胡萝卜WRKY69基因(DcWRKY69)的克隆及其对不同植物生长调节剂的响应

论文摘要

以胡萝卜品种‘黑田五寸’（Daucus carota var.sativa‘Heitian Wucun’）为研究对象,采用RT-PCR技术从叶片cDNA中克隆获得DcWRKY69基因片段,并对该基因及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;同时,采用RT-qPCR技术比较了0.1 mmol·L-1茉莉酸甲酯（MeJA）、1.0 mmol·L-1水杨酸（SA）、0.1 mmol·L-1赤霉素（GA3）和0.1 mmol·L-1脱落酸（ABA）处理12 h内叶中DcWRKY69基因相对表达量的差异。结果表明:DcWRKY69基因包含1个长度为783 bp的开放阅读框（ORF）,编码260个氨基酸;DcWRKY69转录因子氨基酸序列在第52至第110位含有1个WRKY结构域,其锌指结构类型为C2H2型,理论相对分子质量为30 030,理论等电点为pI 4.78;该转录因子含有34个磷酸化位点,无信号肽和跨膜结构,亲水性氨基酸较多,且酸性氨基酸比例最高（27%）;该转录因子的二级结构由α-螺旋、β-折叠、延伸链和随机卷曲组成,比例分别为21.92%、4.23%、11.92%和61.92%。序列比对和系统进化树分析结果表明:WRKY转录因子在植物进化过程中具有高度的保守性。RT-qPCR分析结果表明:经MeJA、SA、GA3和ABA处理后,DcWRKY69基因相对表达量的变化趋势不同,分别在处理后8、12、1和4 h达到峰值,且显著高于对照（处理0 h）。研究结果显示:DcWRKY69转录因子属于Ⅱ类WRKY转录因子,为亲水性蛋白,且可能属于非分泌蛋白;DcWRKY69基因可能参与胡萝卜对不同植物生长调节剂的响应过程,但其对不同植物生长调节剂的响应模式存在差异。

论文目录

1 材料和方法

1.1 材料

1.2 方法

1.2.1 总RNA提取及cDNA第1链合成

1.2.2 基因克隆

1.2.3 序列分析

1.2.4 植物生长调节剂处理方法及基因表达分析

2 结果和分析

2.1 DcWRKY69基因的克隆

2.2 DcWRKY69转录因子的氨基酸序列分析

2.2.1 保守域预测

2.2.2 同源性比对分析

2.2.3 系统进化树分析

2.2.4 氨基酸组成及理化性质分析

2.2.5 亲水性和疏水性分析

2.3 DcWRKY69转录因子的预测分析

2.3.1 信号肽及跨膜结构预测分析

2.3.2 磷酸化位点预测分析

2.3.3 二级结构预测分析

2.4 不同植物生长调节剂对DcWRKY69基因表达的影响

3 讨论和结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张榕蓉,王雅慧,李彤,丁旭,徐志胜,熊爱生

关键词: 胡萝卜,转录因子,基因克隆,序列分析,植物生长调节剂,基因表达

来源: 植物资源与环境学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,园艺

单位: 南京农业大学园艺学院作物遗传与种质创新国家重点实验室农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室

基金: 国家自然科学基金资助项目(31872098),江苏省自然科学基金杰出青年基金项目(BK20130027),江苏高校优势学科建设项目(PAPD)

分类号: Q943.2;S631.2

页码: 1-10

总页数: 10

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胡萝卜WRKY69基因(DcWRKY69)的克隆及其对不同植物生长调节剂的响应

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