导读:本文包含了人胰腺文库论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:HBsAg,诱饵载体,胰腺,cDNA文库
人胰腺文库论文文献综述
王晓春,许礼发,李朝品[1]（2012）在《HBsAg诱饵载体的构建、表达及人胰腺cDNA文库的扩增、纯化和转化》一文中研究指出目的构建HBsAg诱饵真核表达载体,并在AH109酵母菌中进行表达,同时扩增、纯化、鉴定及转化人胰腺cDNA文库。方法通过PCR扩增HBsAg基因,克隆到pGEM-T载体,测序正确后酶切并连接至表达载体pGBKT7中,转化酵母菌AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp/Kana)上筛选阳性菌落,提取重组蛋白,经SDS-PAGE电泳后进行Western blot分析。扩增、纯化人胰腺cDNA文库并进行酶切鉴定及生物信息学分析,醋酸锂法将其转入Y187酵母菌。结果成功构建酵母表达载体pGBKT7-HBsAg、SDS-PAGE和Western blot显示重组蛋白在酵母细胞中正确表达;成功构建人胰腺cDNA文库,其容量为4×109 CFU/L,插入片段大小为0.5～2.0kb,长度不均,重组率为100%。结论成功构建HBsAg真核载体并在AH109酵母菌中表达,同时获得高质量的胰腺cDNA文库并转化入Y187酵母菌,为通过酵母双杂交筛选与HBsAg相互作用蛋白基因奠定了基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2012年05期）
任娜,吴璐,李贲,张婷,田梅梅[2]（2011）在《人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒NS4B结合蛋白基因的筛选》一文中研究指出目的应用酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白NS4B相互作用的结合蛋白的编码基因。方法扩增人胰腺细胞cDNA文库进行纯化鉴定,并将文库质粒转化酵母菌株Y187。诱饵质粒pGBKT7-NS4B转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落。应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-H is/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序。测序结果进行序列比对。结果成功构建人胰腺cDNA文库以及pGBKT7-HCV NS4B重组质粒,筛选出7种与HCV NS4B蛋白相结合的蛋白基因。结论筛选出的与HCV NS4B蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中,部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关。(本文来源于《胃肠病学和肝病学杂志》期刊2011年05期）
温少芳,张锦前,孙荣华,李卓,高萍[3]（2011）在《人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒NS4B结合蛋白基因的筛选》一文中研究指出目的从人胰腺细胞cDNA文库中,采用酵母双杂交方法筛选HCV NS4B包膜蛋白的相互作用蛋白。方法人胰腺细胞cDNA文库先进行扩增,随后纯化及鉴定,然后将鉴定好的人胰腺细胞cDNA文库质粒转化入酵母菌株Y187。构建pGBKT7-NS4B作为诱饵质粒,随之转化酵母菌株AH109,用色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)筛选阳性菌落。配合两种重组酵母菌株AH109与Y187,用四缺培养基及X-α-gal筛选蓝色酵母菌落,提取相应质粒,电转化感受态菌DH5α后再提取质粒,测序仪测序,结果使用PUBMED进行序列比对。结果成功构建pGBKT7-HCV NS4B重组质粒,并从人胰腺cDNA文库中筛选出7种与HCV NS4B蛋白相结合的蛋白基因,包括CDK5RAP3、辅脂肪酶、胰石蛋白、凝乳蛋白、弹性蛋白酶2A、糜蛋白酶和胆盐刺激酯酶。结论 HCV NS4B蛋白可能通过与所筛选出前述蛋白中参与代谢过程的相关蛋白结合,影响糖、脂类代谢过程。(本文来源于《中华临床医师杂志(电子版)》期刊2011年09期）
