导读:本文包含了细胞因子组合论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,干细胞,细胞因子,组合,诱导性,因子,纤维。
细胞因子组合论文文献综述
苏永发[1]（2018）在《肝富集转录因子和异源物核受体的优化组合及对肝细胞功能的影响》一文中研究指出目的:本研究通过构建含肝细胞尿素代谢关键酶和几种主要CYP基因核心启动子和增强子区域共有的肝富集转录因子(LETF)或异源物核受体的慢病毒表达载体,筛选对肝细胞氨代谢(尿素循环通路)和药物代谢均有重要影响的最优LETF+异源物核受体组合,构建能够同时应用于BAL和肝毒性药物检测的功能突出的肝细胞。方法:1、采用腺病毒策略,利用其瞬时表达的特性对几种常见的LETFs(C/EBPβ、HNF3β、HNF4α、HNF1α、HNF6和PGC1α)进行多重组合筛选,通过实时定量PCR检测五种主要的尿素循环关键酶(Arg1、OTC、CPS1、ASS和ASL)mRNA表达水平,从而筛选出对五种尿素循环关键酶正向调控较优的肝富集转录因子组合。2、在之前组合的基础上,加入涉及对CYP酶合成进行调控的异源物核受体(CAR和PXR),再次进行多重组合筛选,通过实时定量PCR检测五种尿素循环关键酶和五种细胞色素氧化酶P450(CYP1A1、CYP2B6、CYP29、CYP2D6和CYP3A4)mRNA的表达水平,同时采用WB对它们的蛋白合成水平,最终确定对尿素循环和药物代谢均有显着影响的LETFs+异源物核受体的最优组合。3、利用慢病毒稳定表达的特性,构建过表达优化组合LETFs和异源物核受体的肝细胞株。4、检测肝源性尿素生成量,验证优化重组肝细胞株的尿素代谢功能,同时采用CYP酶试剂盒间接检测重组肝细胞株的CYP功能,最终确定LETFs和异源物核受体的优化组合对肝细胞功能的影响情况。结果:1、结合前期实验小组对ARG1、CPS1、OTC叁种关键酶启动子的研究,结合现有文献资料,获得与转录调控密切相关的肝富集转录因子C/EBPβ、HNF3β、HNF4α、HNF1α、HNF6和PGC1α和异源物核受体PXR和CAR,并将其分别构建于腺病毒表达载体。2、将34种腺病毒组合分别瞬时转染于HepG2细胞中,实时荧光定量检测五种尿素关键酶mRNA的表达(结果以2~(-△△Ct)值表示)。结果显示,在不同转录因子组合的共同作用下,五种尿素酶的表达情况都各有不同。综合多方面考虑,初步筛选排除掉一些明显不合适的组合后,再对剩余的组合各自的五种酶实际qPCR表达值进行分析,综合优选出了叁种合适的组合用于下一步的实验,分别为“C/EBPβ+HNF3β+HNF4α”、“C/EBPβ+HNF3β+HNF1α”、“C/EBPβ+HNF4α+HNF6”。3、为充分考虑到CYP酶的表达情况,将上述叁个转录因子腺病毒组合分别与核受体PXR和CAR进行11种组合,分别再次转染HepG2细胞,实时定量检测五种尿素代谢酶和五种CYP酶(CYP1A1、CYP2B6、CYP2C9、CYP2D6和CYP3A4)的mRNA表达情况。结果显示,在不同转录因子组合的共同作用下,十种功能酶的表达情况都各有不同。为使结果获得更直观的效果,将所有2~(-△△Ct)结果以“<1”、“1–2”、“>2”分段并使用不同颜色进行标识,其颜色深浅与mRNA表达水平的高低成正比关系,综合分析优选出“C/EBPβ+HNF4α+HNF6+PXR”与“C/EBPβ+HNF4α+HNF6+CAR”两种组合,并构建稳定过表达两种优化组合的HepG2细胞和BEL-7404细胞。4、WB结果显示,两种不同组合的重组细胞都高表达ASL蛋白,而ASS蛋白却呈低水平状态。并且,在C/EBPβ+HNF4α+HNF6+PXR组合的作用下Arg1、OTC和CPS1叁种蛋白都呈现高表达状态。5、检测了两种重组细胞的尿素合成量,评估重组细胞对氨的代谢能力。随着氨浓度的增加,两种不同组合重组细胞的尿素生成量有不同程度的增加。并且,在氨浓度较低的情况下,C/EBPβ+HNF4α+HNF6+PXR组合在提高肝细胞的尿素产量效果上明显高于对照组和C/EBPβ+HNF4α+HNF6+CAR组合。在高浓度氨的条件下,C/EBPβ+HNF4α+HNF6+CAR重组肝细胞的尿素产量有一定程度的提高。然而,两种不同组合肝细胞的在尿素代谢功能在一定程度上还远不及原代肝细胞。6、同时检测两种重组细胞五种不同CYP酶蛋白合成水平和功能。