探讨一种新型Wnt替代蛋白激活脑细胞Wnt信号通路的作用研究

论文摘要

目的本文旨在探讨一种新型Wnt替代蛋白（Wnt surrogate,Wnt-S）对大脑中多种细胞Wnt/β-catenin信号通路的作用,以及可能治疗脑卒中的一种新的策略。方法合成Wnt-S片段,利用分子克隆的方法将此片段与载体pcDNA3.1（+）连接,再与大肠杆菌作转化,铺平板,挑单克隆,摇菌提取质粒,用PEI转染法将质粒与HEK 293F细胞进行瞬时转染,取上清然后纯化Wnt-S蛋白,蛋白免疫印迹（Western blot）检测含6x His标签的Wnt-S蛋白,并在HEK 293细胞中进行活性验证。培养HEK 293,hCMEC/D3,HBVP,HA,HOC,NSC,BV2,Neuron,采用免疫荧光染色的方法分别检测这些细胞特异的标志物,实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR）分别检测这些细胞中受体FZD1-10（Frizzled家族）、LRP5/6以及相应标志物的表达情况。用Wnt-S蛋白分别处理这些细胞,实时荧光定量PCR检测Wnt/β-catenin信号通路靶基因Axin2的表达情况。小鼠脑定位SGZ区注入Wnt-S腺病毒,检测神经干细胞的增殖情况。结果1、在HEK 293细胞中,Wnt-S蛋白能激活Wnt/β-catenin信号通路,并随Wnt-S蛋白浓度的增大,Wnt/β-catenin信号通路靶基因Axin2表达逐渐升高。2、在人脑微血管内皮细胞（hCMEC/D3）中,Wnt/β-catenin信号通路在低浓度的Wnt-S蛋白（≤1000ng/ml）条件下不能显著激活,而在高浓度的Wnt-S蛋白（≥1500 ng/ml）条件下能显著激活,且随Wnt-S蛋白浓度的增加,Axin2表达逐渐升高。3、在人脑血管周细胞（HBVP）,人星形胶质细胞（HA）,人少突胶质细胞（HOC）,小鼠神经干细胞（NSC）,大鼠神经元细胞（Neuron）中,随Wnt-S蛋白浓度的增加,Axin2出现先升高后降低的趋势。4、在小鼠小胶质细胞（BV2）中,Wnt-S蛋白不能显著上调Axin2的表达。5、在小鼠大脑中,Wnt-S能显著促进神经干细胞的增殖。结论1、纯化的Wnt-S蛋白具有生物活性。2、在体外实验中,Wnt-S蛋白能激活hCMEC/D3,HBVP,HA,HOC,NSC,Neuron中的Wnt/β-catenin信号通路,但对BV2不起作用。3、在体内实验中,Wnt-S能显著促进小鼠大脑中神经干细胞的增殖。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 曾毅

导师: 梁迅（Simon Xun Liang）

关键词: 信号通路,家族,脑卒中,增殖

来源: 锦州医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,生物学,神经病学

单位: 锦州医科大学

分类号: R743.3;Q78

DOI: 10.27812/d.cnki.glnyx.2019.000135

总页数: 54

文件大小: 6060K

下载量: 21

相关论文文献

• [1].Wnt信号通路调控角膜缘干细胞治疗角膜缘干细胞缺乏症[J]. 中国组织工程研究 2020(07)
• [2].Wnt信号通路在神经病理性疼痛中的作用及机制研究进展[J]. 药学学报 2020(02)
• [3].Wnt信号在年龄相关性黄斑变性组织和小鼠模型中的表达及作用[J]. 基因组学与应用生物学 2020(05)
• [4].Wnt信号通路与前列腺癌相关性的研究进展[J]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版) 2020(04)
• [5].Wnt经典信号通路在结直肠癌中的研究进展[J]. 医学综述 2017(05)
• [6].肝纤维化与Wnt信号转导通路及该通路干预研究现状[J]. 中华中医药学刊 2017(05)
• [7].Wnt蛋白生成抑制剂2对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响[J]. 癌变·畸变·突变 2017(04)
• [8].Wnt信号通路对肝细胞肝癌的影响[J]. 广东医学 2016(04)
• [9].Wnt信号与动脉粥样硬化性心血管疾病研究进展[J]. 心血管病学进展 2020(08)
• [10].Wnt信号通路在脊髓损伤修复中的作用[J]. 世界最新医学信息文摘 2019(96)
• [11].重组人表皮生长因子联合前列地尔对糖尿病溃疡大鼠Wnt/β-连环素信号通路表达的影响[J]. 中国糖尿病杂志 2017(03)
• [12].Wnt信号通路对脑胶质瘤凋亡的影响及其机制[J]. 中国地方病防治杂志 2017(06)
• [13].神经营养因子-3通过Wnt通路促进人骨髓间充质干细胞生长和成骨分化的研究[J]. 中国现代医学杂志 2016(15)
• [14].Wnt信号传导通路与恶性黑素瘤的相关性研究进展[J]. 数理医药学杂志 2014(06)
• [15].Wnt信号途径与常见皮肤肿瘤[J]. 辽宁医学院学报 2015(03)
• [16].垂体腺瘤中Wnt通路抑制因子作用的研究进展[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2015(05)
• [17].Wnt信号参与小鼠颅骨缺损后骨形成过程的初步研究[J]. 第三军医大学学报 2014(08)
• [18].Wnt信号通路与常染色体显性多囊肾病发病关系的研究进展[J]. 临床和实验医学杂志 2011(01)
• [19].Wnt信号与神经干细胞分化[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2010(40)
• [20].经典Wnt信号通路中β-连环蛋白的影响因素[J]. 细胞生物学杂志 2009(02)
• [21].Wnt信号通路与牙胚发育[J]. 牙体牙髓牙周病学杂志 2008(12)
• [22].经典Wnt途径在慢性髓系白血病中的研究进展[J]. 中国实验血液学杂志 2020(01)
• [23].Wnt信号通路转录上调EGFR促进非小细胞肺癌吉非替尼耐药[J]. 天津医药 2020(01)
• [24].Wnt信号通路在空气污染致气道上皮损伤及其修复中的作用研究进展[J]. 环境与职业医学 2020(03)
• [25].Wnt信号介导的肝巨噬细胞与肝祖细胞相互作用在肝纤维化发生与修复中的意义[J]. 临床肝胆病杂志 2020(03)
• [26].Wnt信号途径促进脂肪间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞分化[J]. 中国组织工程研究 2015(32)
• [27].Wnt信号在成年哺乳动物组织更新中的作用[J]. 中国医药指南 2011(15)
• [28].盘龙七片对膝骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用及对Wnt通路的调控机制[J]. 西部医学 2020(08)
• [29].龟鹿二仙胶诱导大鼠骨髓基质干细胞成骨分化作用及对Wnt通路的影响[J]. 中国中西医结合杂志 2017(01)
• [30].基于Wnt/β-链蛋白表达评价丹蛭降糖胶囊对2型糖尿病患者血管的保护作用[J]. 中国临床药理学与治疗学 2017(05)

标签：信号通路论文;  家族论文;  脑卒中论文;  增殖论文;