肺炎链球菌C多糖含量检测方法的建立

肺炎链球菌C多糖含量检测方法的建立

论文摘要

目的使用肺炎链球菌C多糖单克隆抗体(单抗),建立检测荚膜多糖中残留的C多糖含量的方法。方法选择BALB/c雌性小鼠,采用体内诱生单抗腹水,放大生产肺炎链球菌C多糖单抗;使用间接ELISA、抑制性ELISA对其进行特异性鉴定;用特异性和亲和力高的单抗尝试建立肺炎链球菌荚膜多糖中C多糖含量检测的速率比浊法,并对该方法的线性、精密度、特异性进行验证。结果所制4株单抗的抗体类别均为IgM,识别的抗原表位互不相同,亲和力也不同。间接ELISA、抑制性ELISA结果均显示,所获得的单抗能够作用于肺炎链球菌C多糖上的磷酸胆碱位点,具有很好的特异性。选择单抗E8建立速率比浊检测方法的线性、精密度和特异性均良好,检测结果表明肺炎链球菌23个血清型荚膜多糖中C多糖含量不同。结论利用单抗建立了检测肺炎链球菌荚膜多糖中残留的C多糖的含量的速率比浊法。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 细胞及抗血清
  •   1.2 实验动物
  •   1.3 荚膜多糖和检测抗原
  •   1.4 主要试剂及仪器
  •   1.5 肺炎链球菌C-Ps单抗的制备和纯化
  •   1.6 小鼠腹水单抗效价的测定
  •   1.7 肺炎链球菌C-Ps单抗抗体Ig类及亚类的鉴定
  •   1.8 单抗识别抗原表位的鉴定
  •   1.9 肺炎链球菌C-Ps单抗亲和指数的测定
  •   1.10 单抗特异性鉴定
  •     1.10.1 间接ELISA检测C-Ps单抗的特异性
  •     1.10.2 抑制性ELISA检测C-Ps单抗磷酸胆碱 (PCho) 位点特异性
  •   1.11 方法的验证
  •     1.11.1 线性
  •     1.11.2 精密度
  •     1.11.3 特异性
  •   1.12 初步应用
  •   1.13 统计学分析
  • 2 结 果
  •   2.1 肺炎链球菌C-Ps单抗的制备与纯化
  •   2.2 肺炎链球菌C-Ps单抗效价的测定
  •   2.3 肺炎链球菌C-Ps单抗Ig类与亚类的鉴定
  •   2.4 单抗识别抗原表位的鉴定
  •   2.5 肺炎链球菌C-Ps单抗亲和指数的测定
  •   2.6 单抗特异性鉴定
  •     2.6.1 间接ELISA检测C-Ps单抗的特异性
  •     2.6.2 抑制性ELISA检测C-Ps单抗PCho位点特异性
  •   2.7 方法的验证
  •     2.7.1 线性
  •     2.7.2 精密度
  •     2.7.3 特异性
  •   2.8 初步应用
  • 3 讨 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 吴元元,李雄雄,沈荣,应莲芳

    关键词: 肺炎链球菌,多糖,单克隆抗体

    来源: 微生物学免疫学进展 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 兰州生物制品研究所有限责任公司中试研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心

    分类号: R392-33

    DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2019.02.004

    页码: 22-28

    总页数: 7

    文件大小: 2259K

    下载量: 140

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