视野中发现3-9条抗酸分枝杆菌为1+；镜检下连续不同的10个视野中发现1-9条抗酸分枝杆菌为2+；镜检下每个不同的视野中均发现1-9条抗酸分枝杆菌为3+；镜检下每个不同的视野均发现10条以上的抗酸分枝杆菌则为4+。
2.结果
我疾控检验室检测结果：14年，45人次痰检，3人初诊痰涂片阳性，片子共计118张。13年，67人次痰检，32人初诊，其中5人初诊阳性。涂片计111张。12年，29人次，初诊21人次，3人初诊阳性，后经临床证实，所有初见为阳性的患者均为结核类疾病患者，我疾控检验室涂片检测率为100%。
3.讨论
痰结核分枝杆菌的检测是诊断肺结核疾病的重要标准，同时也是最准确的标准。我院采用了抗酸染色法进行涂片染色，此种染色技术操作较为简便，医师在临床中容易掌握，且染色效果非常好[3]。但在实际操作过程中要对1.4.2中提到的微火加热操作格外注意，且不可过度加热，不可使染色剂沸腾，若染色剂沸腾则会导致涂片干涸无法进行脱色。而反复脱色也会导致试剂浪费、空气污染，且导致染色效果较差无法提供准确的检验结果。
总的来说，抗酸染色法在结核疾病的检查中具有非常高的检测结果，但要注意染色操作，提升涂片质量。
【参考文献】
[1]孙边成，王孝君，郭彦昌等.显微镜检查痰中结核分枝杆菌最低检测限的统计推断及方法改进[J].中国卫生检验杂志，2013，23(14):2909-2910.
[2]赵雁林，中国结核病防治规划－痰涂片显微镜检查标准化操作及质量保证手册［M］．北京:中国协和医科大学出版社，2009:7．
[3]中国疾病预防控制中心．中国结核病防治规划痰涂片镜检标准操作及质量保证手册［M］．北京:中国协和医科大学出版社，2009:7-14.