导读:本文包含了胚胎发育阻滞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胚胎,小鼠,细胞,活性氧,基因,转录,体外。
胚胎发育阻滞论文文献综述
刘宇[1]（2019）在《谷氨酸对小鼠MZT期胚胎发育阻滞及相关基因表达影响的研究》一文中研究指出哺乳动物胚胎体外培养体系处于次优化水平,胚胎常面临发育迟缓的风险。活性氧(Reactive oxygen species,ROS)物质生产与清除能力的失衡,将导致小鼠胚胎2-细胞期发育阻滞等问题。本论文想要从发育阻滞的分子层面进行研究,旨在探究谷氨酸在小鼠MZT期胚胎体外培养过程中能否起到克服发育阻滞的作用,以期为从根本上解决因发育阻滞导致的低生产率等问题提供一定理论基础。本试验设计了两个不同的试验组(谷氨酸处理组,M16对照组),通过对发育阻滞品系昆明小鼠2-细胞早期、2-细胞中期及2-细胞晚期时期的胚胎进行对比,利用DCFH-DA测定小鼠胚胎内部活性氧含量,利用CMF2HC测定小鼠胚胎内部GSH含量,最后对GPx基因即GPx1,4和ZGA标记基因即Eif-1α,Muervl,Zscan4d和Hsp70.1的mRNA表达水平进行分析检测。试验结果表明:1、6mmol/L谷氨酸处理组小鼠MZT期胚胎的2-细胞向4-细胞过渡率,显着高于M16对照组和其余各浓度谷氨酸处理组;2、谷氨酸处理组小鼠MZT各时期胚胎内ROS和GSH含量均无显着差异,其中ROS水平显着低于M16对照组,GSH水平均显着高于M16对照组;3、谷氨酸处理组诱导小鼠MZT期胚胎内各GPx基因表达上调;4、谷氨酸处理组诱导小鼠MZT期胚胎内ZGA标记基因表达上调,尤其在MZT中期和晚期显着升高;综上所述,浓度为6mmol/L谷氨酸可通过刺激GPx1和GPx4酶活性维持GSH与ROS含量动态平衡,间接参与清除ROS的抗氧化过程;通过提高ZGA标记基因表达水平及维持其时序性高表达模式,直接参与ZGA启动过程;最终有效降低发育阻滞风险,确保MZT顺利完成。(本文来源于《延边大学》期刊2019-05-18）
许常龙,李春苑,杨华,吕波,薛志刚[2]（2019）在《单细胞转录组测序分析人类胚胎发育阻滞的潜在机制》一文中研究指出目的探讨胚胎发育阻滞的分子机制,为提高辅助生殖成功率提供新思路。方法单细胞转录组测序技术研究发育阻滞胚胎(包括体外受精和胞质内单精子注射过程)及对照组的转录组情况,利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)等生物信息学手段分析与胚胎阻滞相关的信号通路和关键基因。结果阻滞胚胎中与细胞分裂、细胞周期等相关的信号通路表达异常。与ICSI组相比,IVF组阻滞胚胎的细胞骨架、氧化磷酸化等通路表达异常。结论通过单细胞转录组测序技术分析阻滞胚胎转录组的结果说明细胞分裂、周期、代谢等通路可能影响胚胎正常发育,ICSI过程影响了线粒体功能、结构的变化。(本文来源于《同济大学学报(医学版)》期刊2019年01期）
刘宏祥,徐文娟,朱春红,陶志云,宋卫涛[3]（2018）在《鸭胚胎发育中后期胸肌发育阻滞的RNA-seq分析》一文中研究指出【目的】选择两个中国地方品种高邮鸭和金定鸭,对鸭胚胎发育中后期胸肌进行转录组分析研究,旨在探明胸肌发育阻滞的分子变化机制,为鸭骨骼肌调控机理研究打下基础。【方法】在21胚龄和27胚龄两个时间点,分别解剖高邮鸭、金定鸭各3只,采集胸大肌,提取总RNA构建文库,利用Illumina的HiseqTM2000进行高通量测序,并利用生物信息学方法进行差异表达基因挖掘、基因功能注释等分析,探讨21胚龄和27胚龄两个时间点之间胸肌发育阻滞的分子机制。【结果】高邮鸭、金定鸭21胚龄和27胚龄胸大肌组织RNA-seq质量Q20均在94%以上,Q30均在89%以上,测序得到的结果可靠,可用于后续分析。RNA水平相关性检查和基因mRNA表达量聚类图结果都表明,21胚龄(27胚龄)高邮鸭和金定鸭之间表达模式的相关性高于高邮鸭(金定鸭)21胚龄和27胚龄之间的表达模式。