在两种不同转录因子组合的作用下,CYP1A1、CYP2D6和CYP3A4蛋白表达水平明显增高,而CYP2B6蛋白水平呈现低表达状态,CYP2C9表达水平则未见明显改变,这一效果在功能检测得到进一步验证。结论:1、针对尿素循环和药物代谢两大功能进行分析,在肝富集转录因子和异源物核受体的组合中,以C/EBPβ+HNF4α+HNF6+PXR组合和C/EBPβ+HNF4α+HNF6+CAR组合较为理想,在一定程度上,两种组合都能明显改善氨代谢和药物代谢两大功能。2、针对尿素代谢功能进行分析,C/EBPβ+HNF4α+HNF6+PXR组合优于C/EBPβ+HNF4α+HNF6+CAR组合。3、针对药物代谢功能进行分析,C/EBPβ+HNF4α+HNF6+PXR组合和C/EBPβ+HNF4α+HNF6+CAR组合彼此间未见明显差异。4、综合分析,在同时改善氨代谢和药物代谢两大功能方面C/EBPβ+HNF4α+HNF6+PXR组合效果更优,有望为进一步的多种实验性应用提供取用便捷的人源肝细胞。(本文来源于《福建医科大学》期刊2018-05-01）
耿东升,张宏涛,马光霞,曹园[2]（2018）在《瘤果黑种草子组合物对豚鼠气管致痉及RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响》一文中研究指出目的观察维药瘤果黑种草子组合物对豚鼠气管致痉及RAW264.7细胞致炎作用的影响。方法取豚鼠气管螺旋条连接于肌张力换能器进行实验,记录各供试药物对乙酰胆碱和组胺致气管条平滑肌张力改变(痉挛)的影响,计算解痉率;培养RAW264.7细胞,通过MTT法,观察供试药物对RAW264.7细胞存活率的影响;以脂多糖刺激,ELISA法分别检测RAW264.7细胞分泌炎症因子IL-6、IL-8和NO的含量,计算供试药物对RAW264.7细胞分泌炎症因子IL-6、IL-8和NO的抑制率。进行较大范围的实验剂量-效应反应筛选,分别确定气管条和RAW264.7细胞实验的各种组合物剂量。实验设正常对照组、阳性对照组(氨茶碱)、单用挥发油和黄酮对照组及组合物(A~I)组。结果对乙酰胆碱致痉作用,组合物C组的解痉率高于阳性对照组(P<0.05),其组合物中黄酮与挥发油剂量之比为1∶10,组合物B、F、G组与阳性对照组无明显差异(P>0.05),组合物B、C、E、F、G、I组均高于单用黄酮和挥发油组(P<0.05);对组胺致痉作用,组合物A、B、C、E组的解痉率与阳性对照组无明显差异(P>0.05),组合物A、C、D、E组均高于单用黄酮和挥发油组(P<0.05)。对于抑制RAW264.7细胞分泌炎症因子IL-6、IL-8的作用,组合物Ⅲ-Ⅸ的抑制率均较单用黄酮和挥发油组高(P<0.05),组合物间比较,组合物Ⅸ抑制率最高,其组合物中黄酮与挥发油剂量之比为80∶25。结论瘤果黑种草子组合物的抑痉和抑泌作用优于单用瘤果黑种草子挥发油或瘤果黑种草子黄酮,实验效应与组合物中挥发油和黄酮的剂量比呈现一定的对应关系。(本文来源于《解放军药学学报》期刊2018年01期）
赵智亮[3]（2016）在《转录因子组合诱导成纤维细胞直接重编程为汗腺样细胞的实验研究》一文中研究指出目的：前期,我们团队已经确证了建立一定的共培养条件可以诱导间充质干细胞转分化为汗腺样细胞,并经裸鼠的脚掌创面模型试验和初步的人体试验证实,经过诱导的自体骨髓间充质干细胞移植于切除瘢痕的创面,可以生长出汗腺样结构并且具有一定的发汗功能。本研究的主要目的是在前期工作的基础上,通过对成纤维细胞重编程进一步识别控制其分化为汗腺样细胞的关键重编程转录因子(NF-κB和Lef-1)及其介导的信号调控通路,进一步阐明成纤维细胞可能分化为汗腺样细胞的重编程机制,为利用其它多种类型细胞作为汗腺再生种子细胞,为临床大面积汗腺损伤的患者实现汗腺再生带来希望。方法：前期研究表明,调控成纤维细胞重编程为汗腺样细胞关键信号通路涉及NF-KB和Lef-1等,结合文献报道的参与调控胚胎发育过程汗腺细胞发生、发展过程蛋白的变化,寻找出主要的参与调控关键转录因子NF-κB和Lef-1的基因组合,分析其参与的信号通路网络,并进一步验证其生物功能。1.实验分组与操作程序：待细胞培养至对数生长期,生长密度达到80%以上时,按106个/孔的密度将细胞接种于6孔板后采用完全随机(完全随机设计也叫组间设计,被试被分成若干组,每组分别接受一种实验处理,有几种实验处理被试也相应的被分为几组,各实验组的被试之间相互独立,因而又叫“独立组”设计)将其分为3组(每组的样本量为5),①目的基因转染组：将所构建的含有NF-κB和Lef-1基因的真核表达载体转染入细胞并筛选出稳定表达的单克隆,待后续实验使用；②空载体组：将pcDNA3.1(+)空载体转染细胞并筛选出稳定表达的单克隆,待后续实验使用;③空白对照组：不转染目的基因,相同实验条件下培养。