镰孢菌属实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

镰孢菌属实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

论文摘要

为了建立一种快速检测镰孢菌属的方法。根据Fusarium翻译延伸因子(TEF-1α)基因序列,设计并筛选其特异性引物F8-1/F8-2,能从靶标基因组DNA中特异性扩增出大小为187 bp的目的片段,建立Fusarium荧光定量PCR(RT-PCR)检测体系的灵敏度比常规PCR高104倍,且特异性良好。利用该反应体系检测不同湿度环境下病残体和土壤病残体DNA含量的动态变化。结果表明:病残体及土壤病残体DNA初始拷贝数分别为6. 90×1011,1. 06×1012拷贝数/g,经过温度27℃、80%湿度下处理30 d病残体DNA含量下降至5. 55×108和0拷贝数/g,而在温度27℃、20%湿度下含量分别为8. 04×109,1. 30×109拷贝数/g。因此,建立的Fusarium实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测病残体DNA的含量,为瓜类根腐病的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 试验材料
  •   1.2 引物设计与合成
  •   1.3 引物特异性
  •   1.4 引物灵敏性
  •   1.5 重组质粒的制备
  •   1.6 标准曲线的构建
  •   1.7 RT-PCR定量检测病残体内菌含量动态变化
  •   1.8 数据分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 特异性检测
  •   2.2 灵敏度检测
  •   2.3 标准曲线的建立
  •   2.4 不同空气湿度下病残体内镰孢菌DNA含量动态变化
  •   2.5 不同土壤湿度下病残体内茄病镰孢菌DNA含量动态变化
  • 3 结论与讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陈利达,袁军海,李磊,石延霞,柴阿丽,谢学文,李宝聚

    关键词: 镰孢菌,实时荧光定量,湿度,病残体

    来源: 华北农学报 2019年S1期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

    单位: 中国农业科学院蔬菜花卉研究所,河北北方学院

    基金: 国家重点研发计划项目(2017YFD0200603,2016YFD0201000),农业部园艺作物遗传改良重点开放实验室

    分类号: S432.4

    页码: 296-301

    总页数: 6

    文件大小: 2216K

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