不同品种内时间点之间的差异基因数量(高邮鸭6 128个,金定鸭6 452个)远多于同一时间点不同品种间的差异基因数量(21胚龄522个,27胚龄299个)。qRT-PCR验证试验结果与RNA-seq分析结果相关性较强。通过GO和KEGG富集分析发现,高邮鸭、金定鸭胸肌在21胚龄到27胚龄阶段,能量代谢相关基因(主要为辅酶Q相关基因、ATP酶合成相关基因和细胞色素C相关基因)均显着上调,DNA复制和细胞周期相关基因(主要为微型染色体维持蛋白(MCM)相关基因、复制因子C(RFC)相关基因)均显着下调。相关基因表达的变化可能与此阶段成肌细胞增殖速度减慢,逐渐退出细胞周期开始准备下一阶段融合成多核肌管并形成肌纤维有关。对肌肉生长发育相关的关键基因分析发现,促进肌肉生长的IGF1和诱导成肌细胞末端分化的MyoG显着下调,促进肌纤维分化融合的MUSTN1基因、诱导肌祖细胞向成肌细胞转化的MyoD1基因显着上调。【结论】鸭胚胎中后期胸肌发育过程中大量基因差异表达。其中能量代谢相关基因的上调和DNA复制、细胞周期相关基因的下调,以及肌肉发育相关基因MUSTN1显着上调,IGF1、MyoG等显着下调,可能与鸭胚胎中后期胸肌发育阻滞现象密切相关。(本文来源于《中国农业科学》期刊2018年22期）
梁新红,丘映,许常龙,杨华,周耀辉[4]（2018）在《体外受精—胚胎移植治疗周期中早期胚胎发育阻滞对临床结局的影响》一文中研究指出目的:探讨在体外受精—胚胎移植(IVF-ET)周期中早期胚胎发育阻滞对患者临床结局的影响。方法:回顾性分析2016年1—12月在广西医科大学第叁附属医院生殖医疗中心行IVF-ET助孕的438个周期,根据移植周期中有无早期胚胎发育阻滞及发生早期胚胎发育阻滞的胚胎个数分为A组(无胚胎发生早期发育阻滞,n=249)、B组(有1枚胚胎发生早期发育阻滞,n=116)、C组(有2枚胚胎发生早期发育阻滞,n=42)及D组(≥3枚胚胎发生早期发育阻滞,n=31),比较4组患者的一般情况及临床结局。结果:4组患者随着早期胚胎发育阻滞的胚胎个数的增多,胚胎发育阻滞率逐渐增高,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);A组患者的优胚率、种植率、临床妊娠率及活产率最高,其次为B组和C组,D组最低,且A组胚胎发育阻滞率低于其它3组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IVF周期中,发生早期胚胎发育阻滞周期比无胚胎发育阻滞周期的临床结局差,而发生早期胚胎发育阻滞的比例对临床结局有一定的预测作用。(本文来源于《广西医科大学学报》期刊2018年09期）
舒心[5]（2018）在《FBP1基因与多囊卵巢综合征的相关性研究及IGF2BP2导致胚胎发育阻滞的机制》一文中研究指出第一部分FBP1基因与多囊卵巢综合征的相关性研究背景:多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄女性中常见的生殖内分泌疾病,以高雄激素血症或多毛、卵巢多囊样改变、稀发排卵为特征,常伴发肥胖、胰岛素抵抗及其他代谢问题[1-2],其中高雄激素血症的临床表现尤为突出,已有研究发现多个基因与PCOS高雄激素血症的发生密切相关[3]。2012年,陈子江课题组通过全基因组关联分析发现PCOS易感基因区域内包含FBPI基因[4],因此,推测FBP1与PCOS的发病可能相关。课题组前期研究发现FBP1在高雄激素条件下培养的小鼠卵泡及颗粒细胞中表达升高[5]。因此,FBP1在PCOS高雄激素血症患者卵泡局部微环境中的作用机制有待进一步研究。目的:检测果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)基因在多囊卵巢综合征(PCOS)高雄激素血症患者卵巢颗粒细胞中的表达,并评价其临床意义。