2. NF-κB和Lef-1基因对人成纤维细胞的重编程：2.1真核表达载体的构建：在美国国立生物技术信息中心(National Center of Biotechnology Information. NCB1)上查找实验所需人NF-κB和Lef-1的基因序列,根据所查序列和实验需要分别设计NF-κB和Lef-1基因开放阅读框(open reading frame, ORF)PCR引物,用总RNA提取试剂盒提取人成纤维细胞总RNA,进行逆转录酶的作用合成目的cDNA,将cDNA和pcDNA3.1(+)载体分别用HindⅢ/SalⅠ及HindⅢ/PstⅠ双酶切并连接转化大肠杆菌DH-5a扩增,为了验证NF-κB和Lef-1目的基因序列是否有突变,将含有重组子的菌液送华大基因测序,选取无突变的单克隆菌液保种,经测序正确后提取质粒,并检测所提取质粒浓度。2.2转染细胞并筛选稳定表达细胞系：将所培养的细胞以5000个/孔的密度接种于96孔板,用不同浓度的G418培养基培养细胞,以10～14 d杀死全部细胞的浓度为基本浓度,并以此确定筛选浓度和维持浓度。转染前一天按106个/孔的密度将所培养细胞接种于6孔板,按脂质体转染的标准程序转染细胞,转染48 h后用含G418的培养基按800 mg/L的浓度筛选转染成功的细胞,2周后以200 mg/L的浓度维持筛选压力,挑选并在96孔板中培养成阳性单克隆,扩大培养将稳定转染的细胞用于后续实验。利用Realtime-PCR检测3组细胞NF-κB和Lef-1的mRNA表达情况。3. NF-κB和Lef-1重编程人成纤维细胞诱导培养后变化：EDA-A1能促进正常和外胚层发育缺陷小鼠的汗腺、毛囊等外胚层组织器官的发育,EGF能提高MSCs分化为SGLCs的诱导率。因此,本实验采用1μg/ml EDA-A1、50 ng/ml EGF加入培养基诱导重编程后的人成纤维细胞分化为SGLCs.3.1汗腺标志物的检测：应用免疫荧光法鉴定NF-κB和Lef-1重编程人成纤维细胞的汗腺相关分子如CEA,CK7,CK14和CK19等的表达；应用Western blot技术从蛋白层面检测NF-κB和Lef-1重编程人成纤维细胞的汗腺相关分子CEA,CK7,CK14和CK19等的表达变化；应用Realtime-PCR定量检测NF-κB和Lef-1重编程人成纤维细胞的汗腺相关分子CEA,CK7,CK14和CK19等的表达变化。3.2 NF-κB和Lef-1通路下游基因的检测：应用Realtime-PCR定量检测NF-κB和Lef-1重编程人成纤维细胞的NF-κB和Lef-1通路关键下游基因Shh和Cyclin D1的表达变化.3.3裸鼠脚掌移植实验：应用前期实验所建立的裸鼠模型探究重编程汗腺样细胞的功能以及汗腺再生修复作用。将转染了pcDNA3.1(+)-NF-KB和pcDNA3.1(+)-Lef-1的实验组成纤维细胞和另外两组对照组的成纤维细胞以1×106个细胞制成的150μl混悬液用注射器植入裸鼠烫伤后的脚掌,20天后进行组织学检查和发汗实验观察重编程汗腺样细胞的生物学功能,并进行安全性评价。结果：1. NF-κB和Lef-1真核表达载体构建：NF-κB和Lef-1基因的基因开放阅读框(open reading frame, ORF)克隆进pcDNA3.1(+)载体,经Hindlll/SalⅠ及Hindlll/PstⅠ双酶切后琼脂糖电泳分别可见相对分子质量约为3000 bp和1200 bp的条带,经测序鉴定碱基对无突变,表明成功构建了pcDNA3.1(+)-NF-κB和pcDNA3.1(+)-Lef-1真核表达载体。2.G418筛选及NF-κB和Lef-1表达检测：G418培养液递增筛选2周后未转染成功的细胞全部死亡,维持筛选20 d后形成阳性克隆。Realtime-PCR结果显示,目的基因转染组、空载体组、空白对照组的NF-κB mRNA的相对表达量分别为3.651±0.062、0.987±0.098、1.118±0.024,Lef-1 mRNA的相对表达量分别为2.451±0.032、0.997±0.078、1.158±0.043,表明稳定转染的人成纤维细胞的NF-κB和Lef-1 mRNA的表达也显着增加,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),与空载体组相比差异也有统计学意义(P<0.01),可认为重组载体在细胞内已有较高转录水平。