胡笳[1]2003年在《原位逆转录PCR技术检测多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAcT2）在肿瘤细胞及肿瘤组织中的差异表达》文中研究说明目的 本研究探索建立原位逆转录聚合酶链式反应方法并用于研究多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAcT-2)在肿瘤组织与肿瘤细胞中差异表达研究。方法 以原位逆转录聚合酶链式反应(In situ reverse transcription polymerase chain reaction,In situ RT-PCR)为主要研究方法。结果 对胃癌组织及胃癌细胞株SGC-7901进行ppGalNAcT-2表达谱的研究表明胃癌细胞株SGC-7901及胃癌组织中ppGalNAcT-2均有表达，其中在细胞株中大约有30％细胞表达，而胃癌组织中尚未癌变的胃腺体中ppGalNAcT-2表达高于癌变腺体组织，癌旁组织未见表达。结论 研究结果说明在胃癌组织中癌旁组织，癌变胃腺体组织与尚未癌变的胃腺体中ppGalNAcT-2的表达是有差异的，在胃癌细胞株中也只有较少一部分细胞表达。胃腺体组织癌变后ppGalNAcT-2的低表达可能与肿瘤浸润转移具有相关性，但尚待进一步的扩大研究。此外，本研究表明原位PCR技术用于探索ppGalNAcT-2在肿瘤组织及细胞中的差异表达是可行的。
范雁[2]2003年在《多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族（ppGalNAcTs）在不同肿瘤细胞中mRNA表达谱研究及辐射与中药影响的初步研究》文中研究说明目的：检测多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族的mRNA表达，并初步了解该酶在肿瘤的发生、发展等过程中的作用及辐射与中药的影响。方法和内容：采用RT-PCR方法，检测(1)多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶1、2、9(ppGalNAcT1、T2、T9)在不同肿瘤细胞中的mRNA表达；(2)肿瘤细胞经γ射线照射后多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2(ppGalNAcT-2)的mRNA表达变化及几种药物对肿瘤细胞受照射后多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2mRNA表达的影响。结果：通过不同肿瘤细胞ppGalNAcT-2mRNA表达差异比较，脑神经胶质瘤细胞株SHG44中的表达甚低，而胃癌细胞株SGC-7901、白血病细胞株K562很高，其次为卵巢癌细胞(CD40+)，而多发性骨髓瘤细胞株表达较少。其大小次序为白血病细胞株＞胃癌细胞株＞卵巢癌细胞株＞多发性骨髓瘤细胞株＞NIH3T3成纤维细胞株和脑神经胶质瘤细胞株，这结果可能与ppGalNAcT-2为合成O-糖链的关键酶且O-糖链主要存在于粘蛋白相符。另外ppGalNAcT-1在各种细胞株中呈低表达，ppGalNAcT-9则在卵巢癌细胞株和白血病细胞株中几乎没有表达。肿瘤细胞经γ射线照射后ppGalNAcT-2的表达有所降低，且与照射剂量呈负相关性；加入不同的药物后，受照的肿瘤细胞中ppGalNAcT-2的表达增加，提示这些药物对辐照具有生物防护作用。结论：以上实验结果说明ppGalNAcT-1、9在一些肿瘤细胞中的表达水平普遍较低，而ppGalNAcT-2在不同肿瘤细胞中的表达均较高且有差异，由内胚层来源的细胞如胃癌细胞株中ppGalNAcT-2的表达较高，外胚层来源的细胞如神经胶质瘤细胞株中ppGalNAcT-2表达量较低；K562细胞经照射后ppGalNAcT-2的表达量减多肚:N一乙酞氨基半乳糖转移酶家族(PPG洲AcTs)在不同肿瘤细胞中mRNA表达谱研究及辐射与中药影响的初步研究中文摘要少，说明辐照可以使PPGalNAcT一2的表达受到抑制，加入某些药物后PPGalNAcT-2的表达量又有所回升，而我们同时进行的基质金属蛋白酶(MMPS)的表达谱研究结果正好相反，至少证明PPGalNAcT一2与肿瘤的一些生物学特性有关，如肿瘤的浸润与转移等。通过这一开创性的工作，初步为寻找GalNAcT一2及MMPS的特异性抑制剂或激活剂打下基础，也为临床上肿瘤的诊断、治疗等提供了实验依据。