方法:收集100例PCOS患者,分为PCOS高雄激素血症组和PCOS非高雄激素血症组,和同期58例正常对照患者作为正常对照组,收集卵泡液颗粒细胞,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantificationalrealtimePCR,qRT-PCR)检测各组卵泡液颗粒细胞中FBP1的表达,并做关联性分析,同时收集患者各项临床指标,进行统计学分析,对患者远期并发症进行评估。结果:肥胖、高血压、代谢综合征等远期并发症的发生率在PCOS高雄激素组中皆高于PCOS非高雄激素组和正常对照组(P<0.05)。PCOS高雄激素组的的FINS(P<0.05)、HOMA-IR(P<0.05)、LH(P<0.05)、LH/FSH(P<0.05)、AMH(P<0.05)、DHE-S(P<0.01)、基础卵泡数(P<0.01)高于正常对照组和PCOS非高雄激素组。FBP1 mRNA在PCOS高雄激素组患者卵泡液颗粒细胞中的表达高于正常对照组(P=0.002)及非高雄激素组(P=0.038)。PCOS高雄激素组FBP1 mRNA的相对表达量与硫酸脱氢表雄酮(DHE-S)呈正相关(r=0.470,P=0.021)。结论:PCOS高雄激素患者肥胖、高血压、代谢综合征等远期并发症的发生率明显升高,FBP1在PCOS高雄激素血症患者卵泡液颗粒细胞中高表达,其表达量与DHE-S水平呈正相关。第二部分IGF2BP2导致胚胎发育阻滞的机制背景:多囊卵巢综合征(PCOS)患者有明显的不孕症倾向,而导致PCOS患者发生不孕症的原因有很多,其中自然流产占了较大比例。PCOS患者中胰岛素抵抗伴发发病率高达50%～70%[2]。胰岛素样生长因子2 mRNA-binding蛋白2(IGF2BP2)是调节IGF2的翻译上起着关键作用的生长因子,控制胎儿生长和器官形成包括脂肪形成和胰腺发育[6]。白人种群中,基因IGF2BP2的突变将导致二型糖尿病患者出现胰岛素抵抗[7]。以往研究报道,PCOS患者自然流产率明显升高,主要有以下叁个原因:(1)子宫内膜容受性下降,(2)卵母细胞质量下降,(3)促排卵药物影响妊娠[8],而其中卵母细胞质量下降可能是由于PCOS患者存在减数分裂和胚胎早期发育相关基因的表达缺陷所致[9]。目的:了解Imp2-/-小鼠生育力及胚胎发育情况,通过对母型-合子型转变(maternal zygote transaction,MZT)过程的深入研究,明确胚胎激活过程母源mRNA的表达情况,并探讨IGF2BP2的作用机制。方法:通过培育和繁殖Imp2--小鼠,观察其繁殖周期,每窝生仔数等相关数据,统计其生育力;固定Imp2-/-小鼠各年龄段卵巢,并进行切片,观察卵巢形态及卵泡发育情况;利用人工授精(in vitro fertilization,IVF)的方法,观察并比较Imp2/-小鼠、Imp2+/-小鼠以及野生型小鼠卵母细胞受精后胚胎的发育情况以及胚胎各时期(1cell、2cell、4cell、8cell、桑椹胚、囊胚)的发育情况;利用人工授精的方法,观察并比较Imp2-/-小鼠和对照小鼠卵母细胞受精前后GV、MⅡ、2 cell时期小鼠母源mRNA的表达情况。结果:Imp2-/-雌鼠生育力明显降低,Imp2-/-雄鼠生育力不受影响;大部分Imp2-/-雌鼠的卵母细胞受精后胚胎发育停滞在二细胞时期;Imp2-/-雌鼠胚胎发育至二细胞时期母源mRNA的下降程度没有对照组明显。结论:Igf2bp2敲除小鼠胚胎发生二细胞阻滞,IGF2BP2在卵母细胞中调节基因组的转录活性,IGF2BP2的缺失会导致母源mRNA降解异常。(本文来源于《山东大学》期刊2018-05-21）