3.汗腺标志物的检测：Western-blot结果显示,pcDNA3.1(+)-NF-KB和pcDNA3.1(+)-Lef-1转染组中CEA,CK7,CK14和CK19蛋白均有明显地表达,而空载体组、空白对照组中均未看见有表达。Realtime-PCR结果显示,pcDNA3.1(+)-NF-κB和pcDNA3.1(+)-Lef-1转染组中CEA,CK7,CK14和CK19 mRNA均有明显地表达,而空载体组、空白对照组中均未看见有表达。免疫荧光染色结果显示,pcDNA3.1(+)-NF-KB和pcDNA3.1(+)-Lef-1转染组中CEA,CK7,CK14和CK19荧光亮度很强,而其他两个对照组相同蛋白的荧光基本上看不见。4. NF-κB和Lef-1通路下游基因的检测：Realtime-PCR结果显示,目的基因转染组、空载体组、空白对照组的ShhmRNA的相对表达量分别为3.151±0.052、0.997±0.038、1.098±0.074,Cyclin D1mRNA的相对表达量分别为2.653±0.045、0.997±0.048、1.118±0.053,表明稳定转染的人成纤维细胞的Shh和Cyclin D1 mRNA的表达也显着增加,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),与空载体组相比差异也有统计学意义(P<0.01),可认为被公认参加汗腺再生过程中很重要的Shh和Cyclin D1在细胞内已有较高转录水平。5.裸鼠脚掌移植实验：20天后进行的碘淀粉发汗实验结果显示,大约7/10的实验组脚掌为阳性结果,在脚掌中间可以明显的看到蓝黑色的区域,而两组对照则没有看到相应的阳性结果。组织学检查发现,目的基因转染组的裸鼠脚掌HE染色切片中可以看到有汗腺的再生,基底层汗腺导管相连接,而对照组则没有发现汗腺结构的再生。冰冻切片中可看见ck7和ck19的红色荧光。移植瘤实验证明了汗腺样细胞的安全性.结论：NF-κB和Lef-1的基因组合可以直接重编程人成纤维细胞分化成汗腺样细胞,在诱导成汗腺样细胞的过程中汗腺特异性标志物CEA,CK7,CK14和CK19的表达有明显的表达,并且通过检测通路下游基因Shh和Cyclin D1证实了NF-κB和Lef-1这两条通路在直接重编程过程中的重要作用.直接重编程后的人成纤维细胞在裸鼠模型中得到了生物学功能的验证,为利用其它多种类型细胞进行汗腺样细胞重编程、实现汗腺再生奠定理论基础,为临床大面积汗腺损伤的患者实现汗腺再生带来希望.(本文来源于《中国人民解放军医学院》期刊2016-05-25）
黄体龙,杨跃煌[4]（2016）在《不同细胞因子组合对人脐血干细胞体外扩增作用研究》一文中研究指出目的研究不同的细胞因子组合对人脐血干细胞体外的扩增作用,优化筛选脐血干细胞扩增的细胞因子。方法根据细胞因子不同,实验分五组:1对照组;2SF(SCF+FL)组;3SFT(SCF+FL+TPO)组;4SFT6(SCF+FL+TPO+IL-6)组;5SFT36(SCF+FL+TPO+IL-3+IL-6)。采集人脐带血,分离纯化CD34+细胞,接种于含有以上不同因子的培养体系中培养,分别于接种当天及第7天检测有核细胞数、集落形成单位(CFU)数及CD34~+细胞数。结果 SFT36组有核细胞数、CD34~+细胞数及集落形成单位数分别增加(622±179)%,(784±213)%,(804±272)%,与其他4组有显着性差别。结论 SFT36(SCF+FL+TPO+IL-3+IL-6)组5种因子组合是体外扩增脐血合适的细胞因子组合。(本文来源于《齐齐哈尔医学院学报》期刊2016年14期）
叶敬伟[5]（2016）在《联合应用细胞因子组合对急性髓系白血病患者骨髓来源CD34~+白血病细胞转化为NK细胞作用的研究》一文中研究指出目的:以不经过免疫磁珠分选(Magnetic Activated Cell Sorting,MACS)和富集的初治高白细胞血症急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia,AML)患者的骨髓血单个核细胞(CD34~+细胞比例为(79.32±5.98)%)作为初始培养细胞,应用两组不同的细胞因子组合,建立CD34~+细胞向自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK细胞)转化的体外培养体系,比较两组细胞因子组合诱导分化作用的异同。