张婷,任娜,田梅梅,李贲,张锦前[4]（2010）在《丙型肝炎病毒E2结合蛋白基因在人胰腺细胞cDNA文库中的筛选》一文中研究指出目的:筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E2相互作用的结合蛋白的编码基因.方法:扩增人胰腺细胞cDNA文库进行纯化鉴定,并将文库质粒转化酵母菌株Y187.诱饵质粒pGBKT7-E2转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在4缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的4缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序.测序结果进行序列比对.结果:成功构建人胰腺cDNA文库以及pGB-KT7-HCVE2重组质粒,筛选出8种与HCVE2蛋白相结合的蛋白基因,分别为:胰凝乳蛋白酶原B1前体、胰蛋白酶原、胆盐刺激酯酶、CDK5、羧肽酶B1、人类v-Ki-ras2、鼠Kirsten肉瘤、弹性蛋白酶3A及辅脂肪酶.结论:筛选出的与HCVE2蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中,部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关.(本文来源于《世界华人消化杂志》期刊2010年36期）
张维燕,张锦前,王琦,李国力,王晓春[5]（2008）在《酵母双杂交技术对人胰腺cDNA文库中HBcAg结合蛋白基因的筛选》一文中研究指出目的:应用酵母双杂交技术,筛选人胰腺cDNA文库中与HBV核心抗原结合的蛋白的基因.方法:扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定,将其转化至酵母菌Y187;诱饵质粒pGBKT7-HBcAg转化酵母菌AH109并筛选鉴定.应用酵母双杂交系统3进行配合,在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade培养基和含X-gal的SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade培养基上进行双重筛选,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠埃希菌DH5α,提取质粒并测序,对测序结果进行生物信息学分析.结果:人胰腺cDNA文库的构建以及pGBKT7-HBcAg质粒转化AH109酵母菌株均获成功,并从人胰腺cDNA文库中筛选出9个与HBcAg蛋白相结合的蛋白基因,分别与以下已知的9种编码蛋白基因序列同源:人胰脂肪酶(PNLIP)、人胆盐刺激酯酶(CEL)、人胰凝乳蛋白C(CTRC)、人胰蛋白酶原、人羧肽酶B1(CPB1)、人线粒体全基因组、人胰弹性酶2A、人辅脂肪酶(CLPS)和人核糖体蛋白(RPL10A).结论:筛选出的与HBcAg蛋白相结合的蛋白基因主要与胰腺外分泌功能相关,HBV感染可能通过与胰腺所分泌的糖、脂类代谢相关的酶类结合,而引发代谢性疾病.(本文来源于《世界华人消化杂志》期刊2008年16期）
张晨宇[6]（2008）在《用酵母双杂交技术筛选HCV核心蛋白与人胰腺cDNA文库结合蛋白基因》一文中研究指出[目的]:用酵母双杂交共转染和配合技术筛选经纯化鉴定的已知人胰腺cDNA文库与丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心蛋白(core)相互作用的蛋白的编码基因,为研究HCVcore蛋白基因在HCV感染所致MS中的作用提供了实验依据。[方法]:常规扩增人类胰腺cDNA文库并纯化、鉴定。通过多聚酶链反应(PCR)法扩增HCVcore基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒“pGBKT7—core”。首先应用共转染技术,把诱饵质粒与文库质粒共同转染酵母细胞AH109,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行双重阳性菌落筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序,进行生物信息学分析。然后本研究又应用了配合技术,将文库质粒转染酵母细胞Y187,在亮氨酸缺陷型培养基(SD/-Leu)上筛选阳性菌落。pGBKT7-core转染酵母细胞AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落。将两种酵母细胞进行配合,同样也要在四缺培养基和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选,提取阳性酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序,测序结果进行生物信息学分析。