张祥[6]（2017）在《活性氧ROS对小鼠早期胚胎发育阻滞的影响研究》一文中研究指出哺乳动物胚胎体外培养体系影响着早期胚胎的发育潜能。在目前模拟体内输卵管及子宫的低氧环境的培养系统中,活性氧(reactive oxygen species,ROS)被认为是影响胚胎发育的一个重要因素。胚胎合子基因组激活(zygotic gene activation,ZGA)是早期胚胎正常发育的关键,研究认为ZGA的延迟或失败与早期胚胎发育阻滞有关。为探究ROS对小鼠早期胚胎发育阻滞的影响,本研究比较了不同品种小鼠在不同培养液中发生阻滞的情况,检测了 ZGA相关基因、胞质ROS浓度及ROS相关基因的表达;同时利用2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐AAPH处理昆明白小鼠体外受精卵建立ROS引起阻滞的细胞模型,对线粒体机能相关的线粒体膜电位、线粒体ROS(mtROS)及线粒体分布状态、mtDNA的拷贝数进行了检测;另外,检测了线粒体相关基因Grm2、Drd2、Polg2、TE4M的表达变化及其调节区的DNA甲基化的调节。1、不同品系小鼠胚胎在不同培养液中合子基因组激活与ROS相关性研究本研究利用实时荧光定量PCR的方法检测了小鼠2-细胞胚胎中ZGA相关基因(Zscan4、MuERV-L、Eif-1a、Hsp70.1)及ROS相关基因(Nox1、Gpx4、Gpu6、Prdx2)的表达,并利用ROS特异性染料DCFH-DA对胚胎胞质内ROS水平进行检测。首先比较了阻滞品系小鼠KM与非阻滞品系小鼠BDF1受精卵在M16培养液中发生阻滞的情况,结果表明,在M16培养液中,KM小鼠受精卵的4-细胞发育率为44.2%,而BDF1小鼠受精卵的发育率为90.3%,KM小鼠2-细胞胚中ZGA相关基因MuERV-L、Eif-1a的表达量显着低于BDF1小鼠2-细胞胚(P<0.05)。KM小鼠2-细胞胚胎的胞质内ROS水平明显低于BDF1胚胎,ROS相关基因Gp和Prdx2的表达显着高于BDF1小鼠。以上研究表明,小鼠胚胎发育阻滞与ZGA相关基因表达有关,ROS水平的差异反映出不同品系小鼠胚胎对ROS的耐受性不同。之后利用M16培养液和KSOM培养液比较了阻滞品系KM小鼠胚胎在不同培养液条件下的发育。结果显示,在KSOM培养液中,KM小鼠受精卵的4-细胞率为90.8%,不发生2-细胞阻滞。KSOM培养液中培养的KM小鼠2-细胞胚胎Eif-1a、Hsp70.1表达量显着高于M16培养液中培养的2-细胞胚胎。两种培养液中的KM小鼠2-细胞胚胎的胞质内ROS水平和ROS相关基因表达无明显差异。以上研究表明,小鼠胚胎体外培养液成分的不同影响ZGA相关基因表达的变化,对小鼠胚胎发育阻滞产生影响。2、ROS对发育阻滞胚胎中线粒体相关机能的影响本实验探究了 ROS在小鼠体外发育2细胞阻滞胚胎中对线粒体相关机能的影响。使用AAPH处理昆明白小鼠体外受精卵,通过荧光探针检测处理组和对照组中线粒体膜电位、线粒体ROS(mtROS)及线粒体分布状态的变化,并利用实时荧光定量PCR检测ROS相关基因、线粒体相关基因(Grm2、Drd2、Polg2、TFAM)mRNA的表达量及mtDNA的拷贝数,利用重亚硫酸盐测序(BSP)检测了线粒体四个相关基因的甲基化变化。研究结果显示,使用1.0 mmol/L浓度的AAPH分别处理的胚胎,具有较高的阻滞率(66.16%)和较低的损伤率(24 h畸形率9.09%,48 h死亡率10.39%),ROS染色实验结果显示,AAPH处理能够使胚胎内胞质ROS水平明显升高,所检测的ROS相关基因mRNA表达量升高。1.0 mmol/L处理后二细胞期胚胎线粒体膜电位及mtROS水平明显高于对照组,mtDNA的拷贝数增加,实时荧光定量PCR结果显示,处理组与对照组的Grm2、Drd2、Polg2、TFAM基因表达量呈现显着性差异,处理组Grm2、Drd2表达显着低于对照组,处理组Polg2、TFAM表达显着高于对照组。利用亚硫酸盐测序(bisulfite genomic sequencing,BSP)方法检测DNA甲基化的结果,AAPH处理之后的胚胎中基因调节区DNA甲基化水平升高;Polg2、TFAM甲基化水平降低。