研究联合应用重组人白细胞介素12(recombinant human interleukin-12,rh IL-12)、重组人白细胞介素15(recombinant human interleukin-15,rh IL-15)对NK细胞的分化、增殖、细胞活性、细胞毒作用以及Granzyme B、TNF-α、IFN-γ等基因的表达的作用,探讨联合应用IL-12、IL-15在诱导CD34~+细胞向NK细胞转化中的作用及优势。方法:1提取骨髓血单个核细胞(Bone Marrow Blood-Mononuclear Cells,BM-MNC)以6位白细胞计数≥100×10~9/L的初治急性髓系白血病患者为研究对象(患者均签署知情同意书),取其骨髓血约5ml,肝素抗凝,应用Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液(相对密度1.077)密度梯度离心法分离得到骨髓血单个核细胞,流式细胞仪检测CD34~+细胞和CD3-CD56~+NK细胞比例,同时检测CD69以及NKp46、NKG2D的表达情况作为对照。同时将一部分单个核细胞冻存于液氮中,作为靶细胞以及PCR对照组细胞备用。2体外建立NK细胞诱导体系应用RPMI l640完全培养基(含1%青霉素和链霉素,1m M L-谷氨酰胺和10%热灭活胎牛血清)混匀得到的单个核细胞,调整其细胞密度为2×10~5/ml,接种于50ml细胞培养瓶,每瓶中加入细胞悬液5ml。根据不同的细胞因子组合,实验共分为2组:A组(SCF、IL-7、IL-12、IL-15);B组(SCF、IL-7、IL-2、IL-15)。所加入细胞因子的浓度为:SCF、IL-7、IL-15均为20ng/ml,IL-12为2ng/ml,IL-2为1000U/ml。将细胞培养瓶置于37℃、含有5%CO2的饱和湿度细胞培养箱中培养5周,每周全量换液及补充细胞因子。3 NK细胞增殖情况检测每周各取A、B组1ml细胞悬液,应用细胞计数板计算细胞密度,并计算A、B组细胞总数。应用流式细胞仪检测CD3-CD56~+NK细胞比例,进而计算A、B组总细胞中CD3-CD56~+NK细胞比例。5周诱导分化结束时,同时检测A、B组中CD34~+细胞比例。4检测各组NK细胞活化情况应用流式细胞仪,检测诱导分化5周的A、B组NK细胞活化标志CD69分子的表达情况,以及NK细胞表面活化性受体NKp46、NKG2D的表达情况。5应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,q PCR)(2(?)相对定量法)检测相关基因表达情况检测诱导分化5周的A、B组NK细胞Granzyme B、TNF-α、IFN-γ基因的表达水平,同时检测培养前冻存的患者骨髓血单个核细胞上述基因表达水平作为对照。6应用CCK-8试剂盒检测NK细胞杀伤活性以诱导分化5周的A、B组NK细胞为效应细胞,以K562细胞和冻存的患者骨髓血分离的单个核细胞(患者来源白血病细胞)分别作为靶细胞,应用CCK-8试剂盒检测效靶比为1︰1、5︰1、10︰1时的杀伤率。结果:1 6位初治急性髓系白血病患者白细胞计数为(122.50±15.98)×10~9/L,经流式细胞仪检测,其骨髓血单个核细胞中CD34~+细胞比例为(79.32±5.98)%,NK细胞比例为(0.45±0.19)%,CD56~+CD69~+细胞比例为(0.67±0.15)%,CD56~+NKp46~+细胞比例为(0.34±0.21)%,CD56~+NKG2D+细胞比例为(0.31±0.12)%。2经5周诱导分化后,A组CD3-CD56~+NK细胞比例为(71.22±2.25)%,B组为(56.32±3.97)%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。A组CD34~+细胞的比例(0.06±0.06)%,B组为(0.08±0.07)%。以上数据说明,两组细胞因子组合均可将骨髓血CD34~+细胞体外诱导分化为NK细胞,诱导分化5周时A、B组中几乎不含CD34~+细胞,与IL-2、IL-15组相比,联合应用IL-12、IL-15组可以显着提高NK细胞的转化率。