[结果]:得到预转化的人胰腺cDNA文库,其滴度为4×10~7,纯化后的文库质粒浓度约为0.34mg/ml。用EcoRⅠ,X hoⅠ双酶切鉴定cDNA文库的多样性,结果显示插入片断大小不一。用共转染技术,筛选出6种与HCVcore蛋白结合蛋白基因,包括人类胰蛋白酶1,人类羧肽酶A1,人类胰凝乳蛋白C,人类富含赖氨酸卷曲螺旋1,人类锌指基质蛋白1,人类未知特征的骨髓蛋白BM044。用配合技术,筛选出11种与HCVcore蛋白相结合蛋白基因,包括人类辅脂肪酶、人类驱动蛋白家族3B、人类羧肽酶B1、人类线粒体蛋白基因、人类胰蛋白酶1、人类胰蛋白酶2等。[结论]:本研究用酵母双杂交共转染和配合技术筛选人胰腺cDNA文库,分别获得6种和11种与HCVcore蛋白相结合蛋白基因。该结果为进一步探讨HCV感染导致MS提供了新思路,而且还证实了配合技术优于共转染技术,说明了酵母双杂交系统的进步和发展。(本文来源于《安徽理工大学》期刊2008-05-01）
蒋业贵,李兆申,屠振兴,龚燕芳,金晶[7]（2004）在《人胰腺癌抑制消减cDNA文库的构建》一文中研究指出目的 应用抑制消减杂交技术(SSH)构建胰腺癌和正常胰腺组织间差异表达的抑制消减 cDNA文库。方法 分别提取胰腺癌(tester)和癌旁正常胰腺组织(driver)中的总RNA和mRNA,合成 双链cDNA,经Rsa 1酶切后,将胰腺癌双链cDNA分为两组,分别加上不同的接头,再与正常胰腺组织 cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,分离出胰腺癌差异表达基因的cDNA片段。将该差异表达 片段克隆至T／A载体,并转化大肠杆菌TOP 10F',经蓝白斑筛选后,再用PCR方法筛选阳性克隆,从而 构建胰腺癌抑制消减cDNA文库。结果 文库扩增后得到257个白色克隆,随机挑取50个阳性克隆进行 PCR扩增分析,其中47个克隆有插入片段,克隆阳性率为94％。片段大小主要集中在300~600bp之间。结 论成功构建了人胰腺癌抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆胰腺癌特异性表达基因奠定了基础。(本文来源于《胰腺病学》期刊2004年04期）
人胰腺文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的应用酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白NS4B相互作用的结合蛋白的编码基因。方法扩增人胰腺细胞cDNA文库进行纯化鉴定,并将文库质粒转化酵母菌株Y187。诱饵质粒pGBKT7-NS4B转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落。应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-H is/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序。测序结果进行序列比对。结果成功构建人胰腺cDNA文库以及pGBKT7-HCV NS4B重组质粒,筛选出7种与HCV NS4B蛋白相结合的蛋白基因。结论筛选出的与HCV NS4B蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中,部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人胰腺文库论文参考文献
[1].王晓春,许礼发,李朝品.HBsAg诱饵载体的构建、表达及人胰腺cDNA文库的扩增、纯化和转化[J].中国病原生物学杂志.2012
[2].任娜,吴璐,李贲,张婷,田梅梅.人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒NS4B结合蛋白基因的筛选[J].胃肠病学和肝病学杂志.2011
[3].温少芳,张锦前,孙荣华,李卓,高萍.人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒NS4B结合蛋白基因的筛选[J].中华临床医师杂志(电子版).2011
[4].张婷,任娜,田梅梅,李贲,张锦前.丙型肝炎病毒E2结合蛋白基因在人胰腺细胞cDNA文库中的筛选[J].世界华人消化杂志.2010
[5].张维燕,张锦前,王琦,李国力,王晓春.酵母双杂交技术对人胰腺cDNA文库中HBcAg结合蛋白基因的筛选[J].世界华人消化杂志.2008
[6].张晨宇.用酵母双杂交技术筛选HCV核心蛋白与人胰腺cDNA文库结合蛋白基因[D].安徽理工大学.2008
[7].蒋业贵,李兆申,屠振兴,龚燕芳,金晶.人胰腺癌抑制消减cDNA文库的构建[J].胰腺病学.2004