以上研究表明,AAPH处理引起的氧化应激反应及发育阻滞的胚胎中,线粒体活性升高,线粒体数目增加,线粒体相关基因表达变化,表明线粒体参与调节细胞内ROS的动态平衡,ROS可能通过影响线粒体相关基因启动子区DNA甲基化的变化调控线粒体相关基因的时序性表达。综上所述,不同品系小鼠胚胎对ROS的耐受性不同,体外培养环境中小鼠胚胎发育阻滞与ZGA相关基因表达有关,线粒体参与调节细胞内ROS的动态平衡影响胚胎发育。本研究初步探究了 ROS与线粒体相关功能变化的关系,为优化哺乳动物胚胎体外培养体系提供参考。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2017-06-02）
林莹[7]（2017）在《鸦胆子苦醇对小鼠早期胚胎发育的阻滞作用及其机制探究》一文中研究指出哺乳动物的早期胚胎发育的分子调控是生命科学研究的重要课题之一,是精细而又复杂的有序调控过程,包括受精卵的分裂、紧密态、桑葚胚和囊胚的形成。植入前胚胎的正常发育对胚胎着床及产生健康子代的十分重要,在此期间胚胎受到众多蛋白因子的调控,任何基因表达异常都有可能导致受精卵发育障碍。虽然已有很多文献报道哺乳动物的植入前胚胎发育的相关研究,但是对于其潜在的分子机制仍不十分清楚。因此,研究可能影响胚胎发育的因素,对于揭示哺乳动物生殖规律、改善胚胎质量以及预防出生缺陷提供新的理论基础和临床依据。Nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2),是细胞内一种重要的转录因子,众所周知的是调节着体细胞及肿瘤细胞内众多抗氧化反应,可增强细胞对氧化应激和亲电子化学物质的抗性。生理条件下,含有Cul3泛素连接酶活性的Keapl可以降解Nrf2蛋白,Keapl-Nrf2体系使可诱导的抗氧化防护和细胞的生物能学协调的结合起来。中药鸦胆子是一种常用的抗肿瘤中草药,鸦胆子苦醇(Brusatol)是来源于鸦胆子的主要成分,是一种Nrf2的天然抑制剂。本实验选用昆明小鼠植入前胚胎为实验材料,利用Brusatol抑制Nrf2蛋白表达,验证Nrf2在小鼠植入前胚胎发育中的表达,探究不同浓度的Brusatol对植入前胚胎发育潜能的影响,评估Nrf2对维持胚胎质量过程中贡献。本课题研究用不同浓度Brusatol处理小鼠植入前胚胎的合子期细胞,观察细胞在不同浓度下的发育率并筛出最佳浓度;应用免疫荧光检测Nrf2蛋白在小鼠植入前胚胎发育的不同时期即2-细胞、4-细胞、桑葚胚和囊胚的表达和定位;通过实时荧光定量PCR方法检测细胞周期相关基因及其激酶在2-细胞期胚胎的mRNA水平表达的变化并通过EdU检测细胞周期;Western blot验证Brusatol对Nrf2蛋白表达的影响;再通过合子期添加Brusatol的同时过表达Nrf2激活质粒证明Nrf2确实在其中发挥作用;最后通过γ-H2AX抗体染色分析细胞中DNA损伤程度。研究结果表明Brusatol确实可以下调Nrf2蛋白的表达。免疫荧光分析发现从2-细胞期到囊胚期Nrf2主要定位在细胞质并且富集在细胞核。不同浓度的Brusatol处理后细胞发育率随浓度升高成负相关,用200 nM Brusatol处理后几乎没有细胞发育到4细胞期,并且大部分细胞停滞在2-细胞期。我们进一步用RT-PCR检测发现和对照组相比,Brusatol抑制剂组的Cyclin B及其激酶CDK1和Cyclin E及其激酶CDK2以及其下游Rb的mRNA水平均降低。γ-H2AX染色后荧光显微镜分析发现细胞核并未被着色说明Brusatol处理细胞可能不是通过DNA损伤来发挥作用。显微注射后同时添加Brusatol后观察细胞发育的潜能与只添加Brusatol组相比显示恢复了部分发育潜能。因此我们得出结论,在小鼠早期胚胎发育中Brusatol确实可以抑制Nrf2蛋白表达,并且结果表明抑制Nrf2表达可影响有丝分裂细胞周期,这可能是体外胚胎发育障碍的主要原因之一。Brusatol可能主要通过下调Nrf2,进而影响Cyclin B-CDK1促进细胞周期由G2向M期转变,进而影响小鼠早期胚胎发育。(本文来源于《南京师范大学》期刊2017-04-25）