3 5周诱导分化结束,A组细胞总数为(1.53±0.17)×10~8,B组细胞总数为(1.37±0.13)×10~8,培养前各组细胞总数相等,为1×10~6,培养后A组细胞扩增了153±17倍,B组细胞扩增了137±13倍,两组比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。说明联合应用IL-12、IL-15组和联合应用IL-2、IL-15组在提高NK细胞增殖能力方面无显着差异。4 NK细胞活化标志CD69~+表达比例为:A组(70.72±3.62)%;B组(59.98±2.86)%,组间比较差异具有统计学意义(P=0.000<0.05)。NK细胞表面活化受体的表达比例为:NKp46~+:A组(70.30±3.45)%;B组(60.38±2.84)%,差异比较具有统计学意义(P=0.001<0.05)。NKG2D+:A组(72.75±3.89)%;B组(62.30±4.25)%,差异比较具有统计学意义(P=0.002<0.05)。以上结果说明,两组细胞因子组合均可显着促进NK细胞活化,与IL-2、IL-15组相比,联合应用IL-12、IL-15组诱导分化的NK细胞具有更高的活性,具有更好的生物学效能。5 PCR结果A、B组NK细胞Granzyme B、TNF-α和IFN-γ基因的表达水平较冻存的患者骨髓血单个核细胞显著升高。Fold Change(F值):Granzyme B:A组为(13.36±1.54),B组为(9.82±1.21),组间差异比较具有统计学意义(P=0.001<0.05);TNF-α:A组为(9.38±0.51),B组为(7.06±0.52),组间差异比较具有统计学意义(P=0.002<0.05);IFN-γ:A组为(6.26±0.25),B组为(4.28±0.23),组间差异比较具有统计学意义(P=0.000<0.05)。以上结果说明,两组细胞因子均可促进NK细胞上述基因的表达,与IL-2、IL-15组相比,联合应用IL-12和IL-15可以显着提高NK细胞上述基因的表达,可提高NK细胞分泌相关细胞因子的能力。6 CCK-8杀伤实验结果A、B两组NK细胞对K562细胞的杀伤率在效靶比为10︰1时最高,A组为(62.20±2.36)%,B组为(56.77±3.81)%,组间比较差异具有统计学意义(t=3.803,P=0.013<0.05)。A、B两组NK细胞对患者骨髓来源白血病细胞的杀伤率亦在效靶比为10︰1时最高,A组为(70.78±2.54)%;B组为(62.95±1.94)%;组间比较差异具有统计学意义(t=7.900,P=0.000<0.05)。以上结果表明:两组诱导分化的NK细胞对白血病细胞均具有杀伤作用,与IL-2、IL-15组相比较,联合应用IL-12、IL-15组可以显着提高NK细胞的杀伤活性。在相同效靶比时,A、B两组NK细胞对患者来源白血病细胞的杀伤率显着高于K562细胞,差异比较具有统计学意义(P<0.05),说明诱导分化的NK细胞对白血病细胞的杀伤可能具有同体特异性。结论:1初治高白细胞血症急性髓系白血病患者的骨髓血CD34~+细胞可在体外诱导分化为CD3-CD56~+NK细胞,且具有杀伤活性。2在诱导NK细胞增殖方面,联合应用IL-12、1L-15组与IL-2、IL-15组相比较差异无统计学意义。3联合应用IL-12、1L-15组诱导分化的NK细胞活性、对白血病细胞的杀伤率以及Granzyme B、TNF-α和IFN-γ基因的表达水平均显著高于IL-2、1L-15组,差异比较具有统计学意义。4两组诱导分化后的细胞中几乎不含CD34~+细胞,诱导分化的NK细胞对患者来源白血病细胞的杀伤率均显着高于K562细胞,说明细胞因子诱导分化的NK细胞对白血病细胞的杀伤具有同体特异性。(本文来源于《河北医科大学》期刊2016-03-01）
王永祥,陈燕,王翔,郭守刚,杜怡峰[6]（2015）在《新型转录因子组合将人成纤维细胞直接转分化生成诱导性神经干细胞》一文中研究指出目的通过新的转录因子组合(BRN2,SOX2,KLF4和c-Myc)将人皮肤来源的成纤维细胞直接重编程为诱导性神经干细胞(induced Neural Progenitor Cells,iNPCs)。方法四种转录因子(BRN2,SOX2,KLF4和c-Myc)分别于Plat-E细胞中包装成逆转录病毒,按照1:1:1:1比例多次感染人皮肤来源的成纤维细胞。叁天后更换成神经干细胞(Neural Progenitor Cells,NPCs)培养液(按(本文来源于《中华医学会第十八次全国神经病学学术会议论文汇编（下）》期刊2015-09-18）