岳爱环[3]2008年在《多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAc-T2）对胃癌细胞SGC7901黏附迁移的影响》文中进行了进一步梳理目的:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族(ppGalNAcTs, EC2.4.1.4.1)是催化O-糖链起始反应的第一步酶,将UDP-GalNAc上的GalNAc基团转移至蛋白质多肽链上特定序列中的Thr或Ser的羟基上从而合成GalNAcα-O-Ser/Thr多肽,其活性与肿瘤密切有关。侵袭和迁移是肿瘤生长发展过程中密不可分的相关过程,侵袭行为是肿瘤转移的内在因素。如何穿越生物学屏障是肿瘤细胞侵袭和转移动态过程的关键步骤,在此过程中癌细胞与基底膜或细胞外基质粘附,然后释放和激活多种蛋白水解酶降解基底膜和细胞外基质,在趋化因子、自分泌以及旁分泌生长因子等作用下迁移到达靶组织,克隆增殖从而形成转移灶。本文旨在研究N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)对胃癌细胞SGC7901黏附迁移的影响。方法:1、将已构建好的ppGalNAc-T2正义载体(pEGFP-C1-T2)、空载体(pEGFP-C1)、干扰载体(SCR-T2)转染人胃腺癌细胞SGC7901,采用逆转录PCR(RT-PCR)检测ppGalNAc-T2及肿瘤浸润转移相关因子在mRNA水平表达情况;Western-blot法检测肿瘤浸润转移相关蛋白(ppGalNAc-T2,MMP2、MMP14、TGF-β1)表达情况;MTT检测ppGalNAc-T2对SGC7901增殖的影响;流式细胞仪检测ppGalNAc-T2对细胞周期的影响;2、以纤连蛋白、基质胶和透明质酸为作用对象,检测不同亚型胃癌细胞与细胞外基质粘附能力;利用Transwell小室,在膜上铺基质胶以纤连蛋白为趋化因子构建重组基底膜,检测胃癌细胞侵袭人工基底膜的能力。裸小鼠BALB/C-nu/nu,20只,雄性,4-6周,随机分为四组。取处于对数生长期的细胞,将不同亚型胃癌细胞SGC790制成1×107/200μL浓度的细胞悬液,通过右腋下消毒后进行皮下接种入裸鼠体内,每点200μL,制作人胃癌裸鼠移植瘤转移模型,统计学分析成瘤率和瘤体重量,取肿瘤组织进行HE染色分析。结果:转染正义载体ppGalNAc-T2的SGC7901相对转染干扰载体的SGC7901,相关因子TGF-β1、MMP2的表达在RT-PCR水平呈负相关,对MMP14无明显影响,Western-blot结果与RT-PCR结果一致,MTT和流式结果表明ppGalNAc-T2的高表达抑制细胞增殖.ppGalNAc-T2的高表达对纤连蛋白、基质胶和透明质酸的黏附能力下降,但其侵袭迁移能力没有变化。裸鼠成瘤率没有统计学差异(P>0.05),但瘤体的重量差异具有统计学意义(P<0.05).结论:ppGalNAc-T2的低表达可能与胃癌浸润转移具有相关性。
参考文献：
[1]. 原位逆转录PCR技术检测多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAcT2）在肿瘤细胞及肿瘤组织中的差异表达[D]. 胡笳. 苏州大学. 2003
[2]. 多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族（ppGalNAcTs）在不同肿瘤细胞中mRNA表达谱研究及辐射与中药影响的初步研究[D]. 范雁. 苏州大学. 2003
[3]. 多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAc-T2）对胃癌细胞SGC7901黏附迁移的影响[D]. 岳爱环. 苏州大学. 2008