徐礼杰,李钟淑,方南洙[8]（2016）在《吡格列酮对MZT期小鼠胚胎发育阻滞的影响》一文中研究指出本研究旨在了解活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、发育阻滞与抗氧化物吡格列酮(Pioglitazone,PIO)之间的关系。试验分3组:对照组、H_2O_2处理组和H_2O_2+PIO处理组。通过H_2O_2建立小鼠胚胎氧化损伤模型,添加抗氧化物质PIO对胚胎进行氧化修复,DCHFDA测定胚胎内部ROS水平,半定量PCR测定母型-合子型胚胎内部相关母性效应基因和合子型基因的表达。结果表明:(1)1-细胞和2-细胞胚胎H_2O_2处理组的ROS水平明显比对照组和H_2O_2+PIO处理组的高(P<0.05);(2)H_2O_2处理组的2-细胞向4-细胞过渡率明显比对照组和H_2O_2+PIO处理组低(P<0.05),但各处理组之间1-细胞向2-细胞过渡率差异不显着(P>0.05);(3)H_2O_2处理组的母性效应基因Hsf1、Zfp3612、Zp3和合子型基因Eif1-α、Zscan4d和Muerv-L的表达明显比对照组和H_2O_2+PIO处理组低(P<0.05)。综上表明,氧化应激通过下调2-细胞胚胎母型效应基因和合子型基因表达,导致小鼠胚胎2-细胞发育阻滞,抗氧化物质吡格列酮可促进胚胎发育,有效克服胚胎体外2-细胞发育阻滞现象。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2016年11期）
胡德宝[9]（2016）在《ROS诱发P53介导的信号通路对小鼠早期胚胎发育阻滞的影响》一文中研究指出近年来,胚胎移植技术、胚胎分割技术、胚胎干细胞工程等极大地促进畜牧业的发展,而这些新技术的应用却受到的胚胎来源的制约。胚胎在体外发育过程中,常常会发生阻滞现象,潜在的机制迄今还未明了。ROS是生物体内产生的超氧阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(·OH)等活性含氧化合物的总称。课题组前期研究表明,胚胎在体外培养过程中,会产生ROS导致胚胎氧化应激现象,但其详细的作用机理还不明确。肿瘤抑制蛋白P53作为一种细胞周期和细胞凋亡的调控者,与氧化应激反应具有密切关联,但其在胚胎中所起的作用知之甚少。所以我们假设P53在胚胎体外发育过程中在发生氧化应激时扮演重要作用,围绕ROS与P53之间的信号通路的调控作用,深入探讨ROS引起小鼠胚胎体外发育阻滞现象的机制。为此,本研究做了以下方面的实验：实验一、过氧化氢诱导的胚胎氧化应激反应首先探讨不同浓度的过氧化氢以及不同浓度抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对胚胎发育的影响,筛选出本实验最佳的胚胎氧化应激模型为后续实验做准备。结果表明,随着过氧化氢浓度的增加(25μM、50μM、100μM)胚胎4细胞发育率、囊胚率显着性降低(p<0.05),从中优选出50μM/L的过氧化氢为最佳应激浓度,且在添加不同浓度(1mM、5mM、25mM)的NAC实验中,5mM时4细胞率、囊胚率显着高于其他组(p<0.05),确定了5mM为最佳抗氧化浓度。观察胚胎内部ROS水平发现,过氧化氢能显着性增加胚胎内部ROS水平,添加NAC能显着降低胚胎中ROS水平。同时,本实验结合PI染色,发现过氧化氢刺激的胚胎PI染色相对其他组较高。为进一步评估氧化损伤程度,对脂质过氧化产物MDA测定发现,过氧化氢刺激的胚胎MDA含量显着性升高。因此,证明了一定浓度的H2O2能够引起胚胎氧化应激,导致ROS升高、MDA表达增加的胚胎发育阻滞现象。实验二、ROS诱导P53信号通路对胚胎发育的影响实验主要探讨应激后的胚胎ROS是如何调控P53及其相关信号通路的变化引起阻滞现象发生。