王永祥,陈燕,王翔,郭守刚,杜怡峰[7]（2015）在《新型转录因子组合将人成纤维细胞直接转分化生成诱导性神经干细胞》一文中研究指出目的通过新的转录因子组合(BRN2,SOX2,KLF4和c—Myc)将人皮肤来源的成纤维细胞直接重编程为诱导性神经干细胞(induced Neural Progenitor Cells.iNPCs)。方法四种转录因子(BRN2,SOX2,KLF4和c-Myc)分别于Plat—E细胞中包装成逆转录病毒,按照1:1:1:1比例多次感染人皮肤来源的成纤维细胞。叁天后更换成神经干细胞(Neural Progenitor Cells,NPCs)培养液(按照1:1混合的DMEM/F12和Neurobasal培养基加入20 ng/ml EGF,10(本文来源于《中华医学峰会暨中华医学会神经病学分会第八届全国中青年神经病学学术会议论文汇编》期刊2015-07-11）
白毅[8]（2015）在《我国科学家发现全新iPS细胞诱导因子组合》一文中研究指出中国科学院广州生物医药与健康研究院裴端卿和陈捷凯实验组从体细胞阶段的因子出发，发现癌基因c-Jun与干细胞多能性完全不相容，而c-Jun抑制因子不仅促进重编程，还可以替代Yamanaka因子中最为核心的Oct4，并由此组建了一套不包含Yamanaka因子(本文来源于《中国医药报》期刊2015-07-01）
陈泳[9]（2015）在《细胞因子组合诱导促进小鼠胚胎干细胞向造血干/祖细胞的分化》一文中研究指出输血和造血干细胞移植是治疗血液疾病和免疫缺陷病的主要手段。虽然造血干细胞来源广泛,但是实际生活中,造血干细胞的分离方法复杂繁琐,含量稀少,而且来源于体内的造血干细胞在体外增殖有限。因此,造血干细胞的来源问题成为临床移植和免疫重建等治疗方法的主要挑战之一。而胚胎干细胞不仅能在体外长期培养,而且其具有的多能性能使细胞通过诱导形成机体所有细胞类型。早有研究报道,胚胎干细胞定向诱导分化形成的造血干细胞,经体外实验和动物模型实验,已证明具有进一步分化为红系细胞、髓系细胞以及淋巴系细胞的潜能,因此可作为为造血干细胞的来源。但胚胎干细胞来源的造血干细胞存在诱导分化效率低下的问题。以胚胎干细胞为来源,定向诱导形成造血干细胞,目前最常用的方法有拟胚体法和共培养法。通过利用细胞因子组合作用,对小鼠胚胎干细胞进行定向诱导,相关结果可以为进一步重建免疫系统,提供有力的理论依据。从怀孕12.5d-16.5d的昆明小鼠分离培养原代小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts, MEFs)。取P3代的MEFs,使用丝裂霉素C处理以抑制其增殖能力。综合结果发现和节约药品的原则,丝裂霉素C 10μg/mL作用MEFs 3h对MEFs的生长抑制效果最好,以此制备小鼠饲养层细胞。在饲养层细胞上扩培E14TG2a细胞呈克隆样生长。碱性磷酸酶染色扩培的E14TG2a细胞呈阳性；细胞周期检测结果表明其处于快速增殖的状态；核型检测E14TG2a细胞表明其保持正常核型；而细胞免疫荧光鉴定表示扩培的E14TG2a细胞表达Oct4蛋白。]RT-PCR检测全能性基因Oct-4和Nanog正常表达。因此扩培的E14TG2a细胞处于未分化阶段,可用于后续实验。以甲基纤维素半固体培养法诱导拟胚体形成。甲基纤维素半固体培养法诱导拟胚体形成过程中流式细胞仪检测中胚层表面标志Flkl+细胞,结果显示细胞诱导第五天时,Flkl+细胞达到98.7%,明显高于对照组。获得的拟胚体进一步向造血干细胞诱导分化。向造血干/祖细胞诱导分化过程中检测到CD34+/Sca-1+细胞明显高于对照组。造血相关基因Flkl的表达量增加,造血相关基因Bmp4及CD34的表达量均高于对照组,而Smad5的表达则明显受到抑制。培养过程中观察到造血集落。本研究为后期建立小鼠体内的早期造血及免疫重建的研究提供了珍贵的理论依据。(本文来源于《福建师范大学》期刊2015-06-30）
