导读:本文包含了噬肺军团菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:RPA,LFD,快速检测,致病微生物
噬肺军团菌论文文献综述
智安桐[1]（2017）在《沙门氏菌和噬肺军团菌的RPA检测方法研究》一文中研究指出世界范围内,尤其我国部分地区大气污染严重,为水体和大气中滋生的细菌提供了很好的温床,对人类健康造成了巨大的威胁。其中,军团菌多次被检测出存在于冷却塔及公共场所的空调系统、水系统中,而沙门氏菌则会通过动物粪便或动物尸体污染江河湖海等自然水源,是严重影响人类生命安全的两种致病菌。噬肺军团菌引起的军团菌肺炎症状不明显,易被误诊漏诊,而它的传播方式导致其极易流行,且病死率较高。近几年,军团病发病率在世界范围内呈增长态势,在我国也有越来越多的省份和地区出现军团菌病例发生的报告,及时、准确地发现诊断军团菌成了我们预防和诊治军团病的重要前提,本课题建立的噬肺军团菌重组酶聚合酶扩增快速检测方法(RPA)为此提供了更多的可能性。如今,由于各种食源性微生物的抗药性、适应性增强,致病菌导致的食物中毒案例依然屡见不鲜,是国内外卫生安全组织长期关注的重要课题。而沙门氏菌在世界各地的食物中毒病例中,都占到了绝对压倒于其他菌种的比例,是食品安全检测的一大关键目标。人们误食被沙门氏菌污染的水源或食物很容易引起感染,因此对于沙门氏菌快速检测技术手段的不断探究与开发对世界性的食品安全都有重大意义。本课题针对噬肺军团菌mip基因(GenBank登录号:AE017354)和沙门氏菌fimY基因(GenBank登录号:JQ665438.1)的相关序列,构建标准质粒,设计相关序列的RPA引物,通过平行试验,对设计的几组引物进行筛选。确定引物后,对RPA反应体系进行优化,包括反应时间的预估、反应温度的优化、Mg离子浓度的优化,优化后的体系如下:Buffer(含dNTPs)12.5μLLEG SIGMA FP 1 μL、LEG SIGMA RP 1 μL、Template 1 μL、Enzyme 5 μL、280 mM MgAC 1.25μL、SDw3.25μL,反应温度37℃,反应时长20 min。通过特异性实验比对,两组RPA引物和体系具有较强的特异性,专有检测对应菌种,未发现与其他致病微生物发生交叉反应的现象。在检测中两组引物的灵敏度极佳,噬肺军团菌的检出限为1.6×102CFU/mL,沙门氏菌的检出限为1.29×101-1.29×102CFU/mL,且与qPCR结果一致。分别在杭州市不同地区,采样搜集自然水、公共用水、空调排水等水样,利用RPA-LFD、qPCR法和传统培养法(参照化工行业标准HG/T 4323-2012;沙门氏菌参照国家标准GB 47894-2016)进行检测,作为对比可得知所有的水样中均未检测出沙门氏菌和噬肺军团菌。本研究结合重组酶聚合酶介导等温扩增技术RPA和侧向流动免疫技术LFD,分别建立了噬肺军团菌和沙门氏菌两种致病有害菌的RPA快速检测方法。在特异性高、灵敏度高、方便快捷、对设备技术要求低的RPA技术基础上,利用侧向流动技术LFD,结合于可用肉眼直接观察的试纸条,将RPA的检测结果快速直观地展现出来,为检测扩增产物提供了高效直接的新方法,开启了更加直接、快速、简便检测致病菌的新篇章。该技术手段,为检测有害致病菌的检测展开了新局面,特别是为偏远贫困地区的检测部门提供了新的可能性和工作思路。(本文来源于《中国计量大学》期刊2017-05-01）