实验结果表明,过氧化氢能够导致P53基因表达上调,细胞周期相关基因cdc2、CDK4、CDK6下调,尤其是cdc2基因显着性的降低(p<0.05),而且在蛋白水平上也发现H2O2能够引起P53-ser15磷酸化蛋白表达升高以及相应的P53蛋白高表达；为了进一步探讨ROS引起的相关基因变化是由P53介导发生,通过抑制剂PFT-α干扰P53表达,结果发现,在P53基因、P53-ser15磷酸化蛋白和P53蛋白表达显着性抑制后,GADD45、P21基因的nRNA表达水平显着性下调,而细胞周期基因cdc2的表达显着性高于对照组与过氧化氢组(p<0.05),暗示出在抑制P53表达后,相关检验点基因与细胞周期基因的表达与抑制前相比发生了明显相反改变,因此ROS引起的胚胎发育阻滞现象可能是通过氧化应激诱导P53介导的信号通路诱发的。实验叁、P53在早期胚胎中的氧化还原作用本章实验继续从氧化酶的角度,更深入讨论的P53对早期胚胎体外发育的调控。实验首先观察了抑制P53的表达对胚胎内ROS水平的影响,其后测定了不同处理下对抗氧化酶和促氧化酶的基因mRNA、蛋白表达的影响,来观察P53对胚胎内氧化还原系统的影响。结果表明,抑制P53表达会增加ROS含量,抑制抗氧化酶SOD、GPX等表达。在无应激胚胎中低水平P53可以增加抗氧化酶SOD、GPX等表达,对促氧化酶BAX、PUMA等表达无影响。在胚胎受到氧化应激时,会诱导高水平P53表达,抑制抗氧化酶SOD、GPX等表达,增加促氧化酶BAX、PUMA等表达。综上所述：本实验结果表明ROS可以诱导体外发育的早期胚胎发生氧化应激现象,导致胚胎内脂质过氧化、胚胎发育受阻等现象的发生。ROS导致胚胎应激,可以诱导P53的高表达,从而刺激其下游控制检验点基因GADD45a、P21的表达来降低细胞周期进程相关基因cdc2、CDK4的表达,导致细胞发生阻滞现象。为了验证这种关系,对P53进行了抑制实验,充分证明了以上结果。此外,在对抗氧化酶与促氧化酶的研究中发现,P53可以根据其表达水平高低,来进行抗氧化酶SOD、GPX、SESN2和促氧化酶BAX、PUMA等的调控。综上所述,本实验结果揭示了ROS可通过调节P53信号通路方式对体外发育的早期胚胎产生影响。(本文来源于《延边大学》期刊2016-05-24）
胡军和,阳仲斌,李伟,金晨钟,曾智[10]（2015）在《p66~(Shc)基因调控早期胚胎发育阻滞的研究进展》一文中研究指出在胚胎早期发育过程中,存在易停留在某个阶段的现象,称之为发育阻滞,如小鼠胚胎的2-细胞阻滞等。从分子结构及功能、调控活性氧水平和作用网络方面,综述了p66Shc基因调控早期胚胎发育阻滞的研究进展,以期对该领域的研究提供借鉴。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2015年22期）
胚胎发育阻滞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨胚胎发育阻滞的分子机制,为提高辅助生殖成功率提供新思路。方法单细胞转录组测序技术研究发育阻滞胚胎(包括体外受精和胞质内单精子注射过程)及对照组的转录组情况,利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)等生物信息学手段分析与胚胎阻滞相关的信号通路和关键基因。结果阻滞胚胎中与细胞分裂、细胞周期等相关的信号通路表达异常。与ICSI组相比,IVF组阻滞胚胎的细胞骨架、氧化磷酸化等通路表达异常。结论通过单细胞转录组测序技术分析阻滞胚胎转录组的结果说明细胞分裂、周期、代谢等通路可能影响胚胎正常发育,ICSI过程影响了线粒体功能、结构的变化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胚胎发育阻滞论文参考文献
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