脂肪干细胞来源外泌体通过Wnt/β-catenin信号通路促进脂肪干细胞成骨分化

论文摘要

目的:验证脂肪干细胞分泌的外泌体（ADSCs-exosomes,ADSCs-EXO）能够使脂肪干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）向成骨细胞分化,为今后调控成骨起指导作用。通过对比Wnt/β-catenin信号通路阻断前后的成骨标志物碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）,矿化结节数量及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin胞内表达情况,探讨ADSCs-EXO促进ADSCs的成骨分化与Wnt/β-catenin信号通路的关系。研究方法:采用吸脂方式取人体脂肪,分离培养,经鉴定后培养至P3代,进行成骨诱导,收集上清液,超速离心法提取ADSCs-EXOs。根据实验目的分为如下四组:a:Control组:ADSCs+普通培养液b:实验组:ADSCs+普通培养液+ADSCs-EXO c:阳性对照组:ADSCs+成骨诱导液d:抑制剂组:ADSCs+普通培养液+ADSCs-EXO+100ng/mlDKK1;分别于特定时间测量各组细胞ALP水平,矿化水平,及各组β-catenin表达情况。统计学分析实验数据。结果:1.ALP活性:向P3代ADSCs加入终浓度为15μg/ml的ADSCs-EXO处理12 d时,ALP活性显著升高,当加入DKK1处理细胞12 d时,ALP活性显著下降2.矿化水平:向P3代ADSCs加入终浓度15μg/ml的ADSCs-EXO处理21 d时,可见明显的橘红色矿化结节,虽与阳性对照组相比矿化结节数量少,但相比于抑制剂组矿化结节数量明显较多。3.Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin表达情况:P3代ADSCs与终浓度15μg/ml的ADSCs-EXO共培养7 d时,β-catenin表达量明显升高,而与阳性对照组相比表达量较少,向实验组加入100 ng/mlDKK1抑制剂后,β-catenin表达量较实验组显著降低。结论:体外超速离心法能够从ADSCs中成功提取ADSCs-EXO。ADSCs-EXO能够促进ADSCs的成骨分化。ADSCs-EXO主要通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进ADSCs的成骨分化。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 崔梦莹

导师: 郭澍

关键词: 脂肪干细胞,外泌体,成骨分化

来源: 中国医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 中国医科大学

分类号: R329.2

DOI: 10.27652/d.cnki.gzyku.2019.000932

总页数: 49

文件大小: 2156K

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