葛建宁[2]（2007）在《噬肺军团菌编码的泛素连接酶的生物化学性质及生物学功能研究》一文中研究指出噬肺军团菌(Legionella pneumophila)在感染宿主细胞过程中，能够干扰宿主细胞的膜泡运输体系，募集包括源于内质网的光滑膜泡、线粒体和核糖体等细胞器，并逃避吞噬泡的成熟过程，避免与溶酶体的融合降解，随后在经过修饰的吞噬泡内复制增殖并裂解宿主细胞，进而导致疾病的产生。噬肺军团菌的Dot／Icm四型分泌系统对于其对宿主细胞内的感染非常重要，该四型分泌系统突变的噬肺军团菌进入宿主细胞后所形成的吞噬泡很快经内体成熟途径与溶酶体融合而被降解。Dot／Icm系统可以分泌许多细菌效应蛋白进入宿主细胞内，但是目前对这些效应蛋白还知之甚少。本课题通过对噬肺军团菌基因组数据的生物信息学分析，我们发现噬肺军团菌基因组编码的3个蛋白Lpg2830、Lpg2144和Lpg0171分别含有真核细胞所特有的U-Box(Lpg2830)和F-Box(Lpg2144和Lpg0171)结构域，这两个结构域均广泛存在于真核细胞的泛素系统中，能够单独或与其它细胞成分形成复合物催化泛素修饰反应。在此，通过实验我们验证了Lpg2830在体内体外均拥有泛素连接酶的活性，可以利用UbcH5进行自泛素化修饰，Lpg2144与Lpg0171均能够形成SCF复合物，SCF复合物在真核细胞中能够将底物泛素化修饰并被蛋白酶体识别降解。Lpg2830、Lpg2144与Lpg0171均能够通过四型分泌系统进入宿主细胞，它们通过各自C端的不同定位信号定位于特定的细胞结构，在Cos7细胞中Lpg2830与Lpg0171定位于核周内质网结构，而Lpg2144则定位于细胞质膜上，尽管分别缺失这叁个基因对于噬肺军团菌的胞内生长并没有明显影响，但是以上数据表明它们极可能通过干预或者模拟宿主细胞的泛素修饰体系来协助噬肺军团菌在宿主细胞内的生存与复制。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2007-05-01）
噬肺军团菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
噬肺军团菌(Legionella pneumophila)在感染宿主细胞过程中，能够干扰宿主细胞的膜泡运输体系，募集包括源于内质网的光滑膜泡、线粒体和核糖体等细胞器，并逃避吞噬泡的成熟过程，避免与溶酶体的融合降解，随后在经过修饰的吞噬泡内复制增殖并裂解宿主细胞，进而导致疾病的产生。噬肺军团菌的Dot／Icm四型分泌系统对于其对宿主细胞内的感染非常重要，该四型分泌系统突变的噬肺军团菌进入宿主细胞后所形成的吞噬泡很快经内体成熟途径与溶酶体融合而被降解。Dot／Icm系统可以分泌许多细菌效应蛋白进入宿主细胞内，但是目前对这些效应蛋白还知之甚少。本课题通过对噬肺军团菌基因组数据的生物信息学分析，我们发现噬肺军团菌基因组编码的3个蛋白Lpg2830、Lpg2144和Lpg0171分别含有真核细胞所特有的U-Box(Lpg2830)和F-Box(Lpg2144和Lpg0171)结构域，这两个结构域均广泛存在于真核细胞的泛素系统中，能够单独或与其它细胞成分形成复合物催化泛素修饰反应。在此，通过实验我们验证了Lpg2830在体内体外均拥有泛素连接酶的活性，可以利用UbcH5进行自泛素化修饰，Lpg2144与Lpg0171均能够形成SCF复合物，SCF复合物在真核细胞中能够将底物泛素化修饰并被蛋白酶体识别降解。Lpg2830、Lpg2144与Lpg0171均能够通过四型分泌系统进入宿主细胞，它们通过各自C端的不同定位信号定位于特定的细胞结构，在Cos7细胞中Lpg2830与Lpg0171定位于核周内质网结构，而Lpg2144则定位于细胞质膜上，尽管分别缺失这叁个基因对于噬肺军团菌的胞内生长并没有明显影响，但是以上数据表明它们极可能通过干预或者模拟宿主细胞的泛素修饰体系来协助噬肺军团菌在宿主细胞内的生存与复制。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
噬肺军团菌论文参考文献
[1].智安桐.沙门氏菌和噬肺军团菌的RPA检测方法研究[D].中国计量大学.2017
[2].葛建宁.噬肺军团菌编码的泛素连接酶的生物化学性质及生物学功能研究[D].中国协和医科大学.2007