过表达ATAD3A诱导大鼠正常肝干细胞发生上皮-间质转化

过表达ATAD3A诱导大鼠正常肝干细胞发生上皮-间质转化

论文摘要

目的探讨过表达ATP酶家族AAA结构域蛋白(ATPase family AAA domain protein,ATAD3A)后对大鼠肝脏干细胞上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)、迁移和侵袭能力的影响。方法体外培养大鼠肝干细胞系(WBF-344),分别转染含过表达ATAD3A基因的慢病毒(ATAD3A过表达组)和不含过表达ATAD3A基因的载体(空载对照组),以不做处理的细胞作为正常对照组。显微镜下观察细胞形态变化,细胞划痕和Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力,RT-qPCR法和Western blot法检测EMT标志物和转录因子的基因和蛋白表达水平,体外裸鼠皮下成瘤实验验证肝干细胞恶性转化程度。结果与2个对照组比较,ATAD3A过表达组:①细胞由卵圆形向长条形和梭形的间质细胞形态特征转变;②细胞迁移和侵袭能力得到明显增强(P<0.05);③E-cadherin的基因和蛋白表达明显降低,而N-cadherin的基因和蛋白表达明显升高(P<0.05);④转录因子ZEB1和ZEB2的表达也显著增加(P<0.05)。但体外成瘤实验未能观察到肿瘤块的形成。结论过表达ATAD3A后能诱导大鼠肝干细胞EMT的发生。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 正常肝干细胞的培养
  •     1.2.2 稳定转染细胞株的构建
  •     1.2.3 细胞形态观察
  •     1.2.4 实时荧光定量PCR检测基因的表达
  •     1.2.5 Western blot 检测蛋白表达
  •     1.2.6 划痕实验检测细胞迁移能力
  •     1.2.7 Transwell实验检测细胞侵袭能力
  •     1.2.8 裸鼠皮下成瘤检测恶性转化程度
  •   1.3 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 成功构建过表达ATAD3A细胞株
  •   2.2 过表达ATAD3A后细胞形态发生改变
  •   2.3 过表达ATAD3A后增强细胞迁移能力
  •   2.4 过表达ATAD3A后增强细胞侵袭能力
  •   2.5 EMT相关表面标志物表达发生改变
  •   2.6 EMT相关转录因子发生改变
  •   2.7 裸鼠皮下成瘤实验结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 冯亚星,周龙甫,王一涵,古瑞,李薇,张耀雷,李婷,刘卫辉

    关键词: 酶家族结构域蛋白,肝干细胞,上皮间质转化,侵袭,迁移

    来源: 第三军医大学学报 2019年24期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 肿瘤学

    单位: 西南交通大学医学院,中国人民解放军西部战区总医院中心实验室

    基金: 四川省科技厅应用基础重点项目(2019YJ0586)~~

    分类号: R735.7

    DOI: 10.16016/j.1000-5404.201907114

    页码: 2417-2424

    总页数: 8

    文件大小: 13836K

    下载量: 91

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