唐忠平,李春棠,林凤,纪媛[10]（2015）在《不同模式血液净化组合对脓毒症血清PCT、hs-CRP及细胞因子的影响》一文中研究指出目的观察脓毒症患者连续静-静脉血液滤过(CVVH)加血浆灌流(PP)或加血液灌流(HP)治疗后,血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素1(IL-1)、C-反应蛋白(hs-CRP)、前降钙素原(PCT)浓度的变化,以比较两种血液净化模式的疗效。方法将30例脓毒症患者随机分为PP组及HP组,每组15例,分别于PP或HP治疗2h后行持续CVVH治疗,并分别测定、比较两组患者0h、12h、24h后的APACHE-Ⅱ评分和0h、2h、6h、12h、24h后血清TNF-α、IL-6、IL-1、hs-CRP及PCT的浓度水平。结果治疗后12h、24h两组APACHE-Ⅱ评分均显着降低且PP组均低于HP组(P<0.05);治疗后四个时点两组TNF-α、IL-6、IL-1、hs-CRP及PCT值均降低(P<0.01,P<0.05),其中PP组治疗2h后IL-6、IL-1、PCT及6h后PCT值显着低于HP组(P<0.05)。结论两种血液净化模式对脓毒症血清TNF-α、IL-6、IL-1、hs-CRP及PCT均有一定清除作用,而PP加CVVH模式优于HP加CVVH模式(本文来源于《贵州医药》期刊2015年02期）
细胞因子组合论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的观察维药瘤果黑种草子组合物对豚鼠气管致痉及RAW264.7细胞致炎作用的影响。方法取豚鼠气管螺旋条连接于肌张力换能器进行实验,记录各供试药物对乙酰胆碱和组胺致气管条平滑肌张力改变(痉挛)的影响,计算解痉率;培养RAW264.7细胞,通过MTT法,观察供试药物对RAW264.7细胞存活率的影响;以脂多糖刺激,ELISA法分别检测RAW264.7细胞分泌炎症因子IL-6、IL-8和NO的含量,计算供试药物对RAW264.7细胞分泌炎症因子IL-6、IL-8和NO的抑制率。进行较大范围的实验剂量-效应反应筛选,分别确定气管条和RAW264.7细胞实验的各种组合物剂量。实验设正常对照组、阳性对照组(氨茶碱)、单用挥发油和黄酮对照组及组合物(A~I)组。结果对乙酰胆碱致痉作用,组合物C组的解痉率高于阳性对照组(P<0.05),其组合物中黄酮与挥发油剂量之比为1∶10,组合物B、F、G组与阳性对照组无明显差异(P>0.05),组合物B、C、E、F、G、I组均高于单用黄酮和挥发油组(P<0.05);对组胺致痉作用,组合物A、B、C、E组的解痉率与阳性对照组无明显差异(P>0.05),组合物A、C、D、E组均高于单用黄酮和挥发油组(P<0.05)。对于抑制RAW264.7细胞分泌炎症因子IL-6、IL-8的作用,组合物Ⅲ-Ⅸ的抑制率均较单用黄酮和挥发油组高(P<0.05),组合物间比较,组合物Ⅸ抑制率最高,其组合物中黄酮与挥发油剂量之比为80∶25。结论瘤果黑种草子组合物的抑痉和抑泌作用优于单用瘤果黑种草子挥发油或瘤果黑种草子黄酮,实验效应与组合物中挥发油和黄酮的剂量比呈现一定的对应关系。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞因子组合论文参考文献
[1].苏永发.肝富集转录因子和异源物核受体的优化组合及对肝细胞功能的影响[D].福建医科大学.2018
[2].耿东升,张宏涛,马光霞,曹园.瘤果黑种草子组合物对豚鼠气管致痉及RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响[J].解放军药学学报.2018
[3].赵智亮.转录因子组合诱导成纤维细胞直接重编程为汗腺样细胞的实验研究[D].中国人民解放军医学院.2016
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[5].叶敬伟.联合应用细胞因子组合对急性髓系白血病患者骨髓来源CD34~+白血病细胞转化为NK细胞作用的研究[D].河北医科大学.2016
[6].王永祥,陈燕,王翔,郭守刚,杜怡峰.新型转录因子组合将人成纤维细胞直接转分化生成诱导性神经干细胞[C].中华医学会第十八次全国神经病学学术会议论文汇编（下）.2015
[7].王永祥,陈燕,王翔,郭守刚,杜怡峰.新型转录因子组合将人成纤维细胞直接转分化生成诱导性神经干细胞[C].中华医学峰会暨中华医学会神经病学分会第八届全国中青年神经病学学术会议论文汇编.2015
[8].白毅.我国科学家发现全新iPS细胞诱导因子组合[N].中国医药报.2015
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[10].唐忠平,李春棠,林凤,纪媛.不同模式血液净化组合对脓毒症血清PCT、hs-CRP及细胞因子的影响[J].贵州医药.2015
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